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[摘要] 目的：建立HPLC法测定小儿氨酚黄那敏片马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度。方法：采用HPLC法，色谱柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸氢二钠（含0.02%三乙胺，用磷酸调pH为3.5）（20∶80）；流速：1.0 ml/min；检测波长：260 nm。柱温：30℃。结果：马来酸氯苯那敏检测浓度的线性范围为0.811～8.12 μg/ml（r=0.999 6）。平均回收率为99.21%，RSD为0.25%。结论：方法灵敏，可靠，简单可行，可用于该制剂的马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度测定。
[关键词] 小儿氨酚黄那敏片；马来酸氯苯那敏；HPLC法
[中图分类号] R927 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2010）10（c）-028-02
HPLC determination of content and content uniformity chlorphenamine maleate inChildren Anfenhuangnamin tablets
JIAO Fuzhe1, GAO Jianling2
(1.Nanyang Health School for Medical Workers, Henan Province, Nanyang 473000, China; 2. Nanyang Medical College, Henan Province, Nanyang 473000, China)
[Abstract] Objective: To establish an HPLC method for determination of content and content uniformity chlorphenamine maleate inChildren Anfenhuangnamin Tablets. Methods: The Kromasil C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used, acetonitrile-0.05 mol/L Na2HPO4 (have 0.02% triethylamine, adjust pH to 3.5 by H3PO4) - (20∶80） as the mobile phase. The detection wavelength was at 260 nm, the flow rate was 1.0 ml/min. The temperature of the column at 30℃. Results: the linear range was 0.811～8.12 μg/ml (r=0.999 6) for chlorphenamine maleate and the average recovery was 99.21% with RSD was 0.25%. Conclusion: The method is simple, reliable and sensitive. This method can be used for the determination of content and content uniformity of chlorphenamine maleate in Children Anfenhuangnamin Tablets。
[Key words] Children Anfenhuangnamin Tablets；Chlorphenamine maleate；HPLC
小儿氨酚黄那敏片是由对乙酰氨基酚，马来酸氯苯那敏与人工牛黄组成的复方制剂，是临床常用抗感冒药物[1]。马来酸氯苯那敏，系抗组胺药，有一定的副作用，其在制剂中含量较低，不易混匀。现行检验标准[2]采用紫外分光光度法测定乙酰氨基酚的含量，对马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度未作规定，有人报道采用HPLC法测定小儿氨酚黄那敏片中马来酸氯苯那敏含量，但未对其含量均匀度作出测定[3-4]。本文采用HPLC法，对马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度进行测定，操作简便，快速，准确，重复性好，为该品种检验标准的修订提供一个依据。
1 仪器与试药
日本岛津LC-2010CHT高效液相色谱仪。AEL-200电子天平（上海分析天平厂）。超声波清洗器（上海金利超声公司）。马来酸氯苯那敏对照品（批号：100047-200305），购自中国药品生物制品检定所，含量为100%。小儿氯酚黄那敏片（对乙酰氨基酚0.125g/片，马来酸氯苯那敏0.5 mg/片）为市售，批号：20080103、20071218、20080412，甲醇和乙腈为色谱纯，水为去离子水。其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1对照品溶液的制备
精密称取经105℃干燥至恒重的马来酸氯苯那敏对照品约8 mg置200 ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得对照品贮备液。精取对照品贮备液5 ml，置50 ml棕色量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，得对照品溶液。
2.2供试品溶液的制备
精密称取供试品适量（约相当于对乙酰氨基酚50 mg），置100 ml棕色量瓶中，加流动相适量，超声处理15 min，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，即得。另取缺对乙酰氨基酚，马来酸氯苯那敏的阴性样品同法制得阴性样品对照液。
2.3色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.05 mol/L磷酸氢二钠（含0.02%三乙胺，用磷酸调pH为3.5）（20∶80）；流速：1.0 ml/min；检测波长：260 nm。柱温：30℃进样量：20 μl[5]。见图1。
2.4 线性关系考察
分别精密量取对照品贮备液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml置50 ml棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样，各20 μl，记录色谱图。以峰面积为纵坐标（Y），以对照品浓度（μg/ml）为横坐标（X），得马来酸氯苯那敏的回归方程分别为：Y=2.62×104X+2.44×103（r=0.999 6），线性范围分别为0.811～8.12 μg/ml。
A.对照品；B.供试品；C.阴性供试品；1.马来酸氯苯那敏
2.5精密度试验
精密吸取对照品溶液20 μl，重复进样5次，测得马来酸氯苯那敏峰面积的RSD为0.36%。
2.6重复性试验
精密称取同一批号的样品6份，分别按供试品溶液制备方法操作测定含量，按外标法计算马来酸氯苯那敏的含量，结果平均含量为相对标示量的99.8%，RSD为0.98%（n=6）。
2.7稳定性试验
取含量测定项下的同一份供试品溶液，在室温下放置0、2、4、6、8、10、12 h同法测定，记录峰面积，RSD为0.82%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.8回收率试验
取已知含量的批样，分别精密称取样品适量（约相当于对乙酰氨基酚50 mg），置100 ml棕色量瓶中，分别精密加入马来酸氯苯那敏对照品贮备液4.0、5.0、6.0 ml（浓度为40.55 μg/ml）各3份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，进样20 μl，测定，按外标法计算含量，结果见表1。
2.9 样品含量测定
小儿氨酚黄那敏片样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液和按“2.1”项下方法制备对照品溶液，各进样20 μl，测定，按外标法以峰面积计算。马来酸氯苯那敏含量测定结果详见表2。
3 样品含量均匀度测定
取样品10片，分别置研钵中研细，用适量流动相转移至100 ml棕色量瓶中，超声处理15 min，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，精密量取滤液10 ml至25 ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀做为供试品溶液。进样20 μl，测定，按外标法计算含量，结果见表3。符合《中国药典》2005年二部附录XE含量均匀度项下有关规定（A+1.80 S≤15.0）。
4 讨论
本法采用LC-MS分离技术[6]，选用的流动相保留时间短，分离效果好，在流动相中加入三乙胺，对分离和保留时间虽然没有明显的影响，但可改善主峰的拖尾现象，流动相的pH值改为3.5时，峰形较理想。按本品处方配制的空白溶液在该色谱条件下无吸收，不影响待测成分的测定。
[参考文献]
[1]欧阳吉德,王灿,胡雯婷,等.小儿氨酚黄那敏颗粒质量标准的研究[J].药物分析杂志,2009,29(8):1352-1355.
[2]国家药品标准(化学药品地方标准上升国家标准)[S].(第三册).50
[3]施猛,严玲,谷容斌.HPLC法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量[J].中国民族民间医药杂志,2009,18（12）: 18-19.
[4]林瑞群.HPLC法测定小儿氨酚黄那敏片中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量[J].中国药师,2009,12（4）：479-481.
[5]郭凡岭,赵新静.HPLC法测定维C银翘片中马来酸氯苯那敏含量均匀度[J].药物分析杂志,2005,25(2):223.
[6]孙毓庆,王延琮.现代色谱法及其在医药中的应用[M].北京:人民卫生出版社,1998:198-200.
（收稿日期：2010-08-11）
