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[摘要] 目的：建立双花百合片中绿原酸的含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为Eclispse XDB C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相为0.4%磷酸溶液-乙腈（85∶15），柱温为25℃，流速为0.8 ml/min，检测波长为327 nm。结果：绿原酸在0.10~5.00 μg范围内呈良好的线性关系（r=0.999 7），平均回收率为99.60%，RSD=1.56%（n=6）；测得3个批次双花百合片样品中绿原酸含量分别为0.08、0.10、0.09 mg/片。结论：该方法操作简单，灵敏度高，重现性好，测定结果可靠，可用于双花百合片中绿原酸含量的测定。
[关键词] 双花百合片；绿原酸；含量测定；高效液相色谱法
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] C[文章编号] 1674-4721（2011）07（b）-038-02
Determination of chlorogenic acid in Shuanghua Baihe tablet by HPLC
SHI Guoju
Department of Pharmacy, People"s Hospital in Shangcai County, Henan Province, Shangcai 463800, China
[Abstract] Objective: To establish the method for determination of the chlorogenic acid in Shuanghua Baihe tablet. Methods: Eclispse XDB C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was used as stationary phase, 0.4% phosphoric acid-acetonitrile (15:85) was used as mobile phase, at the rate of 0.8 ml/min, the detective wavelength was 327 nm. Results: The linear range of chlorogenic acid was between 0.10 and 5.00 μg (r=0.999 7), and the average recoveries was 99.60%, RSD was 1.56% (n=6). Each tablet contains chlorogenic acid 0.08, 0.10, 0.09 mg in 3 batches of sample. Conclusion: The method is simple, high sensitivity, good reproducibility and reliable in results, and can be used as the determination of the chlorogenic acid in Shuanghua baihe tablet.
[Key words] Shuanghua Baihe tablet; Chlorogenic acid; Determination of contents; HPLC
双花百合片是由黄连、苦地丁、生地黄、板蓝根、紫草、金银花、淡竹叶、蛇胆、百合、细辛等药味组成的中成药制剂，具有清热泻火，解毒凉血之功效，可用于复发性口腔溃疡、口腔白斑、口腔扁平苔藓、白塞综合征等病症[1]，绿原酸是该方药中的重要抗菌活性成分。为控制双花百合片的内在质量，本研究特采用HPLC法测定该制剂中绿原酸的含量，为双花百合片的质量控制提供了参考性资料。现将资料报道如下：
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent1200型高效液相色谱仪：四元梯度泵，柱温箱，二级管阵列检测器，Chemistation色谱工作软件；KQ-700DV型数控超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）；FA1004型电子分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）。
1.2 试药
绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号110753-200811，供含量测定用）；乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯；双花百合片（自制，批号100318、100412、100509）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Eclispse XDB C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：0.4%磷酸溶液-乙腈（85∶15）；检测波长：327 nm；流速：0.8 ml/min；柱温：25℃；理论板数按绿原酸峰计，应不低于5 000[2-3]。
2.2 对照品溶液的制备
取绿原酸对照品适量，精密称定，至100 ml棕色量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为0.50 mg/ml的绿原酸对照品溶液，备用。
2.3 供试品溶液的制备
取双花百合片10片，精密称定，研细，取适量（约相当于5片的量），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足缺失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，弃初滤液，取续滤液作为供试品溶液[4]。
2.4 线性关系考察
精密吸取对照品储备液0.1、0.5、1、2、4、5 ml，分别置于5 ml容量瓶中，分别用甲醇稀释至刻度，摇匀，吸取以上对照品溶液各10 μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标，绿原酸对照品进样量（X）为横坐标，进行线性回归。得回归方程为Y=1 364.47X+6.10，r=0.999 7，结果表明，绿原酸在0.10~5.00 μg范围内有良好的线性关系。
2.5 稳定性试验
取同一份供试品溶液分别在0、2、4、6、8、12 h，按上述色谱条件进样，测定绿原酸的色谱峰面积，结果峰面积的RSD 为1.29%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。
2.6 精密度试验
精密吸取浓度为0.50 mg/ml的绿原酸对照品溶液，按上述色谱条件进样，重复进样5次，测定绿原酸的色谱峰面积，结果峰面积的RSD为1.32%，表明该仪器的精密度较好。
2.7 重复性试验
取同一批供试品6份，按供试品溶液项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样，测定绿原酸的色谱峰面积，结果峰面积的RSD为1.21%，表明该方法的重现性较好。
2.8 加样回收率试验
取已知绿原酸含量的双花百合片（批号100318，绿原酸含量为0.08 mg/片，平均片重为0.15 g/片）相当于2片的量6份，精密称定，分别加绿原酸对照品各约0.160 mg，按供试品溶液项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样，测定绿原酸的色谱峰面积，计算回收率。结果显示，6份样品的加样回收试验结果良好，结果见表1。
2.9 样品含量测定
取不同批次的双花百合片样品共3批，按供试品溶液项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样，测定绿原酸的色谱峰面积，计算出样品中绿原酸含量。测得3批样品中绿原酸含量分别为0.08、0.10、0.09 mg/片，平均为0.09 mg/片。
3 讨论
本研究采用超声提取法对双花百合片中绿原酸进行提取，参照2010版《中国药典》中绿原酸的含量测定方法，通过HPLC法测定双花百合片中绿原酸含量，该方法具有简单、易于操作、重现性好、测定结果可靠等优点[5]。
本研究结果显示，双花百合片中绿原酸的含量平均为0.09 mg/片，该方法的精密度试验、稳定性试验、重现性试验及加样回收率试验结果均较好，可为双花百合片在生产过程中的质量控制提供参考性资料依据。
[参考文献]
[1]兰金初.双花百合片治疗复发性口腔溃疡160例[J].环球中医药,2010, 3(1):73.
[2]中华人民共和国药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2010:223-224.
[3]胡生俊,徐岳鑫,董赛文,等.高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量[J].中国药业,2011,20(3):33.
[4]陈云松.HPLC法测定牛黄消炎片中大黄酚的含量[J].中国当代医药,2011,18(1):43-44.
[5]袁梦哲,李绍峰.HPLC法测定清热解毒口服液中绿原酸的含量[J].数理医药学杂志,2011,24(1):91-92.
（收稿日期：2011-05-31）
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