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[摘要] 目的：探讨p21、p27、bcl- 2蛋白在大肠癌、大肠腺瘤及正常大肠黏膜中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化方法,分别检测20例正常大肠黏膜、22例大肠腺瘤和69例大肠癌中p21、p27、bcl- 2蛋白表达情况。结果：p21、p27、bcl- 2蛋白总阳性表达率分别为44.93%、50.72%、52.17%，各种蛋白的阳性表达率在大肠癌组织与对照组间存在的差异有统计学意义(P 鼠抗人p21、p27、bcl-2单克隆抗体、抗体稀释液及试剂盒均购自基因公司。p21稀释度为1∶50，P27、bcl-2稀释度为1∶200。所有标本均用10 %中性甲醛固定,石蜡包埋,4 μm 连续切片,按二步法法进行免疫组化染色,染色前标本切片进行抗原修复处理，一抗在室温孵育1 h，二抗在室温下孵育0.5 h，DAB 显色，苏木素复染。用已知阳性的大肠癌标本作p21、p27、bcl-2抗体的阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.3判断标准
所有免疫组化片子用奥林帕斯BX50显微镜进行定性和半定量评估。请3个高职称病理医生在不知道临床信息的情况下独立的对所有免疫组化片子进行评估。阳性判断标准为细胞核、细胞浆和(或)细胞膜出现了黄色或棕黄色颗粒状,并用阳性片作为对照。每张切片随机选择10个视野,40×10 高倍显微镜下观察计数。
p21参照文献[1]方法根据染色的强度及阳性细胞的数量分别记分。A :染色强度，不着色为0 分,淡黄色为1 分,黄色为2 分,棕黄色为3 分。B :阳性细胞所占百分率，75％为4分。根据染色强度与阳性细胞数得分之和分为4级,即(－)为0分,弱阳性( + )为1～2分,阳性(++)为3～4分,强阳性(+++)为5～6分。将A×B作为其染色的计数,只有A×B>3分才算免疫反应阳性,并按乘积分数将染色结果分为4个等级:- (0～2分)、+ (3～5分) 、+ + (6～8) 分和+ + + (9～12) 分。≥6分为高表达, 3分才算免疫反应阳性,并按乘积分数将染色结果分为4个等级:- (0～2分) 、+ (3～5分) 、+ + (6～8) 分和+ + + (9～12) 分。≥6分为高表达, 0.05)（表2）。
p27表达在69例大肠癌中阳性表达率为50.72%（图2）; 22例大肠腺瘤中阳表达率为86%; 20例正常黏膜中阳性表达率为90%。正常黏膜与大肠腺瘤的阳性表达率基本相同(P>0.05)，两者的阳性表达率与大肠癌相比差异有统计学意义(P0.05) （表2）。
bcl-2表达在69例大肠癌中阳性表达率为52.17%（图3）;22例大肠腺瘤中阳表达率为50%;20例正常黏膜中阳性表达率为20%。大肠癌与腺瘤的阳性表达率基本相同（P=0.859 0），两者的阳性表达率与正常大肠黏膜相比差异有统计学意义(P0.05)。从而表明p21能够预测大肠癌预后,可以作为肿瘤的一个标记物，并可作为一种临床诊断标记,便于早期发现,早期诊断,也可作为潜在的治疗靶点,进而有效地降低肿瘤的生物学恶性程度,提高患者的生存质量,并延长其生存时间,有一定的临床意义。
p27是近年发现的与细胞周期调控相关的重要基因, 其表达产物p27蛋白参与细胞的增殖、分化调控和凋亡, 对细胞周期具有负调控作用, 被认为是抑癌基因[6]。Loda等[7]采用免疫组化的方法分析了149例原发性结肠癌中p27的表达，应用多因素分析表明,p27是独立的预后指标。尤其在Ⅱ期肿瘤,p27kipl缺乏对结肠癌是一个有力的负性预后指标, 有助于确定哪些病人可进行辅助治疗, 使p27kipl无表达或低表达者从中受益。本组研究中, 正常大肠黏膜、大肠腺瘤和大肠癌中均有p27kipl表达, 腺瘤及正常大肠黏膜的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)，大肠癌的阳性表达率与大肠腺瘤及正常大肠黏膜比较差异有统计学意义(P0.05)，故p27蛋白检测可作为评价大肠癌恶性程度的重要指标。
bcl- 2作为抑制凋亡的基因,其过表达能延长细胞寿命,使已有DNA 受损的细胞生存期延长,以致增加其他基因突变的机会, 从而导致肿瘤的发生[8]。研究表明，大肠黏膜细胞内bcl-2表达增强,可能是大肠癌发生的早期事件并影响大肠癌的进程[9，10]。本组研究中, 正常大肠黏膜、大肠腺瘤和大肠癌中均有bcl-2表达，大肠腺瘤与大肠癌的阳性表达率差异无统计学意义， 大肠腺瘤及大肠癌的阳性表达率与正常大肠黏膜比较, 差异有统计学意义(P
