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[摘要] 目的：研究提高广东神曲的质量标准，建立具有特征性的广东神曲显微鉴别和高效液相含量测定。方法：采用中药材粉末显微鉴定，寻找广东神曲在显微镜下的茯苓和猪苓药材的特征性细胞；用高效液相法测定广东神曲中黄芩药材的含量。结果：显微鉴定显示茯苓和猪苓药材特征性强；含量测定方法显示黄芩药材中黄芩苷检测操作简单，准确，黄芩苷在10.25～328.00 μg之间呈良好的线性关系，黄芩苷的回收率为99.82%。结论：对茯苓和猪苓药材定性及黄芩药材定量方法准确、简便，可用于控制广东神曲的质量。
[关键词] 广东神曲；茯苓和猪苓药材；黄芩苷；显微鉴别；高效液相色谱法
[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）01（b）-043-03
The research of microscopical identification and content determination (HPLC method) for Guangdong Shenqu
ZHOU Yanshuang, HUANG Huilian, SONG Lili
Wanglaoji Pharmaceutical Company Limited in Guangdong Province, Guangzhou 510450, China
[Abstract] Objective: To improve the quality standard of Guangdong Shenqu, methods of microscopical identification for the characteristic identification and a HPLC method for determining the content of Guangdong Shenqu were established. Methods: Microscopical identification method for identification of the herbal powder was used to look for the characteristic cells of the Poria cocos and the Agaric; HPLC was used to determine the content of Baicalin in the Scutellaria Baicalensis. Results: Microscopical identification showed that The Poria cocos and the Agaric had strong characters; HPLC result showed that this method was easy to handle and accurate. In the range of 10.25-328.00 μg, the baicalin showed good linear relationship. The recovery of baicalin was 99.82%. Conclusion: The microscopical identification method for identification of the Poria cocos and the Agaric and the HPLC method for determining the content of Baicalin are both accurate and easy, can be used to control the quality of Guangdong Shenqu.
[Key words] Guangdong Shenqu; The Poria cocos and the Agaric; Baicalin; Microscopical identification; HPLC
广东神曲收载于卫生部《药品标准》中药成方制剂第19册（WS3-B-3547-98），处方由前胡、黄芩、茯苓、猪苓、麻黄、大黄、使君子、百合、甘草和紫苏叶等63味中药粉末组成，具有祛风消滞、健胃和中等功能。主要用于感冒发热、食滞、呕吐、泄泻，也可供配方用[1]。由于原标准质量无定性与定量指标来控制该制剂的质量，本实验对原质量标准进行提高并作了一些探索，对处方中的茯苓和猪苓分别进行了显微鉴别，对黄芩药材采用高效液相法进行了含量测定[2]，能保证更有效地对广东神曲进行质量监控。
1 仪器与试剂
显微镜：OLYMPUS BX-41系统生物显微镜；摄像放大倍数：10×40；数码成像装置：MC30；高效液相色谱仪：岛津20A；检测器：SPD-M20A；色谱柱：Diamonsil（钻石）-C18 ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）；电子天秤：Sartorius-CPA225D，十万分之一；甲醇：色谱纯，Merck KGaA；水：超纯水；其余试剂：均为分析纯；黄芩苷（批号：110715-200514，中国药品生物制品检定所购进）；广东神曲（广州王老吉药业股份有限公司生产）。
2 实验方法与结果
2.1 茯苓、猪苓药材粉末显微鉴别
将样品进行显微特征描述，其相同的显微特征为：本品粉末浅褐色至黄褐色。其中茯苓药材粉末遇水合氯醛液黏化成胶冻状，加热团块物溶化，露出菌丝，菌丝无色或带棕色（外层菌丝），较细长，稍弯曲，有分支；猪苓药材粉末遇水合氯醛液黏化成胶冻状，加热后菌丝团块部份溶化，露出菌丝，菌丝细长，弯曲，有分枝，粗细不一[3]。药材显微特征见图1、2。
2.2 黄芩含量测定
2.2.1 波长测定
岛津20A高效液相色谱仪，检测器：SPD-M20A。配制黄芩苷对照品溶液及广东神曲（缺黄芩）阴性对照溶液，在200～800 nm波长范围内进行光谱扫描。扫描结果显示黄芩苷对照品溶液在276 nm处有最大吸收波长，广东神曲（缺黄芩）阴性对照溶液，在276 nm处无吸收波长[4-6]。参照《中国药典》（2010年版1部）黄芩质量标准，选定280 nm为检测波长，结果见图3、4。
2.2.2 色谱条件
流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（47∶53）；检测波长：280 nm；色谱柱：Diamonsil（钻石）ODS-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）HPLC；柱温：35℃。理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于3 000[7-8]。
2.2.3 供试品溶液与对照品溶液配制
2.2.3.1 供试品溶液的配制 取广东神曲2.0 g，精密称定，放置于具塞锥形瓶中，精密量取70%乙醇50 ml，加入，称定重量，水浴中回流1 h后，取出，放冷至室温，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，即得[4]。
2.2.3.2 对照品溶液的配制 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加入甲醇溶液，制成每1毫升含40 μg黄芩苷的溶液，摇匀，即得。
2.2.3.3 阴性对照品溶液的配制 按广东神曲处方量（缺黄芩药材），配制阴性样品，按以上供试品溶液的制备方法，取同样比例的量，制备阴性对照品溶液。
2.2.4 专属性考察 按上述色谱条件操作，将黄芩苷对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，注入液相色谱仪中，得高效液相色谱图，阴性对照无干扰。结果见图5～7。
2.2.5线性关系考察
取黄芩苷对照品溶液，分别为每1毫升各含10.25、20.50、41.00、82.00、164.00、328.00 μg，以10 μl为进样量，按上述所制定的色谱条件进行测定，得峰面积。以各峰面积为纵坐标，各对照品的浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程，黄芩苷：Y＝33 355X-166 389，R2＝0.999 7；得黄芩苷在10.25～328.00 μg呈良好的线性关系。
2.2.6 精密度试验
取对照品溶液10 μl，连续进样5次，测定黄芩苷峰面积值，计算得RSD为0.10%。结果所建立方法具有良好的精密度。
2.2.7 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h内，分别进样10 μl，计算黄芩苷含量，得RSD为1.71%。结果制备的供试品溶液在24 h内稳定。
2.2.8 重复性试验
精密称取同一批号样品，按供试品溶液制备方法平行制备6份，测定黄芩苷含量，计算，得RSD为1.14%。结果该方法重复性良好。
2.2.9 加样回收率试验
精密称定已知含量的神曲样品1.0 g，分别精密加入一定量的黄芩苷对照品溶液，测定，计算回收率，结果见表1。
2.2.10 样品测定
分别精密称定三个批号的广东神曲，进行含量测定分析，结果见表2。
3 讨论
广东神曲处方中的药材由63味药组成，且在显微下的细胞组织都具有共性或非常相似，只有茯苓与猪苓药材的菌丝比较有特征性，但由于处方药材量大，故在寻找茯苓与猪苓药材特征性菌丝时也相对与其他植物细胞较困难。茯苓药材粉末菌丝直径3～8 μm，少数至16 μm，横壁偶见；猪苓药材粉末菌丝：直径1.5～6 μm，甚至13 μm，而且棕色菌丝较粗，横壁不明显。处方中的黄芩也是主要成份之一，故只选用了黄芩苷作为本品的含量指标进行考察。黄芩苷的提取用70%乙醇作为溶剂，分别用超声提取30、40、60 min时，加热回流提取1、2、3、4 h时，结果加热回流提取含量高于超声提取含量，而且加热回流分别提取1、2、3、4 h时，提取含量基本相同，故含量测定的标准定为加热回流提取1 h时。对本品中的茯苓和猪苓进行显微鉴别，黄芩作为高效液相色谱法的含量测定，它们特征性强，专属性及重现性好，结果准确可靠，可用于广东神曲中药材的质量控制和分析。
[参考文献]
[1] 中华人民共和国卫生部.药品标准－中药成方制剂（第19册）[S].1998：26.
[2] 国家药典委员会.中国药典（2010年版）[S].一部.北京：化学工业出版社，2010：282，附录Ⅵ D.
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（收稿日期：2011-10-28）
