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[摘要]酶联免疫吸附试验(ELISA)竞争法检测乙型肝炎抗-HBC-lgG(抗-HBC)试剂盒通常是将乙型肝炎e抗原(HbeAg)包被于反应孔,e抗原较乙型肝炎核心抗原(HbcAg)仅多29个氨基酸,e抗原很容易转变为核心抗原。待测样本中的抗-HBC抗体与酶标抗体竞争结合包被的HbcAg,当样本中的抗-HBC抗体浓度增高时,酶标抗体竞争结合的HbcAg较少,显色降低,呈阳性。但抗-HBC抗体其阳性率是乙型肝炎标志物中最高的(50%～90%)[1],并且单项抗-HBC阳性率也高,可能存在HBC标志物间非特异交叉反应及某些干扰。并且加样时差很容易导致不公平竞争,从而对结果产生影响。本文通过“两对半”不同阳性模式中抗-HBC抗体检测结果的分析发现对部分模式抗-HBC抗体阳性进行复检是非常必要的。
[关键词]乙型肝炎;抗-HBC
[中图分类号]R446.1
[文献标识码]B
[文章编号]1006-1959(2009)12-0225-01
1 资料与方法
1.1 资料与仪器:本院2008年门诊、住院患者做乙型肝炎“两对半”检测的样本共2313例,其中包括抗-HBC阳性者1279例,仪器都为TECAN生产的酶标比色计和洗板机。
1.2 方法:所有样本先用北京万泰公司生产的ELISA一步法试剂盒作“两对半”检测,将抗-HBC抗体结果呈阳性的样本按不同模式进行分组。顺序依次为乙型肝炎表面抗原(HbsAg)、乙型肝炎表面抗体(HbsAb)、乙型肝炎e抗原(HbeAg)、乙型肝炎e抗体(HbeAb)、乙型肝炎核心抗体(HbcAb)。A组:+--++、B组:+-+-+、C组:+---+、D组:---++、E组:-+-++、F组:-+--+、G组:----+。统计各组的样本例数及抗-HBC抗体吸光度(A)≤0.100的样本的数量,然后在各组中分别抽取部分样本复检抗-HBC抗体,重新读取A值并判断阴阳性。所有复检样本的加样均要求在5min内完成。
2 结果
抗-HBC抗体呈阳性的样本共1279例,按不同模式分组后各组的样本数及复检后的变化情况见表1。由表中可见,在A、B、C3组中抗-HBC抗体初检的A值几乎大部分A≤0.100,
表1 不同组别中的样本数及初检、复检的结果
组别初检
样本数百分数A≤0.100A>0.100
复检
样本数A>0.100+-
A38530.1359(84)4(4)902900
B463.640(44)2(2)462460
C372.934(34)0(0)371370
D634.954(50)9(9)5920527
E15512.1134(72)21(21)90427713
F38129.8184(40)197(50)90686426
G21216.6111(43)101(50)90635832
注:括号内数字为抽取用于复检的样本数复检后结果也几乎没有变化,D和E组初检共有30例样本的A>0.100抽取149复检后A>0.100的样本数为62例,F和G共有298例样本数的A>0.100抽取180例复检,A>0.100的样本数为131例,尤其G组为甚,有90例复检样本数中有32例的检测结果变为阴性,但其阳性百分数仍很高(64.5%)。
3 讨论
3.1 对抗-HBC抗体假阳性分析:①ELISA竞争一步法检测乙型肝炎抗-HBC抗体由于预先包被的是HbcAg,当待检样本加样完毕后再加入酶标抗体导致的不公平竞争是显而易见的,当样本量较大时尤其如此,其结果是酶标抗体竞争结合的HbcAg较少,A值下降,阳性率增加。作为乙型肝炎的流行病学指标,抗-HBC抗体在人群的血清中普遍存在,只是浓度不同而已。本文A、B、C 3组初检和复检后的结果几乎无变化,原因可能在于这3组中HbsAg均为阳性造成了抗-HBC抗体的高滴度,所以认为无需复检。D、E组出现的例数相对较少,抗-HBC抗体的浓度相对较高,这两组中的HbeAb均为阳性,作为既往感染的标志,HbeAb为阳性的患者体内可能存在较高浓度的抗-HBC抗体。这两组中的抗-HBC抗体可少量选择性复检。F组中复检A>0.100为68例,抗-HBC抗体复检是应该引起重视的。G组为抗-HBC抗体单独阳性,在复检的90例样本中有32例的检测结果变为阴性,原因是由于加样时差导致的不公平竞争造成的,而且发现初检中A>0.100且编号越靠前的样本,且温度高,经复检后的变化越大。[2、3]②存在HBC标志物间非特异交叉反应。主要是酶标抗-Hbe与HbcAgHBC标志物间非特异交叉反应尤为突出,目前所有生产商的试剂盒都存在此类问题,这种交叉反应的存在可使临床标本中抗-HBC抗体为阴性的标本检测为阳性,而抗-HBC抗体为阳性的标本由于受抗-Hbe交叉引起的叠加作业,使抗-HBc滴度增高,从而导致阳性率和滴度都很高,但交叉反应的机理还有待进一步证实。③丙型肝炎病毒感染的干扰。目前已发现丙肝患者其抗-HBC抗体阳性率明显高于其他对照组,其机制还有待进一步研究[4]。
3.2 对抗-HBC抗体真阳性分析:①由于HbcAg是HBV各种蛋白成分中抗原性最强的[5],因此微量HBV侵入机体,刺激机体最先产生抗体的无疑是抗-HBC,而其他蛋白成分由于量少不足以使机体产生相应抗体或产生的抗体浓度未达到检测方法的灵敏度,从而出现单项抗-HBC抗体为阳性模式。②可能存在HbsAg变异株而导致目前的试剂不能检出HbsAg等其他标志物[4]。③过去的HBV感染,由于抗-HBc比抗-HBs在体内存在的时间长,因此抗-HBs已经消失或在可检测水平以下,而抗-HBc仍存在。④急性HBV感染的“窗口期”或HbsAg/HbeAg已经消失而抗-Hbs/抗-Hbe尚未产生的转换期。
