【www.zhangdahai.com--领导讲话稿】
轮状病毒归属呼肠病毒科，系dsRNA病毒，基因组包含11个节段的dsRNA，分别编码6种结构蛋白和5种非结构蛋白。依抗原性不同区分病毒血清型称G型，至今已确定14种G血清型，其中10种可感染人，以G1一G4在人群中占优势【1-3】。近年来世界各地有关轮状病毒G血清型的流行规律与以往有所变化，因此给疫苗的研制与使用带来新的挑战【4】。国内对轮状病毒分子流行病学的资料多来自北方地区，湖北荆州地区尚未报道。本实验就湖北荆州地区腹泻儿童轮状病毒感染株G血清学的分子流行病学作研究，为国内轮状病毒的预防提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 标本来源 收集我院2009-2011年之间493份标本， 1-3天内即送病毒室用ELISA法检测A组轮状病毒，然后一20oC保存。
1.2 实验方法 ELISA检测采用武汉博士德生物公司的轮状病毒抗原检测盒，方法如下:(l)取粪样约150ul滴于反应孔内;(2)立即滴1滴酶结合50ul，轻拍混匀;(3)室温静置10分钟，甩去，加洗涤液1滴，用自来水冲洗10次以上，甩尽排干;(4)每孔加入显色剂A、B各一滴，置室温5分钟判定结果;(5)结果判定:肉眼观察显蓝色判为阳性“+”，不显色判为阴性“一”。 聚丙烯酞胺凝胶电泳(PAGE)：垂直板状聚丙烯酞胺凝胶电泳，Laemili不连续缓冲系统，浓缩胶浓度3%，分离胶浓度10%。电泳槽中加入电泳液，吸取8ul抽提液与1.5川样品液混匀后点样于电泳道中，每块胶的一个泳道中点入入DNA作对照以区分标本，恒流50mA下电泳约60-90分钟。下胶后银染，固定，保存照相。根据病毒核酸条带的不同特征来区分A、B、C组轮状病毒。
1.3 统计学处理 所有计数资料分析均采用卡方检验。
2 结果
2.1 轮状病毒G血清型的分型结果:493份PAGE检测轮状病毒阳性的标本经重新提取RNA后，328份标本含有足量的RNA被进一步行RT一PCR扩增VP7全基因，共有254份标本(77.4%)获得阳性产物。对RT一PCR产物作杂交分型，结果见表1。254份被分型的轮状病毒株包括社区感染株160份和院内感染株94份。
表1 轮状病毒G血清型的分型结果
2.2 轮状病毒不同血清型的年龄分布 统计结果见表2。 Gl、G2、G3、G4的发病年龄主要集中在4月龄一24月龄的儿童，四种型别的平均发病年龄经统计学分析无显著差异。
表2 轮状病毒不同血清型的年龄分布
3 讨论
本次研究使用RT一PCR及斑点杂交的方法对荆州地区腹泻病儿童的轮状病毒感染G血清学作分型调查。检测结果显示:研究期间在荆州地区轮状病毒G血清型主要是Gl一G3型，G4型偶尔可见，G3型曾经在1999年12月至2000年1月流行，而且此后数月院内感染的轮状病毒株G3型占主导。目前轮状病毒Gl一G4、GS、G6、GS、Gg、G10、G12血清型可感染人类，80年代至90年代初国外地区研究发现在人群中主要发现Gl一G4，同期国内地区的研究发现Gl型最常见约占60%一85%，G2型次之约占12%一29.2%，G3与G4型比较少见【5,6】。发展中国家的情况轮状病毒流行株呈现多样性，如南美洲国家巴西报道G血清型的分布G1、G2、G4都可能成为最常见的G血清型【7】。结合本次研究荆州地区轮状病毒G血清型的分布与国内总体情况相似，与其他发展中国家的情况差异较大。因此对各地区轮状病毒的分子流行病学作监测具有必要性及现实意义。对G血清型与腹泻病的临床特征的相关性作调查对疫苗的发展与应用有指导意义。通过本项研究，我们对荆州地区轮状病毒腹泻的分子流行病学特征有了初步认识，为将来疫苗的引进使用提供必要的背景资料。
参考文献
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