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【摘要】 目的 考察单次静脉注射和口服给予大鼠2,3-吲哚醌后的药代动力学,为该药的新药开发提供依据。方法 大鼠给药后经眼眶静脉采大约0.25 ml血液，采集时间点为：给予受试物前(0 hr)和给予受试物后 5、15、30 min、1、2、4、6、8 h和24 h。血液样本采集后置于冰上，并立即取出50 μl全血采用甲醇蛋白沉淀进行预处理，奎硫平作为内标。预处理后样品采用LC/MS/MS法进行测定，并用药动学处理软件WinNonlin 5.2采用非房室模型计算相关药代动力学参数。结果 Sprague Dawley大鼠静脉注射和口服两种制剂的药动学参数(平均值±标准偏差)如下。静脉注射：T��max为(0.83±0.29)hr，C��max为(141.53±10.99)μg/L，t��1/2为(1.68±0.84)hr，AUC��0-t为(1068.15±389.06)μg/hr/L，AUC��0-∞为(1211.19±469.18)μg•hr/L， Vz为(4.13±1.41)L/kg，CLz为(1.89±0.94)L/hr/kg；口服：T��max为(0.05±0.00)hr，C��max为(1725.53±469.70)ng/ml，t��1/2为(4.21±2.78)hr，AUC��0-t为(7711.21±2533.12)μg/hr/L，AUC��0-∞为(7986.07±2623.38)μg/hr/L，以AUC��0-t计算，生物利用度平均为(57.75±18.97)%。结论 2,3-吲哚醌大鼠体内消除较快，可能存在非线性消除，口服吸收较好。
【关键词】 2,3-吲哚醌；药物代谢动力学；静脉注射；口服
Pharmacokinetics of 2,3-indolinedione in rats
ZHANG Ji-guo, YUE Wang.Taishan Medical college，Taian 271016,China
【Abstract】 Objective
To study the pharmacokinetics of 2,3-indolinedione in rats after single administration of the drug orally or intravenously and to provide some information for the development of the new drug. Methods 0.25 ml blood were sampled from rats before and 5，15，30 min，1，2，4，6，8, 24 h after drug administration. The blood samples were pretreated by protein precipitation method using methanol. Quetiapine was used as internal standard. After pretreatment, the samples were assayed by LC/MS/MS mothod and the pharmacokinetic parameters were calculated by WinNonlin 5.2 using non-compartment model. Results The pharmaceutical parameters in rats after single administration of the drug orally or intravenously(average±SD)were as follow. Iv：T��maxC��maxt��1/2 AUC��0-t AUC��0-∞Vz and CLz were (0.83±0.29)hr,(141.53±10.99)μg/L,�� (1.68±0.84)hr,��(1068.15±389.06)μg/hr/L, (1211.19±469.18)μg/hr/L,(4.13±1.41)L/kg，(1.89±0.94)L/hr/kg；oral：T��maxC��maxt��1/2 AUC��0-t AUC��0-∞Vz and cLz were (0.05±0.00)hr,(1725.53±469.70)ng/ml，(4.21±2.78)hr,(7711.21±2533.12)μg/hr/L,(7986.07±2623.38)μg/hr/L, the bioavailability(AUC��0-t)��was (57.75±18.97)%.
Conclusion 2,3-indolinedione in rats after single administration of the drug orally has rapid elimination and good absorption.
【Key words】 2,3-indolinedione; Pharmacokinetics; Oral;Intravenous
2,3-吲哚醌(2,3-indolinedione)，是一种存在于海洋和动物体内的内源性活性因子［1］，具有抗癌［2］，抗病毒［3］，抗衰老等多种生物活性。但其体内来源及药物生化代谢尚未报道，本文考察单次静脉注射和口服给予大鼠2,3-吲哚醌后的药代动力学,为深入该药的新药研发提供依据。
1 实验材料与设备
1.1 药品与试剂
2,3-吲哚醌对照品：上海新生源生物医药有限公司；内标物奎硫平：美迪西普亚医药科技(上海)有限公司；甲醇(Burdick & Jackson，HPLC grade)；甲酸(ACROS ORGANICS，HPLC grade)；水为超纯水。
1.2 仪器设备
液相色谱仪(Agilent 1200)，质谱仪(6410B，Agilent公司)，电喷雾离子源(ESI)，串联四极杆质量分析器。数据处理系统为MassHunter软件(Agilent公司)。涡旋振荡器(Vortex-Genie 2，Scientific Industries，Inc)；小型台式高速冷冻离心机(5417R，Eppendorf)； 微量分析天平(XP26，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；超纯水机(Millipore)。色谱柱为Venusil XBP PH，5 μm，100 mm×2.0 mm。
1.3 实验动物
SD大鼠，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，雄性，体重：200~330 g。动物饲养：实验动物按照动物房标准操作规程饲养。食物和水食物由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物除在特定给药期间，可以自由饮食及饮水。动物房环境温度20℃~25℃,相对湿度30%~70%，12 h光照。实验动物在实验前适应1~7 d。实验动物必须健康并适应环境，口服给药前禁食10~14 h。给药后4 h后恢复饲料。
2 实验方法
2.1 受试物配制
2.1.1 静脉给药溶液的配制 称取适量受试物，溶于5％二甲基亚砜, 40% PEG400 and 55%盐水中，得到浓度为2 mg/ml的澄清溶液，用于静脉注射给药。
2.1.2 口服给药溶液的配制 称取适量受试物，溶于1.25%西黄耆胶水溶液中，得到浓度为5 mg/ml的混悬液，用于口服给药。
2.2 动物分组与给药
6只SD大鼠随机分为2组，每组3只。第一组：通过尾静脉注射给予动物受试物溶液，剂量为2 mg/kg体重；第二组： 通过口服灌胃给予动物受试物溶液，剂量为5 mg/kg体重。
2.3 血液样本采集与预处理
经眼眶静脉(异氟烷麻醉后)或其他合适的静脉采大约0.25 ml血液，置于含K2EDTA的一次性真空采血管内。采集时间点为：给予受试物前(0 hr)和给予受试物后5、15、30 min、1、2、4、6、8 h和24 h。血液样本采集后置于冰上，并立即取出50 μl全血加入已混有内标(50 ng/ml 奎硫平)的250 ml甲醇溶液中涡旋1 min后，离心分离上清液(离心条件：15000转/min钟，5 min，2~8℃)，收集的100 μl上清液分析前存放于-80℃。
2.4 标准曲线和质控样品的配制
取适量2,3-吲哚醌储备液，用甲醇：水混合溶液(1�∶�1，v/v)逐级稀释，配制成浓度为100，40，20，4，2和1 μg/ml的标准溶液，取标准溶液各5 μl平行加入到195 μl 大鼠空白全血或空白尿液中，制得浓度为 2500，1000，500，100，50和25 ng/ml的标准曲线样品。
取适量2,3-吲哚醌储备液，用甲醇：水混合溶液(1�∶�1，v/v)逐级稀释，配制成浓度为100，80，和8 μg/ml的质控溶液，取质控溶液各5 μl平行加入到195 μl大鼠空白全血中，制得浓度为2000，200和40 ng/ml的质控样品。
2.5 样本分析
采用液相色谱串联质谱联用对处理好的样品进行测定。测定条件如下：色谱条件：流动相：甲醇-5 mM甲酸/氨水(65:35, v/v)；流速：0.3 ml/min；柱温：35℃；进样量：5 μl。质谱条件:采用电喷雾离子化源(ESI)，正离子模式，喷雾电压4500 V，雾化气为氮气，雾化压力为50 psi；去溶剂气为氮气，温度350℃，流速为9 L/min；采用多反应监测(MRM)模式对药物离子浓度进行测定，淫羊藿苷及内标的最优MRM参数见表1。
3 实验结果
3.1 分析方法
血液样品分析方法(LC/MS/MS)的开发和样品分析将在美迪西普亚医药科技(上海)有限公司分析部门完成。该分析方法符合国内外生物样品分析的有关规定［4-6］。
3.2 药代动力学结果
SD大鼠静脉注射及口服给予2,3-吲哚醌后的血药浓度数据见表2和图1。
3.3 药代动力学参数
通过不同时间点的血药浓度数据，运用WinNonlin 5.2计算药代动力学参数，结果见表3。
图1
1雄性SD大鼠静脉及口服给予2.3-吲哚醌后的浓度-时间曲线(n=3)
3 讨论
2,3-吲哚醌为内源性物质，本文从空白血液中可检测到一定量的2,3-吲哚醌，本方法所测得的浓度数据为内源性2,3-吲哚醌及给药后暴露于血液中的2,3-吲哚醌之和。
从静脉药时曲线可见，静脉的给予后血药浓度与内源性比较接近，可能是给药后2,3-吲哚醌迅速分布至组织所致，本药的表观分布容积较大也与之对应。且在采血末端时间点有反跳，可能是内源性2,3-吲哚醌的干扰。
初步研究表明，2,3-吲哚醌口服的生物利用度较高，为57.75%，提示口服给药可作为该药的首选给药方式，这对于该药物的临床应用具有重要价值，并为该内源性药物的研发提供了重要的药动学依据。
参 考 文 献
［1］ Glover V, HalketJM, Watkins PJ, et al. Isatin: identity with the purified monoamine oxidase inhibitor tribulin. J Neurochem,1988,51:656.
［2］ 岳旺，王蕾，刘占涛，张芳，周明.一种抗癌防癌海洋活性药物的制备方法.专利申请号：200410023871.1.
［3］ 岳旺，刘占涛，王蕾，仲伟珍，杨志宏，徐敏.吲哚-2，3-二酮在制备抗病毒或免疫增强剂药物中的应用.专利号：ZL10105691.
［4］ Shah VP, Midha KK, Findlay JW, et al. Bioanalytical method validation-A revisit with a decade of progress. Pharm Res, 2000, 17: 1551-1557.
［5］ Karnes HT, March C. Precision, accuracy and data acceptance criteria in biopharmaceutical analysis. Pharm Res, 1993, 10: 1420-1422.
［6］ 萧参, 陈坚行.生物药剂分析方法的认证.中国药学杂志, 1993, 28(7): 425-426.
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