【酸枣仁及其混淆品理枣仁的鉴别】理枣仁的功效与作用

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  酸枣仁为鼠李科植物酸枣(Ziziphus Jujuba Mill, Var, spinosa(Bunge)Hu ex H.F. chou)的干燥成熟种子,具有补肝、宁心、敛汗、生津功效,用于虚烦不眠,惊悸多梦,体虚多汗,津伤口渴等症。药理研究表明:本品具有镇静催眠,镇痛抗惊厥、降血脂及抗血小板聚集、增强免疫功能、降压、抗缺氧及抗心肌缺血、抗心律失常、抗衰老、抗辐射,降温和兴奋子宫等作用。由于主流商品酸枣仁野生资源减少,市场货源供不应求,而市场上常用一种外形与正品酸枣仁相似的滇刺枣(Ziziphus mauritiana Lam)的干燥种子(理枣仁)来混淆出售,且数量极多。本文从二者的性状,显微、理化,蛋白质高效毛细管电泳(HPCE)来对比鉴别,以供参考。�
  1 性状特征�
  1.1 酸枣仁 呈扁圆形或扁椭圆形,长0.5~0.9 cm,宽0.5~0.7 cm,中央最厚处约0.3 cm,表面紫红色或紫褐色,平滑有光泽,偶见裂纹,一面较平坦,中间有一条隆起的纵线纹,另一面稍凸起。一端有白色的种脐,为线形小凹陷,另一端有点状凸起的合点。质坚硬,破开后可见白色胚乳及黄白色子叶2片,富油性,气微、味淡。�
  1.2 理枣仁 呈扁圆形或椭圆形,长0.4~1.0 cm,宽0.5~0.8 cm,厚0.1~0.3 cm。表面红棕色或黄棕色,有光泽。有的具淡黄棕色斑点花纹,一面平坦,中央无纵线纹,另一面隆起。种皮脆,内含黄白色种仁,富油性,气微,味微酸。�
  2 显微鉴别�
  2.1 酸枣仁 粉末棕红色,种皮栅状细胞棕红色或黄棕色,靠外侧有一条明显的光辉带,棕色薄壁细胞含淡棕色或黄棕色物。�
  2.2 理枣仁 粉末黄棕色,种皮栅状细胞黄棕色或红棕色,靠外侧光辉带不明显,棕色细胞内含草酸钙方晶。�
  3 理化鉴别�
  3.1 颜色反应�
  3.1.1 酸枣仁 取粗粉2 g,加20 ml乙醇回流提取1 h,滤过,取滤液4 ml置蒸发皿中,蒸去溶剂,加少量醋酐溶解残渣,移至干燥试管中,再沿管壁滴加浓H�2SO�4 0.4 ml,两相界面呈红棕色环,上层由无色渐变浅黄绿色,最后呈浅棕色。�
  3.1.2 理枣仁 取粗粉2 g,加20 ml乙醇回流提取1 h,滤过,取滤过液4 ml置蒸发皿中,蒸去溶剂,加少量醋酐溶解残渣,移至干燥试管中,再沿管壁滴加浓H�2SO�4 0.4 ml,液层界面呈现红棕色环,上层液呈棕色渐变紫红色,最后呈黑绿色。�
  3.2 薄层色谱鉴别�
  3.2.1 试剂与试药 正丁醇、乙醚、甲醇、磷钼酸均为分析纯,硅胶G板(青岛海洋化工厂),110℃活化30 min。�
  3.2.2 薄层层析 各取正品酸枣仁和混淆品理枣仁粉末5 g分别置索氏提取器中,用乙醚回流脱脂,药渣提去残醚,用甲醇回流提取2 h,提取液回收甲醇至干,残渣加水4 ml,混匀,水溶液用5倍量的正丁醇分2次提取,合并正丁醇提取液,减压回收正丁醇至干,残渣加甲醇1 ml溶解,取上述两种溶液各10 ml,分别点于同一硅胶G板上,以水饱和的正丁醇为展开剂,展距12 cm,取出,80℃烘干,喷10%磷钼酸乙醇液,于100℃烘约5 min。结果:酸枣仁、理枣仁除有2个蓝色斑点一致外,理枣仁还多出2个蓝色斑点。�
  4 蛋白质高效毛细管电泳法[2]�
  4.1 材料
  4.1.1 仪器与试剂 美国BIO-RAD公司BiofocusTM3000型Capillary Ion Analyzer配有紫外扫描检测器,熔融石英毛细管75um×60 cm(河北永年光纤厂),所用试剂均为分析纯。�
  4.1.2 电泳条件 电解缓冲液为30 mmol/L硼酸盐溶液(pH8.5);电压为20KV;温度20℃;紫外检测波长200 nm;重力进样,时间5 s;开机后先用0. 1 mmol/L氢氧化钠冲洗毛细管2 min,再用去离子水冲洗5 min,然后用缓冲液冲洗至基线平稳后开始进样,每两次进样之间设定缓冲液冲洗2 min。�
  4.1.3 样品溶液的配制 取酸枣仁、理枣仁生药样品0.5 g,加入蛋白提取液4 ml,在冰浴中研磨成匀浆状,转移至离心管内,以5 000 r/min离心20 min,取上清液备用。Tris-甘氨酸蛋白提取液;Tris-0.6 g,甘氨酸2.88 g,加蒸馏水溶解至1000 ml。碱性蛋白提取液:Tris-HCL0.1 mmol/L,抗坏血酸5.7 mmol/L,巯基乙醇10 mmoL/L,PH8.0。酸性蛋白质提取液:枸橼酸80 mmol/L,Na�2HPO432 mmol/L,抗坏血酸5 mmol/L,巯基乙醇10 mmol/L,pH2.8。�
  4.2 结果�
  4.2.1 在酸性提取液中,2个酸枣仁样品其13.69 min峰为强吸收峰,而理枣仁其12.06 min峰为强吸收峰。�
  4.2.2 在中性提取液中,2个酸枣仁样品其15.59 min峰为强吸收峰,而理枣仁12.83 min峰为强吸收峰。�
  4.2.3 在碱性提取液中,2个酸枣仁样品其16.53 min峰为强吸收峰,而理仁枣无明显强吸收峰。�
  综合3种提取液所检测的图谱可以看出酸枣仁与理枣仁HPCE图谱存在显著差异,容易加以区别。�
  5 讨论�
  本品与混淆品理枣仁在以上各种鉴别方法的基础上还可以使用扫描电镜法[1],紫外光谱法[2]等方法加以鉴别,而HPCE是近年来迅速发展的一种分离技术,已在多肽、蛋白质、核酸等生物活性物质的分离分析中显示了极为广阔的前景。�
  
  参考文献
  [1] 张淑华,李连环,刘振通,等.几种易混种子类中药的扫描电镜鉴别.中草药,1995,26(8):427.�
  [2] 白武龙,包光华,刘书贤,等.酸枣仁及其混淆品的紫外光谱鉴定.中国民族民间医药杂志,1995,6:27.�

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