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【摘要】 目的 建立HPLC测定糖尿乐胶囊中人参皂苷Rg1含量的方法。方法 选用Diamonsil(钻石)柱(4�6×250 mm,5μm);乙腈�0�05%磷酸(19:81)为流动相;检测波长为203 nm;流速1�0 ml/min。结果 人参皂苷Rg1在0�9952~4�9760 ug范围内,呈良好的线性关系。结论 本法简便、准确,适用于糖尿乐胶囊中人参皂苷Rg1的含量测定。�
【关键词】
高效液相色谱法;糖尿乐胶囊;人参皂苷
HPLC Determination tangniaole capsules in Rg1 Content
LI Ying�lian, JIA Gui�long, Che Xuan.
Pharmacy department of Dongfeng county hospital,Jilin 136300,China
【Abstract】 Objective to establish HPLC determination tangniaole capsules in Rg1 content� Methods Diamonsil ( diamond ) column (4�6 × 250 mm, 5 μ m); acetonitrile �0�05% phosphoric acid (19: 81) as mobile phase; detection wavelength for 203nm; velocity 1�0 ml/min� Results ginsenoside Rg ��1� in 0�9952~4�9760 μg range,had good linear relationship�Conclusion this method is simple, accurate, suitable for tangniaole capsules in Rg1 determination��
【Key words】
HPLC, tangniaole capsule, ginsenoside
�
本品处方中,人参为传统名贵中药,经现代医学和药理研究证明,人参皂苷为人参的主要有效成分之一,它具有人参根的主要生理活性。且采用HPLC方法测定人参皂苷含量方法比较成熟,故本品采用灵敏度高,重复性好的高效液相色谱法,以人参皂苷Rg1为指标,测定其含量。�
1 方法�
1�1 仪器与试药 高效液相色谱仪(岛津LC20A、在线脱气、SPD20A检测器Diamonsil(钻石)柱(4�6×250 mm,5 μm),乙腈为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯,人参皂苷Rg1对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:110736�200424)�
1�2 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1 ml含0�25 mg的溶液,即得。�
供试品溶液的制备��[1]�取本品内容物5 g,精密称定,置索氏提取器中,加三氯甲烷适量,回流提取至无色,弃去三氯甲烷液,取出滤纸包,吹干,加甲醇适量,回流提取至无色,提取液蒸干,残渣加正丁醇饱和的水30 ml使溶解,转移至分液漏斗中,加水饱和的正丁醇振摇提取5次(30 ml、20 ml、20 ml、20 ml、15 ml),合并正丁醇液,加正丁醇饱和的氨试液60 ml洗涤一次,弃去氨液,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。�
测定法 分别精密吸取对照品溶液10 μl与供试品溶液20 μl,注入液相色谱仪,测定,即得。�
1�3 方法学考察�
1�3�1 色谱条件的选择��[3]�
检测波长 采用DAD检测器对人参皂苷Rg1进行全波长扫描,结果人参皂苷Rg1在流动相条件下最大吸收波长为203nm,故确定样品检测波长为203 nm。�
流动相的考查 乙腈�0�05%磷酸(19�∶�81),试验结果表明,使用此种组合流动相人参皂苷Rg1与其他色谱峰分离较好,且能达到基线分离,故选择乙腈�0�05%磷酸(19:81)为流动相��[2]�。�
色谱柱的考查 在上述流动相条件下,确定色谱柱为DiamonilC18色谱柱(5μm 4�6×250 nm,迪马公司,结果表明采用此色谱柱人参皂苷Rg1与其他色谱峰分离较好,且能达到基线分离。�
1�3�2 阴性对照试验
称取处方中除人参以外的其他各味药材,制备阴性对照品,并按上述【供式品溶液的制备】项下供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液,进行测定。结果见图(图略)。�
试验结果表明,阴性对照溶液与供试品溶液比较,在相应的位置上未出峰,说明阴性对照无干扰。�
1�3�3 提取方法的选择
取重量差异项下的本品85粒,除去囊壳,取粉末约5 g,精密称定,(2份)分别加入三氯甲烷30 ml,采用索氏提取和超声提取,各1 h,提取液过滤,蒸干,残渣加正丁醇饱和的水30 ml使溶解,按上述供试品制备方法制成供试品溶液,测定,结果见表1。�
1�3�4 线性关系的考查
取人参皂苷Rg1适量,精密称定,加甲醇配制成每1 ml含0�2488 mg的溶液,即得。分别精密吸取4 μl、8 μl、12μl、16 μl、20 μl注入液相色谱仪,测定,记录峰面积。以峰面积为横坐标,人参皂苷Rg1含量(μg)为纵坐标,绘制标准曲线,计算线性方程为:Y=(6�26E�006)X+(3�36E�001)(R=0�9997)。�
结果表明 ,人参皂苷Rg1在0�9952~4�9760 ug范围内,呈良好的线性关系。�
1�3�5 精密度试验
取线性关系考查项下的对照品溶液,精密吸取10 μl,连续进样6次,记录峰面积,峰面积RSD=1�4%。�
结果表明,该方法精密度良好。�
1�3�6 稳定性试验
取同一供试品溶液分别于配制后0、4、8、12、16、20 h依法测定峰面积,峰面积RSD=0�92%。�
试验结果表明,样品溶液在20 h内稳定。�
1�3�7 重现性试验
按上述含量测定项下方法,对同一批号样品6份进行测定,记录峰面积,峰面积RSD=0�59%。�
结果表明,测定方法的重现性良好。�
1�3�8 回收率试验
采用加样回收法(按1�∶�1加入)精密称取已知含量的同一批样品6份,分别精密加入人参皂苷Rg1对照品0�540 mg,按上述含量测定供试品溶液制备方法及色谱条件测定,结果平均回收率为99�35%;RSD=1�14%。�
试验结果表明,人参皂苷Rg1加样回收率均在95%~105%之间,加样回收良好。�
1�3�9 样品含量测定
按上述含量测定项下方法测定,结果见表2。�
根据三批成品的检测结果,将本品人参皂苷Rg1含量规定为本品每粒含人参以人参皂苷Rg1计不得少于25 μg。�
2 三批药材含量测定结果�
见表3。�
根据对不同产地药材进行人参皂苷Rg1含量测定,对每批产品投料量进行指导,以确保药品质量。�
3 讨论�
3�1 在色谱柱的考查上,在规定流动相条件下,考查了以下色谱柱,(1)DiamonilC18色谱柱(5 μm 4�6×250nm),迪马公司,(2)AgilentZOBAX SB�C18色谱柱(5 μm 4�6×250 nm),结果表明采用色谱柱(1)人参皂苷Rg1与其他色谱峰分离较好,且能达到基线分离,理论板数为2500,故选择色谱柱(1)。�
3�2 在提取方法上,比较了索氏提取和超声提取两种方法,结果显示索氏提取法提取率相对较高。�
参 考 文 献�
[1] 中国药典,2000,(1)�
[2] 王宝栗.中成药质量标准与标准物质研究.北京医药科技出版社,1994.�
[3] 刘军,王燕桓.高效液相色谱法分析人参皂苷�药物分析杂志,1998,18(2):132�136�
