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【摘要】 药品中的杂质关乎到临床用药的安全性和有效性，有关物质的检查是检测药品纯度和评价药品稳定性的重要检测项目。本文简单介绍传统的色谱方法：薄层色谱法，气相色谱法，高效液相色谱法；详细阐述毛细管电泳法；超临界流体色谱法及联用技术等新技术新发展在药物有关物质检查中的应用。
【关键词】 有关物质；检查；色谱法；新技术
药品的纯度检查是药品稳定性考察的一个重要组成部分，其中有关物质的检查是检测药品纯度和评价药品稳定性的重要检测项目。药品中任何影响其纯度的物质统称为杂质， 按理化性质分为有机杂质、无机杂质和残留溶剂。有机杂质因其化学结构一般与活性成分类似或具渊源关系， 故又称为有关物质[1]。
有关物质主要包括工艺杂质和降解产物。工艺杂质来源于药物的制备和贮存过程；降解产物是制剂在制备或储存过程中受光、热、湿等影响产生的产物[2]。因有关物质的量微小，根据旋光性质的差异采用旋光分析法；根据对吸光性质的差异采用分光光度法；而药物和有关物质的光谱特征往往相似。故常用的是色谱法[3]。
1 传统方法
色谱法主要包括薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳法(CE)、超临界流体色谱法(SFC)、手性色谱法(CC)等[4]。
1.1 薄层色谱法
TLC法可同时分离多个样品，分析成本低，可同时检测极性大和极性小的杂质。TLC 容易操作，灵敏度受操作条件影响大，影响重现性和精密度的因素较多，包括展开剂、固定相、点样、检测等众多因素[5]。分离与检测分开进行是其优点，同时也是缺点。一方面可以用不同的检测方法，而另一方面操作时间长，难以满足快速分析的需要。
1.2 高相液相色谱法
HPLC检测杂质的方法分为：①外标法；②加校正因子的主成分自身对照法；③不加校正因子的主成分自身对照法；④面积归一化法。HPLC具有准确度、精密度，且重复性好。可根据不同的分析任务选择不同分离机制的色谱类型。小分子药物，常用反相HPLC， 通过调节流动相获得不同的选择性。例如，王建忠[6]等人采用正相HPLC法检查左舒必利中的右旋体杂质; 刘亚妮[7]等人采用反相HPLC法检查盐酸美普他酚片中的有关物质。
HPLC亦有不足之处。缺乏通用、灵敏的检测器。常用的紫外吸收检测器，对无紫外吸收的杂质难以测定。反相H PLC的填料只能在一定的pH范围内使用[5]，且分析碱性药物时易产生拖尾。现在，可通过在流动相中加入有机改性剂可减弱拖尾。对强保留物质的分析时间长也难以满足快速分析的需要。
1.3 气相色谱法
GC法选择性好、灵敏度高、进样量小、分析速度快。对于挥发性差或热不稳定的化合物，可以采取柱前衍生化试剂制备成衍生物或采用裂解、水解、硅烷化等方法预处理以增加其挥发性，但增加了操作上的麻烦， 改变了原来样品的面目。因此， GC应用于药物有关物质的检查要少得多，仅用于检查挥发性杂质和药物在生产过程中引入的有害有机溶剂残留量 [3]。
2 新技术和新发展
2.1 毛细管电泳
CE有3种主要分离模式低pH的CE，适用于测定水溶性碱性药物。通常采用50 mmol/L NaH2PO4，用浓H3PO4调节pH2.5。加入环糊精(CD)、乙二胺四乙酸( EDTA)、离子对、有机溶剂来改善分离。这一系统UV吸收背景低， 可在低UV波长处如190~ 210nm测定，而许多药物在此处有相对较大的UV吸收系数。高pH值的CE适用于水溶性酸性药物，多采用磷酸盐( pH 7)、硼酸盐 ( pH 9. 5)作电解液[8]。还有MECC适用于中性和水不溶性药物。
CE具有快速、高效、进样量小等特点。由于其不使用用填料，而且以缓冲液为介质分离，可以利用各种添加剂。
2.2 超临界流体色谱
超临界流体色谱( supercritical fluid chromatography，SFC)，是以超临界流体作为流动相的色谱方法，分析速度快、样品前处理简单，检测灵敏度高，选择性好、分离效率高、分析条件温和，可分析气相色谱不宜分析的高沸点、高分子量、低挥发性和热不稳定试样。又比高效液相色谱有更快的分析速度和柱效，在相同的板高时，分析速度是液相色谱的4倍左右[12]分析时间短。
郭亚东[13]采用SFC对抗癌药物紫杉醇及其降解产物进行分析，检定出16 个特殊杂质。该法可用于热不稳定、极性大、挥发性小以及不能衍生化的特殊杂质的分析。不仅可以使用GC和HPLC 所用的检测器，如氢火焰离子化检测器 ( FID)、氮磷检测器NPD、紫外检测器( UV) 等，还可与质谱仪(MS)，傅立叶变换红外光谱仪( FTIR)以及核磁共振仪(NMR)等联用。
2.3 联用技术：
色谱技术分离能力强、检测灵敏度高、分析速度快，是复杂混合物分析的首选技术，但它在未知物定性方面难于给出可靠信息。而光谱技术则具有很强的鉴定未知物结构的能力，但却不具有分离能力，因而对复杂混合物无能为力。于是出现了将两者长处结合起来的联用技术，它集色谱的高分离能力与光谱的高灵敏度和极强的定性专属特异性于一体。
色谱与光谱之间有多种结合方式，如Vikas Shinde[9]等人采用HPLC-MS/MS 检查赖诺普利中新的特殊杂质；周国华[10]等人采用HPCE- MS检查IL-2中的二聚体和异构体；美国西点Merck研究室报道[11]，用LC-MS鉴定药物分解产物包括氧化产物，水解产物及聚合物、加合物等。
结语
HPLC在有关物质分析中仍将占主导地位，TLC是其补充手段，对于需准确定量的特殊杂质可用HPLC测定，对不需要准确定量及HPLC难以测定的药物可用TLC分析。GC多用于检测残留有机溶剂，测定特殊杂质多需衍生化[14]，因而使用较少。此外，一些新技术如毛细管电泳(CE)，超临界流体技术(SF)及联用技术在测定特殊杂质的应用中越来越广泛。
参考文献
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