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摘要: 目的:观察滇桂艾纳香药材用不同溶剂提取的浸膏灌胃给予小鼠后产生的急性毒 性反应和死亡情况。方法:预实验发现50%､70%乙醇提取物毒性不明显,无法测定半数致死 量 (LD50),需改作最大耐受量(MTD)试验,并且初步确定水提取物半数致死量(LD50)试验用 药剂量,正式实验采用小鼠灌胃给药的方法测定水提取物半数致死量(LD50)和50%､7 0%乙 醇提取物最大耐受量(MTD)。结果:滇桂艾纳香水提取物的LD50为143.1034g生药/kg ,50%､ 70%乙醇提取物MTD分别259.60g生药/kg､309.68g生药/kg。结论:滇桂艾纳香毒性较小,临 床用药安全,且水提取物毒性大于醇提取物。
关键词:滇桂艾纳香;提取物;急性毒性
中图分类号: R281.4;R996.2 文献标识码: A 文章编号: 1008-2409(2009)05-0808-03
The test of acute toxicity on different Blumea riparia(Bl.)DC extract/JIANG Jian-ping,LIU Xi-hua,DU Xiu,et al.∥Guangxi Traditional Chinese Medi cal University,Nanning 530001, China
Abstract:Objective:To observe the acute toxicity and the death status of diffe rent solvent extracts of Blumea riparia(Bl)DC. by ig in mice. Methods:The pre -experiment shows that 50% and 70% alcohol extracts can"t determine LD50whichhave no obvious toxic effect,so it is necessary to change it with the maximum t olerated dose(MTD)experiment. And the aqueous extract of LD50 of medicinedoseis initially difined. The official test determines the aqueous extract of LD50, 50% and 70% alcohol extracts of MTD by ig administration in mice. Results:The a queous extract of Blumea riparia(Bl)DC. of LD50, 50% and 70% alcohol extr actsof MTD were respectively 143.103g/kg,259.60g/kg and 309.68g/kg(equivalently tocrude drug). Conclusion:Blumea riparia(Bl)DC. has very low toxicity but widesafety range in clinical application, and the toxicity of aqueous extract is hi gher than that of alcohol extracts.
Key words:Blumea riparia(Bl)DC.; extract; acute toxicity
滇桂艾纳香又名百花九里明､华艾纳香,来源于菊科植物假东风草Blumea riparia(Bl.)D C. 的干燥全草,为广西民间常用壮药,主要产于广西西南部和云南东南部[1]。滇桂 艾纳香在 广西有较长的临床应用历史,壮医认为其味微苦淡､性微温,有活血调经､祛风除 湿､止血､利水等作用,用于经期提前､产后流血不止､产后浮肿､不孕症､阴疮､风湿骨 痛等证[2-4]。笔者参照文献的方法[5,6],用滇桂艾纳香水提取物 和50%､70%乙醇提取物进行了急性毒性研究,为该药材的后续研究做好基础。
1 材料与方法
1.1 药物和动物
滇桂艾纳香药材采自广西龙州,经广西中医学院药用植物教研室刘寿养副教授鉴定为菊科艾 纳香属植物滇桂艾纳香Blumea riparia(Bl.)DC全草。健康昆明种小鼠,体重18~22g,雌 雄各半,由广西医科大学实验动物中心提供(合格证:SCXKG桂2003~2003)。
1.2 药材不同提取物的制备
1.2.1 水提取物 滇桂艾纳香药材500g,剪碎,煎煮3次,每次加水3000ml ,煎煮时间分别为1.5h､1h､1h, 合并3次煎液浓缩至160ml,浓度3.125g生药/ml。
1.2.2 70%乙醇提取物 滇桂艾纳香药材435g,粉碎,加入70%乙醇冷浸2次 ,每次加入乙醇5000ml静置2d,合并冷 浸液,浓缩,得浸膏55.68g,即相当于7.8g生药/g。
1.2.3 50%乙醇提取物 滇桂艾纳香药材435g,粉碎,加入50%乙醇冷浸2次,每次加入乙醇5000ml静置2d,合并冷 浸液,浓缩,得浸膏68.39g,即相当于6.4g生药/g。
1.3 方法[5,6]
1.3.1 预试验 选用18~22 g健康昆明种小鼠,重量最大不能相差4 g,雌 雄各半。每组4只 ,禁食不禁水15h,配制不同浓度的药物,均按每只小鼠0.4 ml/10g灌胃给药,摸索出使全 部 小鼠死亡的剂量和全部小鼠不死亡的剂量;50%､70%乙醇提取物以最大浓度灌胃给药后未见 死亡,改做小鼠最大耐受量(MTD)试验。
1.3.2 LD50的测定 健康昆明种小鼠60只,按性别､体重随机分为6组 ,每组10只,雌雄各 半。其中一组为空白对照组,其余5组根据预试验结果,药材水提取物各组日受试剂量分别 为2 00.00,160.00,128.00,102.40,81.92g生药/kg,两相邻剂量组间的高低剂量比为1∶0. 8 。各组小鼠均按0.4 ml/10g分2次灌胃给药,2次灌胃间隔时间为6h,空白组给予等量饮用水 。灌胃 给药前禁食不禁水约15 h,间隔期间不供食,给药后常规饲养,给药后仔细观察并记录给药 后即刻至14 d内小鼠出现的毒性反应与死亡情况。
1.3.3 MTD的测定 健康昆明种小鼠60只,随机分为50%乙醇提取物组､70% 乙醇提取物组和 空白对照组,每组20只,雌雄各半。50%乙醇提取物组:以药材浸膏可供小鼠灌胃的最大浓 度 (3.245 g生药/ml),每次按0.4 ml/10g体重,分2次灌胃给药,2次灌胃间隔6 h,日受试 剂量 为259.60g生药/kg。70%乙醇提取物组:以药材浸膏可供小鼠灌胃的最大浓度(3.871 g生药 /m l),每次按0.4 ml/10g体重,分2次灌胃给药,2次灌胃间隔6 h,日受试剂量为309.68g生 药/kg 。对照组灌胃等量饮用水,余同各给药组。各组小鼠灌胃前禁食不禁水15 h,间隔期间不供 食 ,给药后常规饲养,仔细观察并记录给药后即刻至14d内小鼠出现的毒性反应与死亡情况。
1.3.4 观察项目 ①给药前测量小鼠体质量,给药后的第3, 7,10,14天 各测量小鼠体质 量1次。②观察给药后小鼠的精神､活动､食量､饮水量､大小便及存活情况;记录各组小 鼠的死亡情况,死亡小鼠立即解剖观察肝､心､脾､肺､肾､胃及小肠等器官的变化。
1.3.5 数据处理和统计分析 采用改良寇氏法计算LD50采用SPSS 13.0 软件统计分析处理各组数据。
2 实验结果
2.1 LD50试验
给药后各组小鼠出现不同程度的毒性反应,相继出现精神萎靡､活动减少 ､呆卧､刺激反应低下等中毒症状,剂量越高出现越早,症状越明显,最后出现兴奋状态, 间隙性跳跃,最后死亡。小鼠于每次给药后0.25~1 h开始出现死亡,0.5 h为死亡高峰期, 且死亡小鼠主要集中在第二次给药后,未见性别差异,空白组未见死亡。死亡动物解剖后, 肉眼未见脏器异常改变。给药后第2天开始以上症状逐渐消失,饮食恢复正常,第15天处死 未死亡动物,解剖观察小鼠心､肝､脾､肺､肾､胃､肠等脏器肉眼均未见异常。记录从给 药开始至第14天动物死亡情况(见表1)。
结果显示灌胃给药水煎提取物LD50为143.1034g生药/kg,95%可信限为 :130.023~157.023g生药/kg。
2.2 MTD试验
小鼠灌胃 50%､70%乙醇提取物药液后共观察14d。在药后2h内个别动物活 动减少,表现较安静,其余未见异常现象,给药第2天起,所有受试动物饮食正常,精神状 态良好,活动灵活积极,体重增加正常,活动未见异常,皮毛光滑,大小便未见异常,亦无 异常分泌物。14d内无一动物死亡。第15天处死动物后解剖观察小鼠心､肝､肺､脾､肾 ､胃､肠等脏器肉眼未见明显病理学改变。故测得滇桂艾纳香50%乙醇提取物､70%乙醇提取 物对昆明种小鼠灌胃给药的日最大给药剂量分别为259.60g生药/kg､309.68g生药/kg。实验 结果如表2､表3。
3 讨论
本实验通过比较3种不同溶剂提取的滇桂艾纳香药材浸膏发现不同溶剂提取的药材浸膏在毒 性方面有差别,水提取的要比50%,70%乙醇提取的毒性大,说明该药材毒性成分主要集中在 水煎提取物中,为水溶性成分。
滇桂艾纳香人临床日用量为15~30g[1],若人平均体重按60kg计算,人平均日用量 按30g计 算,灌胃给药水煎提取物的LD50为143.1034g生药/kg相当于人口服日用量的286倍;5 0%乙醇提 取物的最大耐受量为259.6g生药/kg相当于人口服日用量的519倍;70%乙醇提取物的最大耐 受 量为309.68g生药/kg相当于人口服日用量的619倍。同时死亡动物肉眼观察主要器官均未见 明 显异常,存活动物亦相同。实验结果显示滇桂艾纳香毒性非常低尤其是乙醇提取物,但是总 体来说该药材毒性不大,临床用药安全。
滇桂艾纳香乙醇提取物毒性较低但是是否药理作用也较好,还有毒性成分主要是什么,有效 成分主要是什么,都未见文献报道,这些都有待于进一步研究。
参考文献:
[1] 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准(第2册)[S].南宁:广西科 学技术出版社,1996:274-278.
[2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草(第七册)[M].上 海:上海科学技术出版社,1999:745-746.
[3] 广西壮族自治区革委会卫生局.广西本草选编(上册)[M].南宁:广 西人民出版社,1974:925.
[4] 黄燮才.广西民族药简编[M].南宁:广西壮族自治区卫生局药品检验 所,1980:236.
[5] 徐叔云,卞如濂,陈修,等.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出 版社,2002:227.
[6] 陈奇,邓文龙,张世玮,等.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫 生出版社,1993:112-119.
(收稿日期: 2009-07-23)
[责任编辑 王慧瑾 邓德灵]
