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【摘 要】目的：建立刺山柑果中腺苷含量的测定方法。方法：刺山柑果经超声提取，硅胶薄层层析分离，用紫外分光光度法于260nm处测定腺苷的吸光度。结果：在1.0-6.0μg/mL的范围内腺苷的浓度与吸光度呈现良好的线性关系(r=0.9995 n=6)，平均回收率为96.1%(RSD=1.48% n=3)，腺苷的含量为14.19mg/Kg(RSD=2.8 n=5)。结论：本法简捷､准确，适用于刺山柑果中腺苷的含量测定。
【关键词】：刺山柑 腺苷 薄层层析-紫外分光光度法
【中图分类号】R92; 【文献标识码】B【文章编号】1007-8517(2008)4-0014-03
刺山柑(Capparis spinosa L.)为白花菜科山柑属植物，又称野西瓜､老鼠瓜､瓜儿菜､槌果藤､菠里克果和伯格-塔乌孜等。维吾尔语称刺山柑果为开派，喜生于荒漠戈壁和低山坡石质沙土地处，新疆､西藏等地有分布。国外阿富汗､巴基斯坦､前苏联中亚及北非和地中海沿岸均有分布。刺山柑果性温，主要功能有祛风､散寒､除湿､消肿､止痛，维吾尔医主要用于治疗风寒湿痹，脾胃寒痛，浮肿等疾病[1]。在地中海地区刺山柑果是一种常见的用于烹饪的芳香食品，当地居民将刺山柑果醋制和盐制后进行食用。刺山柑在西班牙､意大利､土耳其等国家已经成为一种重要的经济作物[2]。国内学者姜薇等对刺山柑果的化学成分研究表明其含有6-Hydroxy-12-caboxy-blumenolA-β-D-glucopyranoside(I)，1H-吲哚-3-乙腈-4-O-β-葡萄糖苷(Ⅱ)，(6S)-Hydroxy-3-oxo-α-ionol(Ⅲ)，3-醛基吲哚(Ⅳ)，腺苷(Ⅴ)，次黄嘌呤核苷(Ⅵ)，对苯甲酸鼠李糖苷(Ⅶ)，蔗糖(Ⅷ)，β-谷甾醇(Ⅸ)，胡萝卜苷(Ⅹ)[3]。M.ózcan1; C. Aydin 对新鲜刺山柑果的分析得出其含水81.61%､粗蛋白17.4%､灰分5.17%､粗油3.27%､粗纤维12.72%，还含Na57.17mg/kg､K14.33mg/kg､P 6784mg/kg[4]。1999年Ihsan Calis等从刺山柑分离出了两种葡萄糖配基：1H-吲哚-3-乙腈-4-O-β-吡喃型葡萄糖苷和1H-吲哚-3-乙腈-4-O-β(6-O-β-吡喃葡萄糖基)-吡喃型葡萄糖苷[5]。2002年Ihsan Calis从刺山柑果中分离出3种(6S)-Hydroxy-3-oxo-α-ionol glucosides和一种prenyl glucosides[6]。季宇彬等采用苯酚-硫酸法及毛细管电泳法对刺山柑果多糖测定发现，刺山柑果粗多糖及除蛋白后多糖含量分别为39.95%，66.42%，主要多糖组分比为：鼠李糖∶木糖∶葡萄糖∶阿拉伯糖∶半乳糖=3∶5∶48∶100∶21∶19[7]。腺苷是一种存在人体内的所有细胞中的内源性核苷，是一种很强的心血管活性物质，它使体循环血管扩张，引起血压下降[8];腺苷有镇静､催眠､抗癫痫､作用[9];内源性腺苷对脂肪组织就有生理调节作用，可抑制交感神经刺激引起的脂解。在心血管方面，腺苷是一种可靠的生理调节剂。在临床上，腺苷可被有效的作为一种血管舒张剂，亦可作为一种抗心律不齐的药物。在诊断学上，腺苷可以被用来区分室上性心动过速于室性心动过速，以暴露心房扑动与心房纤维性颤动[10]。国内外有关刺山柑果中腺苷的研究未见报道，笔者采用薄层层析分离，紫外分光光度法测定刺山柑中腺苷的含量，为刺山柑的药用开发提供质量控制依据，现报道如下。
1 仪器与试药
1.试药：腺苷标准品(中国药品生物制品鉴定所879-200001)，乙酸乙酯(AR)，异丙醇(AR)，氯仿(AR)，无水乙醇(AR)，刺山柑果实干品(2007年4月购于新疆二道桥药材市场，经新疆医科大学中医学院李永和主任药师鉴定)。
1.仪器：Spectrumlab 54紫外分光光度计 (上海棱光技术有限公司)､RE52CS-2旋转薄膜蒸发仪(上海亚荣仪器厂)､YOKO-SY紫外分析摄影仪(武汉药科新技术有限公司)､KQ-400DBC超声清洗仪(昆山市超生仪器有限公司)､BS110S分析天平(北京，赛多利斯)､TGL-16B台式离心机(上海安亭科学仪器厂)､薄层层析硅胶板GF254(青岛海洋化工厂)､DZF-6021型真空干燥箱(上海精宏实验设备厂)､CS101型电热鼓风干燥箱(重庆实验设备厂)。
2 方法与结果
2.标准样品的制备：精密称取腺苷标准品8.2mg，加入70%得乙醇溶解，定溶到50ml容量瓶中即得。
2.测试样品的制备：将刺山柑果实捣碎并过40目和60目的药典筛，取中间粉末放在真空干燥箱内(50℃，24h)烘干至恒重，精密称取刺山柑粉末5g，置250ml的容量瓶中，并用8倍量的70%的乙醇超声三次，每次20min，过滤并合并滤液，浓缩至1g/ml备用。
2.3 定性鉴别：用定量点样器吸取15μL样品液，点于10x20cm薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-异丙醇-水(8：2：6：0.5)为展开剂，以腺苷标准品为对照，直立上行展开。在紫外灯254nm下检测后，发现在相同的位置有相同颜色的斑点(见图1)，刮取与标准品Rf值一致的斑点，置于10mL的带盖试管中，精密加入4mL70%的乙醇，剧烈震荡2min后，以10000r/min离心10min小心吸取上清液，得测试样品液，以同样的方法制的标准品液。测试样品液和标准品液在200-600nm范围内进行紫外扫描的紫外图谱(见图2)，由图2可知样品紫外吸收图和标准品重合良好，确定最大吸收波长为260nm。
2.4 标准曲线的制定：精密量取标准品溶液，配制成浓度分别为1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0μg/mL的腺苷溶液，以70%的乙醇为参比，于260nm处测定吸光度，以浓度(μg/mL)为Y，吸光度为X，回归后得浓度-吸光度的回归方程为：Y=0.1030X+0.037r=0.9995显示在1.0～6.0μg/mL的范围内，腺苷的浓度和吸光度呈现良好的线性关系。
2.5 精密度与稳定性实验：取腺苷标准品溶液，加70%乙醇配制成浓度为5μg/mL，以70%的乙醇为参比，于260nm处测定吸光度。重复平行测定5次，得吸光度值的RSD为0.64%。另取该腺苷标准品溶液，以70%乙醇为参比，每隔1h测定吸光度，平行测定9次，得吸光度的RSD为0.62%。结果显示本实验方法精密度良好，标准品溶液在8h内有较好的稳定性。
2.6 样品测定：按定性鉴别中样品溶液的制备方法制备5批样品，以70%乙醇为参比，在260nm处测定吸光度，并将其代入标准曲线回归方程分别计算出测试样品中腺苷的浓度，经换算刺山柑中腺苷的含量为14.19μg/g，含量的RSD%为2.8(见表1)。
2.7 加样回收率：精密量取已知腺苷浓度的测试样品溶液3份，分别加入标准品，按定性鉴别中样品的制备法制备试液，按样品测定方法测定吸光度并求得腺苷含量，计算加样回收率，平均回收率为96.1%，RSD为1.5%。结果见表2。
3 讨论
本文采用硅胶薄层层析结合紫外分光光度法测定了刺山柑果中腺苷的含量。刺山柑果经超声提取，薄层层析分离得到的测试样品溶液和标准品溶液的紫外吸收图谱完全一致，表明测试样品中含有腺苷，并从文献中获得支持，同时利用薄层分离可以排除其它成份干扰。本法灵敏度高，设备简单，操作简便易行，可用于刺山柑果的质量控制。刺山柑的药理研究表明有降血糖血脂，抗菌，杀虫，保肝，抗炎，抗氧化等作用[11]。维吾尔医主要用刺山柑治疗痛风､风湿性关节炎等疾病，有较好的疗效[12～14]。从国外的相关研究报道可知，刺山柑有较广泛的药学用途和经济价值，有待于我们进行深入研究。
参考文献
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(收稿日期：2008.01.15)
