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【摘要】 目的 通过探讨6种不同固定液短时间固定对冰冻切片制片效果的影响，以便在快速冰冻切片制片中选择较好的固定液。方法 收集新鲜活体组织，取材冷冻包埋后，经恒温式冰冻切片机切片，以6种不同固定液固定6 s，进行HE染色。结果 经乙醚酒精固定后冰冻切片质量较好，染色鲜艳，镜下组织结构细胞形态清晰，细胞核浆对比分明。结论 乙醚酒精固定是一种较为理想的冰冻切片快速固定液。�
【关键词】 固定液；冰冻切片；HE染色
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The effects of 6 kinds of fixatives short time fixed for frozen section production
XU Yun-sheng, NI Kai-zhi. Department of Pathology of Chuxiong Medical College; Department of Pathology of People�s Hospital in Chuxiong Zhou College,Chuxiong 675005,China
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【Abstract】 Objective
Discussesthe effects of six different liquid short time fixed to the frozen section producer, so that choose good film fixed fluidin the fast frozen section. Methods Collect fresh living tissue, Based on the frozen embedding, constant temperature type frozen section machine sliced, 6 different fixed liquid fixed 6 seconds, for HE dyeing. Results After the ether alcohol fixed frozen section quality was better,its color was brighter, under mirror cells form clear organizational structure, the nuclear plasma contrast is clear. Conclusion Ethyl ether alcohol is a more ideal frozen section quickly fixed fluid.�
【Key words】
Fixed liquid；Freezing section；HEdyeing
冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。由于其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。但在冰冻切片制作过程中，影响制片的质量因素较多，从而影响手术中的快速病理诊断。因此，快速制作一张高质量的冰冻切片对于确保病理诊断极其重要。其中固定是冰冻切片制作中关键步骤之一，对切片的制片质量有着重要的影响。本文通过6种不同固定液短时固定对冰冻切片制片染色的比较，探讨不同固定液对冰冻切片制片效果的影响。�
1 资料与方法�
1.1 材料 选自楚雄州人民医院病理科手术切除的新鲜组织标本40例，包括有乳腺、甲状腺、胃、子宫、卵巢等组织。�
1.2 固定液 6种固定液分别为：10%福尔马林；95%酒精；AF固定液；丙酮∶甲醇∶乙醚酒精(乙醚∶酒精1∶1)。�
1.3 方法�
1.3.1 取材及切片 取材大小为1.5 cm×1.5 cm，厚2~3 mm的新鲜组织，用OCT包埋剂包埋后，放进徕卡恒温冷冻切片机(温度-18℃~20℃)，1~2 min后，每例标本连续切片各6张，厚度4~5 μm。�
1.3.2 固定及染色 切片后立即放进上述6种不同的固定液(室温20~25℃)固定6 s。将固定过的切片用蒸馏水洗30 s，放进改良的GILL苏木素液(预先放在65°恒温水域箱加热)2 min，自来水洗，1%盐酸酒精分化液分化10 s，温水(50℃)蓝化30 s，伊红染色30 s,梯度酒精脱水，二甲苯透明,中性树胶封片。�
2 结果�
切片制作好后，通过对6种不同固定液的对比，在显微镜下观察切片的组织清晰度、细胞收缩度、细胞核染色、细胞浆染色、核浆对比情况。结果见表1。�
从观察结果显示，在6中固定液固定的冰冻切片中，经乙醚酒精固定后的冰冻切片，镜下组织细胞形态清晰，细胞无收缩，细胞核、细胞浆染色鲜艳，核浆对比良好。甲醇固定的冰冻切片质量次之。95%酒精固定的切片，除细胞明显收缩外，组织结构较清晰，细胞染色尚可。丙酮和AF液固定的冰冻切片，组织结构较清晰度稍差，细胞浆染色及核浆对比均差，而且丙酮固定的细胞收缩较为严重。10%福尔马林固定的冰冻切片组织清晰度、细胞核染色、细胞浆染色及核浆比均差，同时细胞肿胀，尤其是细胞核明显肿胀、模糊。�
3 讨论�
冰冻切片的目的是在短时间内作出准确的病理诊断，协助临床医生确定病变的范围，决定手术的范围，因此，必须尽一切可能争取时间，争取尽快早出切片，并保证质量，所以快速制作一张高质量的冰冻切片非常重要。中华医学会规定完成冰冻HE染色切片制备时间通常为20~25 min[1]，在冰冻切片制片中，固定液的选择及固定的时间长短是冰冻切片HE染色的一个关键步骤。用于冰冻组织的固定液种类较多，大多数固定液需要固定几分钟至十几分钟时间，如果只固定数秒钟，则大多数切片固达不到诊断的要求。由于冰冻切片是由快速切片，快速固定，快速染色这三个方面相互影响所造成的，其中由于组织固定液因素影响组织细胞形态的改变，对病理医生的诊断影响最大，远比其他技术员操作因素引起的组织细胞形态改变更难把握。研究表明10%福尔马林虽然对组织的穿透力强，固定效果好，但需要固定的时间长，而且它不能抵消因冷冻所引起的细胞内液体的肿胀，所以甲醛固定的组织,核发生肿胀、模糊[2]。从上述6种固定液的比较来看，如果只进行数秒钟的短时固定，10%的福尔马林和AF液固定的组织，组织清晰度差，细胞核和细胞浆着色较淡，核浆对比差。95%酒精固定效果尚可，但细胞收缩明显，核浆着色稍差。丙酮固定剂，对组织穿透性强，但细胞严重收缩，核浆对比差。甲醇固定的组织，细胞轻度收缩性，组织结构清晰，核着色好。但是乙醚酒精固定液的冰冻切片能较好的保存细胞的正常结构，组织清晰，背景干净，细胞无收缩，核浆染色鲜艳，核浆对比良好，是6种固定液中最好的。因此，乙醚酒精可以短时间内固定细胞，缩短制片时间，是一种较为理想的冰冻切片快速固定液。�
参 考 文 献�
［1］ 中华医学会.临床技术操作规范，病理学分册.北京：人民军医出版社，2004:10-11.�
［2］ 孙和国，何毅敏.三种固定液对冰冻组织切片固定效果的比较.诊断病理学杂志,2001,8(2)：114.
