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【摘要】 目的 通过比较腹腔内大小剂量化疗的疗效，同时观察肿瘤局部及外周血中化疗药的药代变化，比较两种疗法的疗效优劣。方法 建立黑色素瘤移植鼠模型；分别观察比较大（12 mg/kg）小�（4 mg/kg）�剂量顺铂行腹腔内注射后荷瘤鼠的腹膜瘤结节减少情况，并取鼠大网膜及外周血测定含铂量。结果 在动物实验中，与空白对照相比，大小剂量顺铂组瘤结节数量均明显减少；用药后第3、6天时，大剂量顺铂组瘤结节为(126．00±13．68)、（168．17±15．14），而小剂量顺铂组瘤结节分别为（91．17±13．83）、（92．00±11．33），后者明显少于前者，且(P［1］。但对腹腔内化疗药在临床上的使用剂量，即大小剂量孰优孰劣，一直未见报道。本研究通过比较腹腔内大小剂量化疗的疗效及其药代动力学变化，探讨癌腹膜转移治疗的新方法。
1 材料与方法
1．1 实验动物和细胞 C57BL雌性纯系小鼠，18～22 g，购自中国医科大学实验动物中心，实验动物合格证号SCXK(辽2003�0009)。B16黑色素瘤细胞，购自中国医学科学院北京肿瘤医院免疫室。
1．2 主要试剂和仪器 注射用顺铂（cisplatin, cDDP）（齐鲁制药厂）。RPMI�1640细胞培养液［2］（中国医科大学细胞生物系）。PBS液：用于洗涤细胞。原子光谱吸收仪（HITACHI 180�80）、37℃CO�2恒温孵育箱（HERAcell）。
1．3 建立黑色素瘤移植鼠模型 制备黑色素瘤细胞悬液 ［2］。预实验取C57BL雌性纯系小鼠30只，每只小鼠腹腔内注射黑色素瘤细胞8×105个（0．2 ml），注射后24 h开始处死鼠，剖腹探查腹膜、大网膜、肠系膜，观察有无瘤结节形成。每24 h处死3只，待肉眼可见瘤结节形成后，停止处死鼠。余下的鼠留下观察生存时间。同法制备荷瘤鼠72只予正式实验。
1．4 移植瘤给药实验 于C57BL小鼠接种B16细胞后72 h，取荷瘤鼠72只，随机分为3组，每组24只。1组为对照组，于小鼠腹膜形成瘤结节后，腹腔注射生理盐水0．2 ml；2组为大剂量顺铂组，腹腔注射cDDP 12 mg/kg；3组为连续小剂量顺铂组，cDDP每天用量为4�/�，连续腹腔注射3 d。每组分别于用药后1、2、3、6 d处死鼠，每组每次处死鼠6只，计数腹膜（包括胃大小网膜、肠系膜、腹壁）瘤结节数，2、3组同时剪取鼠大网膜并取外周血，大网膜在�40℃保存，血在4℃保存，留待测定其内含铂量。
1．5 测定组织及外周血的含铂量 采用原子光谱吸收仪测定含铂量［3］。分析条件：波长265．9 nm、灯电流12．5 mA、狭缝0．4 nm、石墨炉为管型（全热解）、载气流量200 ml/min、进样量10 μl。测定条件：测定方式为峰高法、扣背景方式为塞曼（ZAA）。组织处理方法采用硝酸�高氯酸湿法分解方式，外周血可直接测定。
1．6 统计学方法 采用SPSS10．0统计软件，行独立样本t检验。
2 结果
2．1 瘤细胞在小鼠腹腔内的种植情况 小鼠腹腔内种植8×10�5个黑色素瘤细胞后48 h均可见肉眼结节形成，瘤结节为黑色，主要见于大网膜、肠系膜、腹壁。预实验未处死的荷瘤鼠2周时均存活良好。
2．2 移植瘤给药实验结果 与对照组相比，腹腔内注射cDDP后第1、2、3、6天时，小鼠腹膜瘤结节数均明显减少。且在第3、6天时，连续小剂量顺铂组的小鼠腹膜瘤结节数明显少于大剂量顺铂组，见表1。
2．3 大网膜组织及外周血含铂量结果 在腹腔内注射cDDP后第6天时，连续小剂量顺铂组的小鼠大网膜中含铂量明显高于大剂量顺铂组，且具有统计学意义(r=0．9973)，见表2。在腹腔内注射cDDP后第3、6天时，连续小剂量顺铂组的小鼠外周血含铂量明显低于大剂量顺铂组，且具有统计学意义�(r=0．9978)�，见表2、3。
3 讨论
腹膜肿瘤多为恶性，且大部由肝，胃，结肠，卵巢等的恶性肿瘤转移而来。全身化疗虽有一定的作用，但血液中药物浓度达到峰值快，维持数分钟即下降，2～4 h内近于完全消失，腹腔内药物浓度低，治疗效果不理想。Dedrick等［4］于1978年建立了腹腔内给药的药代动力学实验模型―两室模型。他认为对于腹腔肿瘤患者，身体可看成是由体循环和腹腔两室组成的，药物进入腹腔后以一定的速度被清除，清除的速度由药物本身的因素如摩尔重量、电荷性、脂溶性和腹膜两方面共同决定的。分子量大，脂溶性小的药物在腹腔中清除的慢，而药物在体循环中是由肝代谢和肾清除，清除的快。因而腹腔内给药可提高并保持药物在腹腔内的浓度，较体循环给药有动力学优势。因而腹腔内化疗在临床上被广泛采用。多数学者［5�8］从动物及人体试验中已肯定了腹腔内化疗的疗效。与经静脉化疗组相比，腹腔化疗组的腹腔肿瘤复发率明显减少，且术后早期化疗更为合理，疗效更加肯定［9，10］。然而多数患者腹腔内化疗常伴有许多并发症如恶心、呕吐、腹痛、白细胞减少、持续性肠麻痹，严重者出现肠瘘、吻合口瘘和化学性腹膜炎、肠粘连、肠梗阻，严重者形成腹腔粘连和腹膜纤维化，并严重影响疗效［11］。这些并发症主要是因为化疗药的一次使用剂量过大引起的化学性损伤及毒性反应所致。并且，不仅仅是腹腔内大剂量化疗会带来严重的副损伤，大剂量的动静脉化疗也会致较重的不良反应。近年，有研究显示，静脉小剂量多次化疗也取得了较满意的疗效。
我们的实验结果表明，与对照组相比，用药后第2、3、6天时治疗组腹膜瘤结节数明显减少，有统计学意义，提示腹腔注射大小剂量顺铂治疗小鼠腹膜移植瘤均有明显疗效，疗效在用药后6 d时仍然明显。采用总量相同的顺铂进行化疗，用药后第3天时小剂量顺铂组的瘤结节数量明显少于大剂量顺铂组，有统计学意义，用药后6 d时仍存在统计学差异。这提示连续小剂量化疗疗效明显好于一次大剂量化疗。这可能是因为连续注射顺铂能够使腹腔内保持足够长时间的有效血药浓度，致使肿瘤细胞局部吸收足够量的顺铂所致。而一次大剂量化疗，虽然量大，但是经腹膜吸收代谢后，不能较长时间保持有效血药浓度，而使远期疗效下降。我们在随后的药物测量实验中证实了这一假设，用药后3 d时，两组小鼠大网膜内顺铂含量无统计学差异，而在用药后6 d时，连续小剂量顺铂组大网膜内顺铂含量明显高于大剂量顺铂组，具有统计学意义。这说明连续腹腔内注射顺铂能使肿瘤局部长时间保持较高的药物浓度，从而有效的提高了远期疗效。我们在小鼠外周血顺铂含量的测定中同时发现，在用药后第3、6天时，小剂量顺铂组外周血顺铂含量明显低于大剂量顺铂组，有统计学意义。这提示我们，与一次大剂量化疗相比，小剂量连续化疗的外周血中血药浓度明显下降，这将有效的减少化疗药的全身毒不良反应。我们的实验结果显示了，腹腔内化疗能明显减少小鼠腹腔内瘤结节的形成，与一次大剂量化疗相比，小剂量连续化疗不仅疗效好，而且可能会减少全身毒不良反应，它提示小剂量连续腹腔化疗有望在临床推广应用，下一步拟进行临床前瞻性对照研究，以做出客观的评价。
参考文献
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11 王强，范列英.卡铂复合液腹腔内化疗时对成纤维细胞胶原合成和腹腔粘连的影响癌症,1996，15(6):433.
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