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【摘要】 目的 探讨血管紧张素II受体阻断剂洛沙坦对系膜增殖型肾炎家兔系膜细胞增殖、系膜基质增多的的药效和作用特点。方法 将雄性日本大耳白兔30只随机分成正常对照组、病理模型对照组和洛沙坦治疗组。建立家兔系膜增殖型肾炎模型。双缩脲法测定洛沙坦对系膜增殖型肾炎家兔24 h尿蛋白排泄量；放免法测定血浆中内皮素及降钙基因相关肽的水平；自动图像分析仪测定各组肾小球的定量指数，系膜基质指数；用免疫组化法观察肾组织增殖性细胞核抗原(PCNA)表达。结果 与病理模型对照组相比，洛沙坦治疗组家兔24 h尿蛋白排泄量明显下降(P[1]。用前将洛沙坦研细，加双蒸水配成2 g/L液体。�
1．1．3 试剂 不完全弗氏佐剂，批号99012；完全弗氏佐剂，批号01585；大肠杆菌内毒素，批号01318; 牛血清白蛋白，批号990118，均为美国Sigma公司产品。ET-1、CGRP、羊抗兔组织增殖性细胞核抗原(ProliferatingCellNuclearAntigen， PCNA)、S-P试剂盒均为北京美迪科生物技术有限公司产品。�
1．1．4 仪器 自动图像分析仪，北京航空航天大学研制生产；γ计数仪，军事医学科学院免疫研究所生产； OLYMPUS光学显微镜(CHD型)； 低温离心机(日本久保田KR-180FA型)。�
1．2 方法�
1．2．1 动物处理 实验动物适应性喂养1周后随机分为正常对照组(N组，10只)，病理模型对照组(M组，10只)和洛沙坦治疗组(L组，10只)，分组后第1周采用章友康等[1]报道的家兔慢性血清病所致家兔MSPGN的方法复制共6周，建立MSPGN模型。第2周开始施以处理因素。全部动物均经胃灌服给药，L组灌服洛沙坦，N组及M组灌服相应量生理盐水。第8周末处死动物，取相应标本检测。�
1．2．2 24 h尿蛋白排泄量采用双缩脲法 于实验前及以后每周末采集标本检测。�
1．2．3 血浆ET-1、CGRP的测定第8周末各组家兔取心脏血6 ml，严格按ET-1、CGRP的测定试剂盒方法操作步骤进行，然后在自动γ计数器上测定出衰减数值，计算出ET-1与CGRP的含量。�
1．2．4 免疫组化染色 将石蜡包埋的肾组织切成4 μm切片，按S-P试剂盒说明书进行染色。高倍镜下细胞核内褐色颗粒状着色为PCNA阳性细胞。高倍镜下计数每肾小球(以每100个有核细胞为单位)中的PCNA阳性细胞。�
1．2．5 肾组织学观察 光镜：肾标本用HE、PAS、PASM、PTH 4种方法染色，PAS染色采用自动图像分析系统在400倍下行病理学图像分析。每个标本分别取10个大小相近的肾小球，测定肾小球面积(μm2)丝球体面积(μm2)系膜区面积(μm2)。�
1．3 统计学方法 实验数据以（x±s）表示，统计分析应用SPSS13．0分析软件处理。多组间比较用K检验，两组间比较用q检验。�
2 结果�
2．1 除治疗组一只动物因灌胃窒息死亡外，其余动物皆一般性状良好。�
2．2 24 h尿蛋白定量从实验第2周开始M组和L组24 h尿蛋白定量明显高于N组(P[1]方法成功建立家兔系膜增殖型肾炎模型。此种模型具有以下特点：制模时间相对较短(6周)，病理改变为肾小球系膜细胞增生，系膜基质增多，8周末有部分肾小球出现了硬化征像，实验期间不会造成肾功能异常。这与人类大多数慢性肾小球肾炎在病理及发病机制方面都非常相似。在免疫病理损伤下，肾小球炎症及高凝状态致使肾组织灌流减少，肾小球毛细血管丛、内髓集合管系统及系膜细胞能大量合成ET-1[2]，ET-1又能收缩肾血管，影响肾灌流，降低肾小球滤过率,还能促进系膜细胞增殖、分泌肿瘤坏死因子，加重炎症反应，增加肾血管通透性，与尿蛋白排泄呈正相关[2]。CGRP为ET-1生理性拮抗剂,具有舒血管作用,能抑制肾小球系膜细胞IL-1 mRNA基因表达,亦能拮抗血管紧张素促系膜细胞的收缩作用,从而减轻肾小球炎症反应[3]。ET-1、CGRP代谢失衡加重炎症与高凝状态,造成恶性循环。本实验也证明家兔MSPGN病理组ET-1升高，CGRP降低，肾脏病理改变明显加重。血管紧张素II受体阻断剂洛沙坦具有使肾脏局部的Ang II含量明显下降。原因是认为洛沙坦的作用具有组织特异性[4]，其在肾脏的作用最敏感，增加肾血流及对出球小动脉的扩张减少肾血管内的压力，保护肾功能。本研究中，给系膜增殖型肾炎家兔应用洛沙坦治疗后家兔的尿蛋白排出明显减少。PCNA增殖核细胞抗原免疫组化亦显示，阳性细胞数明显少于模型对照组，PCNA是一种DNA聚合酶的辅助蛋白，其分子量为
36 000，其作用是促进DNA聚合酶与延伸DNA链，具有增强DNA聚合酶II活性的作用，它在S期的细胞核中达到高峰。因此PCNA可作为判断肾小球系膜细胞增生的一种标志[5]。系膜增殖型肾炎家兔组经洛沙坦治疗后,血浆ET-1浓度病理组明显降低,CGRP浓度较病理组明显升高,提示洛沙坦有可能通过降低ET-1、增加CGRP的分泌释放途径，减少系膜细胞增生，系膜基质的增多，防治肾小球硬化的进展。�
参考文献
［1］ 章友康，王海燕，王叔咸，等.慢性改进性血清性肾炎模型制作方法.中华肾脏病杂志,1986,1:1-3.�
［2］ 余学清,李惠群,叶任高,等.慢性肾脏病患者尿中内皮素变化及其临床意义.中华肾脏病杂志,1995,11(1):91-93.�
［3］ 赵志辉,王海燕，等.地塞米松、CGRP、THP对系膜细胞与IL-1相互作用的影响.中华肾脏病杂志,1994，10(5)：262-264.�
［4］ 周宏濒，主编.分子药理学.血管紧张素II受体阻断剂.哈尔滨黑龙江科学技术出版社，1999：100-102.�
［5］ Dierendonk JHV,wijsman JH,Keijzer R,et al..cell-cyele-relatedstainingpatternsofantproliferatingcellnuclearantigenmonclonalantibodies,
comparisonwithbudurdlabelingandKi-67staining.AmJPathol,1991,139:1165-1169.�
