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【摘要】 目的 研究贲门腺癌经典多药耐药机制。方法 用流式细胞术检测55例贲门腺癌患者癌组织和距离肿瘤5 cm以上癌旁正常组织P糖蛋白。结果 55例贲门腺癌组织P糖蛋白阳性表达率为50．9%,癌旁正常组织未见P170表达，两者差别有统计学意义。结论 贲门腺癌存在经典多药耐药机制,检测癌组织P糖蛋白对化疗药物选择及逆转多药耐药具有重要意义。�
【关键词】贲门肿瘤；P糖蛋白；流动血细胞计数
Study on typical multidrug resistance mechanism of cardiacadenocarcinoma
PENG Xue-hong,CHEN Nuan,XU Jian-heng，et al.Department of Chest Surgery,The First Affiliated Hospital ofMedical College of Shantou University,Shantou Guangdong Province 515041,China
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【Abstract】 Objective To study the typical multidrug resistance mechanism of cardiac adenocarcinoma.Methods The expression of P170 protein in 55 cases of cardiac adenocarcinoma was detected by flow cytometry.Results The positive expression rate of P170 protein was 50．9%in 55 cases of cardiac cancer tissue.Normaltissue near cancer has no positive expression of P170 protein.There was an obvious difference between normal and cancer tissue.Conclusion There was typical multidrug resistance mechanism in cardiac adenocarcinoma,detection of P170 protein expression in cancer tissue had significance in selection of chemotherapeutic drugs andMDR reversion.�
【Key words】Cardiac neoplasms；P-glycoprotein；Flow cytometry
在肿瘤的治疗方法中，化疗占据着不可替代的地位。自从化疗药物应用于临床以来，虽对少数恶性肿瘤的治疗取得了成功，但在大多数恶性肿瘤中收效却不大，这其中一个很重要的原因就是肿瘤细胞对化疗药物产生了耐药性。本文应用流式细胞术检测贲门腺癌P糖蛋白(p-glycoprotein，P-gp)，研究由P糖蛋白介导的经典多药耐药机制。�
1 资料与方法�
1．1 一般资料 近2年住院手术的贲门腺癌患者55例，男47例，女8例。 年龄47~76岁。入选标准：术前经胃镜病理活检确诊为贲门腺癌，术前未接受化疗，肿瘤病灶起源于贲门，性别、年龄不限。术中取贲门癌组织及距离肿瘤5 cm以上癌旁正常组织各1块，采用流式细胞术，检测P糖蛋白。�
1．2 试剂 鼠抗人MDR产物，(P-gp)单克隆抗体(Immunotech公司，法国)，FITC标记兔抗鼠Ig(Dako公司，丹麦)。�
1．3 流式细胞仪检测方法�
1．3．1 实体瘤组织单细胞悬液制备 术中取新鲜贲门癌及距离肿瘤5 cm以上正常癌旁组织0．2~1．0 g，以生理盐水洗去血迹，至于重叠的100目铜网和260目尼龙网上，以眼科剪剪成1 mm�3碎块，在以眼科镊夹持组织在铜网上轻挫，边挫边以磷酸盐缓冲液(PBS)将挫下的细胞洗入网下的平皿内，直至组织挫完。将收集的细胞悬液以260尼龙网过滤1次去除组织碎块，收入10 ml试管内离心(1500 r/min ，10 min)， 弃去上清再以PBS漂洗，同前述方法离心2次，均弃上清，备用。�
1．3．2 免疫标记 标记前用PBS漂洗离心1次(1 500 r/min，10 min)以去除固定剂，再将每份悬液分2管，其一加20 μl P170工作液(一抗)，其二加20 μl羊抗鼠IgG(一抗)工作液，室温下20 min，离心(2 000 r/min，5 min)，除上清后加1 ml PBS漂洗离心2次，再向上两管中各加20 μl羊抗鼠IgG-FITC、室温避光30 min，离心后去除上清以除去未结合的荧光抗体，以PBS漂洗离心2次，均弃上清，最后加500 μl PBS待检。取少许细胞液涂片，在荧光镜下可见P-gp阳性细胞光点位于细胞膜上。�
1．3．3 流式细胞仪检测 上机前以标准荧光微球调整仪器使变异系数在2．0%以内，上机后收集2万个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试后在计算机上用Cell Quest Plot软件分析数据，由打印机打印结果，包括点图和组方图。MDR1表达产物P-gp含量以P-gp阳性细胞百分率表示(细胞膜含P-gp的细胞称为P-gp阳性细胞)，其计算方法：P-gp阳性细胞%＝P-gp阳性细胞数/(P-gp阴性+P-gp阳性细胞数)×100%-非特异结合细胞数/所收集细胞数×100%。P-gp ≤2%为阴性，P-gP>2%为阳性。阳性表达程度：低表达P-gp值30%。�
1．4 统计学方法 本计数资料采用t检验。�
2 结果�
研究发现，在55例贲门腺癌患者中，癌组织P170表达阳性者28例，阳性表达率50．9%，其中低表达15例，中度表达11例，高表达2例。癌旁正常组织均未见P-gp表达，两组P-gp阳性表达率差别有统计学意义(P 非P-gp MDR尽管与前者有相同的交叉耐药模式，但并无P-gp表达，而是由多药耐药相关蛋白基因(muhidrug resistance-associated rotein，MRP)基因编码的190 KD跨膜糖蛋白MRP过表达引起；另外有编码分子量为110 KD蛋白的肺耐药蛋白(1ung resistance protein，LRP)基因，在许多非P-gp机制的肿瘤细胞中过度表达，与细胞的MDR表型有关；属于此类的还有乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、蒽环类耐药相关蛋白(ARA)等。�
非典型MDR(atMDR)则无药物积聚的减少，而与一种积极参与细胞毒药物致死反应的拓扑异构酶Ⅱ含量及活性的改变有关；GST-GSH(谷胱甘肽转移酶．谷胱甘肽)加速化学药物代谢而产生耐药；另外钙调蛋白、金属硫蛋白、细胞修复功能加强、药物分布变化、P53基因突变与耐药等均有一定关系。�
P-gp介导的经典多药耐药机制是临床上肿瘤化疗药物治理效果不佳的主要原因。目前，在肾癌，肺癌，肝癌，胰腺癌均检测出P-gp的表达[1-8]。P-gp在贲门腺癌的表达，国内外研究较少。张力建等[9]采用免疫组织化学方法检测43例贲门癌患者P-gp蛋白,表达阳性率41．9%。本研究发现,贲门腺癌组织有P-gp蛋白表达,阳性表达率50．9%，癌旁正常组织未见P-gp蛋白表达,两者差别有统计学意义(P
