【www.zhangdahai.com--可行性研究报告】
【摘要】 目的观察血必净注射液对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用。方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症模型组(CLP组)及血必净治疗组(XBJ组)，每组10只。Sham组只开腹关腹，余同CLP组；CLP组采用盲肠结扎穿孔法造模；XBJ组造模后立即经腹腔注射血必净注射液8 ml/kg。观察24 h后检测血清肌钙蛋白I(TnI)、脑钠肽（BNP）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β，留取左心室心肌组织观察超微结构的改变。结果 ①脓毒症状态下TnI、BNP、TNF-a、IL-1β水平显著升高，应用血必净注射液后各项指标明显改善。②血必净组心肌组织超微结构的损害较脓毒症组明显减轻。结论 血必净注射液能改善脓毒症大鼠的心肌损伤，其机制可能与下调TNF-a、IL-1β水平有关。
【关键词】脓毒症；血必净注射液；心肌损伤；炎症因子；组织结构
Protective effect of Xuebijing injection on myocardiac injury in rats with sepsis
QUE Gan-bo，DENG Xing，XIAO Xiong-jian,et al．Intensive Care Unit, The Second Hospital of Longyan, Fujian 364000,China
【Abstract】 ObjectiveTo investigate the protective effect of Xuebijing injection on myocardiac injury in rats with sepsis，and the possible mechanism of such effect．Methods Thirty SD rats were selected and randomly divided into sham operation group(Sham)，sepsis group(CLP)and treatment group with Xuebijing injection(XBJ)，with 10 rats in each group．In sham group，only open-close abdomen was performed．In CLP group，cecal ligation and puncture(CLP)was performed to induce sepsis．Xuebijing injection(8 ml/kg)was administered via celiac in XBJ group after CLP．Serum concentrations of troponin-I(TnI)，brain natriuretic peptide(BNP) ，tumor necrosis factor-α(TNF-α) and interleukin(IL)-1β were measured．Ultrastructure changes in myocardium were examined．ResultsThe levels of TnI，BNP，TNF-α and IL-1β were increased significantly in rats with sepsis，and were decreased by Xuebijing injection in rats with sepsis．There were less myocardial ultrastructure injuries in Xuebijing group than in sepsis group．Conclusion Xuebijing injection improves myocardiac injury in rats with sepsis，possibly through down-regulating serum TNF-α and IL-1β levels．
【Key words】Sepsis; Xuebijing; Myocardiac injury; Inflammatory factor; Histomorphology
脓毒症是严重创伤、感染、休克、大手术后常见的并发症。具有发病率、病死率、住院费用高的特点。心肌细胞损伤是脓毒症的常见并发症之一，并可致其他器官功能障碍。血必净注射液是由天津急救医学研究所研制的防治脓毒症多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)的一味纯中药制剂，其有效成分为红花、赤芍、川芎、丹参、当归等，可以抗菌、抗内毒素和拮抗炎症因子[1]，已在临床中广泛应用于危重患者的救治。本研究采用盲肠结扎穿孔法(cecal ligation puncture，CLP)制备大鼠脓毒症模型，观察血必净注射液对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用，评价其可能的作用机制，以期为临床防治脓毒症并发心肌损伤提供理论依据。
1 材料与方法
1．1 动物分组与处理 健康SD大鼠30只（上海斯莱克实验动物有限公司），体质量200～250 g，雌雄不限，随机分为3组：①假手术组(Sham组，n=10)，不进行盲肠结扎穿孔术,于假手术前1 h腹腔注射8 ml/kg的生理盐水；②脓毒症组(CLP组，n=10)，于盲肠结扎穿孔术前1 h注射8 ml/kg的生理盐水；③血必净组（XBJ组，n=10），于盲肠结扎穿孔术前1 h腹腔注射8 ml/kg血必净注射液（天津红日药业股份有限公司提供）。
假手术组动物只开腹、关腹与复苏，但不结扎、不穿孔盲肠。各组动物观察至24 h采集腹主动脉血，抗凝剂分离后于-20℃冰箱保存待测，同时留取左心室组织于电镜固定液中保存。盲肠结扎穿孔术（caecum ligation perforation，CLP）制备ALI动物模型参考文献[2]，术毕立即皮下注射50 ml/kg林格氏液抗休克。
1．2 检测指标与方法 ①血浆肌钙蛋白I（troponin I,TNI）：化学发光法测定（试剂盒由拜耳公司提供）；②血浆脑钠肽（brain natriuretic peptide,BNP）：电化学发光法法测定（试剂盒由罗氏公司提供）；③肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)：酶联免疫吸附法测定（试剂盒由晶美生物工程有限公司提供）；④白细胞介素（interleukin-1β，IL-1β）：酶联免疫吸附法测定（试剂盒由晶美生物工程有限公司提供）；⑤心肌组织电镜观察：在日立Hu-12A型透射电镜下观察并摄片。
1．3 统计学方法 数据以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 16．0统计软件处理，多组均数间比较进行方差齐性检验和单因素方差分析（one-way ANOVA），以P<0．05为差异有统计学意义。
2 结果
2．1 血浆TNI、BNP、TNF-α和 IL-1β的变化 CLP组TNI、BNP水平较Sham组升高（P<0．05），应用血必净治疗后明显下降（P<0．01），但未下降到正常水平；CLP组TNF-α和 IL-1β水平较Sham组升高（P<0．05），应用血必净治疗后明显下降（P<0．01），差异具有统计学意义（见表1）。
2．2 心肌组织超微结构变化 Sham组心肌细胞结构正常，线粒体无肿胀，嵴排列整齐，心肌纤维排列规则（见图1）。CLP组线粒体减少，肿胀变形，外膜不清，空泡化，核糖体脱颗粒，嵴减少或消失，排列紊乱。肌丝、肌节结构断裂缺失，核膜破裂，细胞基质稀少（图2）。XBJ组病变较脓毒症组减轻，线粒体肿胀较轻，膜尚完整，嵴略稀疏，部份线粒体破坏，排列仍规则，肌丝结构排列尚规则（图3）。
3 讨论
脓毒症是一个相当复杂的病理生理过程，是危重症患者最常见的并发症之一，常导致脓毒症休克，多器官功能障碍综合征，是目前临床上发病率高、病死率高、住院时间长、住院费用高的重要因素之一[3]。心肌损伤是脓毒症常见和重要的并发症之一，发生率很高，在临床上常伴有心律失常，低血压和心力衰竭，可加重其他器官功能的进一步损害[4]。脓毒症心肌损伤的具体机制目前尚未完全明确，但多数人认为可能和炎症介质（如TNF-α、IL-1、IL-6）、氧自由基损伤、血管内皮细胞损伤、NO及钙离子超载有关。
TnI是公认的反映心肌损伤程度高敏感高特异的“金标准”[5]，可反映心肌损伤严重程度，并对心肌损伤的预后具有评估价值，广泛应用于心肌损伤的诊断。BNP具有利尿、利钠、扩张血管和降压作用，并拮抗肾素-血管紧张肽-醛固酮系统和交感神经活性，在调节体液容积、血管压力和电解质平衡方面起着重要的作用。有研究显示，BNP可用于检测脓毒症时的心肌功能障碍，同时与患者的预后密切相关[6]。本实验发现脓毒症状态下TnI、BNP显著增高，说明脓毒症状态下存在心肌损伤，其原因主要考虑在脓毒症过程中，心肌细胞损害多为细胞亚微结构改变，心肌内肌钙蛋白裂解为较小片段，心肌细胞膜通透性增加，从而导致血浆肌钙蛋白水平升高[7]。此外，笔者通过电镜观察到脓毒症大鼠心肌线粒体破坏，肌丝、肌节结构断裂缺失，核膜破裂。提示心肌结构的改变也参与脓毒症状态下心肌损伤的发生。
TNF-α、IL-1β是脓毒症状态时产生的主要炎症介质，介导多器官功能的损伤。目前有关严重脓毒症及感染性休克心肌损伤机制研究最充分、结论最趋一致的致伤因子为TNF-α、IL-1[8]。TNF-a具有广泛的生物学效应，可诱导IL-1β、IL-6等多种炎性因子产生。炎性因子可上调黏附分子，增强激活的淋巴细胞和中性粒细胞对心肌细胞的黏附，促进中性粒细胞释放氧自由基，导致心肌损伤。TNF-α还可通过过量分泌一氧化氮导致血管低反应性，直接引起心肌组织灌注不足[9]。本实验中脓毒症大鼠血清TNF-α、IL-1β水平明显升高，支持TNF-α、IL-1β是脓毒症时心肌损伤的相关因素。
血必净注射液具有抑制体内多种炎性介质、调节免疫、促进单核细胞HLA-DR抗原表达、改善微循环、保护血管内皮、抗凋亡、改善内毒素引起大鼠器官超微结构损伤等多重功效。动物和临床实验均发现血必净注射液可以提高脓毒症和M0DS的生存率、改善脏器功能[10]。在本实验中，在使用血必净注射液处理后，心肌组织形态学改变减轻，TnI、BNP、TNF-α、IL-1β水平下降。笔者认为血必净注射液能改善脓毒症大鼠心肌损伤，其机制与血必净注射液下调TNF-a、IL-1β水平，降低TnI、BNP水平，减轻心肌细胞损伤有关。
本动物实验研究表明，血必净注射液对脓毒症造成的心肌损伤具有保护作用，其机制可能与血必净对细胞因子和炎症介质的调节有关，这为临床使用血必净注射液治疗脓毒症所致心肌损伤提供理论依据。
参考文献
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