茶多酚维E硒对小鼠抗氧化功能的影响

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摘要：茶多酚、维生素Ｅ和硒都是较强的抗氧化剂，对多种疾病具有预防和治疗作用。试验选用５０只昆明清洁级小鼠，采用不同剂量茶多酚维Ｅ硒胶囊连续灌胃３０ ｄ，通过测定小鼠受试前后体重、血清超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力及８Ｇｙ６０Ｃｏγ射线造模前后肝组织丙二醛（ＭＤＡ）含量、ＳＯＤ和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活力，研究茶多酚维Ｅ硒胶囊对小鼠抗氧化系统的影响。结果显示，与模型对照组相比，各剂量茶多酚维Ｅ硒胶囊对造模后小鼠肝组织ＳＯＤ活力无显著影响；７５、１５０ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ茶多酚维E硒胶囊对造模后小鼠肝组织ＭＤＡ含量和ＧＳＨ－Ｐｘ活力也无显著影响；３００ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ茶多酚维E硒胶囊剂量组可显著降低造模后小鼠肝组织ＭＤＡ含量，提高其ＧＳＨ－Ｐｘ活力。以上结果为茶多酚、维生素Ｅ和硒在食品及保健品中的联合应用提供了理论依据。

关键词：茶多酚；维生素Ｅ；硒；小鼠；抗氧化

中图分类号：Ｒ２８４；Ｑ９４６．８文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０14）09－2114-03

Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔｅａ Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ，Ｖｉｔｍｉｎ Ｅ ａｎｄ Ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｏｎ the Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｅ

ＬＩ Ｘｉａｏ－ｐｉｎｇ， ＨＵＡＮＧ Ｙｕａｎ－ｙｉｎｇ， ＹＩＮ Ｇｕａｎｇ－ｌｉｎｇ， ＪＩＡＮＧ Ｌｉ

（Ｂｙ－ｈｅａｌｔｈ Ｃｏ， Ｌｔｄ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６６３， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ， ＶＥ ａｎｄ ｓｅｌｅｎｉｕｍ are ｓｔｒｏｎｇ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ， useful ｆｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍａｎｙ ｄｉｓｅａｓｅｓ． ５０ ＣＬ Ｋｕｎｍｉｎｇ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｌｌｏｃａｔｅｄ ｔｏ ５ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅ ｏｆ ｃａｐｓｕｌｅ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ， ＶＥ ａｎｄ ｓｅｌｅｎｉｕｍ for ３０ ｄａｙｓ． Ｔｈｅ ｉｎｄｉｃｅｓ ｆｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔs ｏｆ ｔｈｅ ｃａｐｓｕｌｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｓｙｓｔｅｍｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ｗｅｉｇｈｔ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｍｉｃｅ， ＳＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｒｅｄ ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ＭＤＡ ｃｏｎｔｅｎｔ， ＳＯＤ ａｎｄ ＧＳＨ－Ｐｘ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ８Ｇｙ６０Ｃｏγｒａｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｅｆｆｅｃｔs ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅｓ ｃａｐｓｕｌｅ ｏｎ ｌｉｖｅｒ ＳＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ． ７５ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ ａｎｄ １５０ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ ｃａｐｓｕｌｅ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ＭＤＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ＧＳＨ－Ｐｘ ａｃｔｉｖｉｔｙ of liver． Ｂｕｔ ３００ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ ｃａｐｓｕｌｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ＭＤＡ ｃｏｎｔｅｎｔ（１３２．９±１９．４ ＶＳ １７０．１±２２．９） ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ＧＳＨ－Ｐｘ ａｃｔｉｖｉｔｙ （２３．０±２．６４ ＶＳ １９．１±２．９７） ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ control ｇｒｏｕｐ． Ｉｔ will provide ａ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒ comprehensive ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ， ＶＥ ａｎｄ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ｆｏｏｄｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ； ｖｉｔａｍｉｎ Ｅ； ｓｅｌｅｎｉｕｍ； mice ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ

生理条件下机体的氧化与抗氧化系统处于动态平衡，而在多种氧化应激条件下（如低氧、中毒和辐照等），机体氧化与抗氧化平衡失调，从而诱导氧化应激的产生。目前证实氧化应激能诱发动脉粥样硬化、高血压等多种慢性疾病，严重影响人类健康。因此利用抗氧化剂清除氧化应激产生的自由基成为化学、生物和医学等领域的研究热点。

茶叶中对人体健康最有益的物质是具有强抗氧化能力的茶多酚，是茶叶中多酚类物质的总称。主要可分为儿茶素类、黄酮及黄酮醇类、花青素类、酚酸及缩酚酸类。茶多酚的抗氧化作用是由于儿茶素Ｂ环和Ｃ环上的酚羟基持有供氢体的活性，在氧化过程中生成邻醌类及联苯酚醌。它可以有效清除氧自由基和脂类自由基，防止脂质过氧化，从而预防心血管疾病、肿瘤等疾病的发生［１］。已有研究表明抗氧化剂之间存在良好的协同效应，这种效应同样适用于茶多酚。现有研究证实，茶多酚和维生素共同使用可增加茶多酚的抗氧化［２－４］、抑菌［５－７］、降低自由基损伤［８］和保鲜［９］等作用。而在动物试验中，国内外大量文献证明了维生素Ｅ和硒联合使用能起到协同增效的抗损伤［１０］、抗氧化作用［１１，１２］。因此本试验用茶多酚维Ｅ硒胶囊对小鼠进行抗氧化功能研究，初步探讨多种抗氧化剂的协同增效机理。

１材料与方法

１．１样品

汤臣倍健茶多酚维Ｅ硒胶囊，批号：２０１０１００１，送检品为粉末（胶囊内容物），推荐成人服用量为０．９ ｇ／（人·ｄ）。试验时样品均采用蒸馏水配制和稀释。

１．２试验动物

清洁级昆明种雌性小鼠共５０只，体重１８～２２ ｇ，由四川省中医药科学院提供［合格证号：ＳＣＸＫ（川）２００８－１９］。试验前检疫１周，整个试验过程中，试验动物饲养于屏障级动物房（许可证号：四川省试验动物管理委员会第００１号），动物自由摄食和饮水，动物房温度２０～２３ ℃，相对湿度５５％～６５％。

１．３剂量分组

茶多酚维Ｅ硒胶囊按成人每日推荐服用量的５倍、１０倍、２０倍设３个剂量组，即７５、１５０和３００ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ，每天分别称取７５、１５０和３００ ｍｇ受试物，各加蒸馏水至２０ ｍＬ混悬，按每１００ ｇ体重２ ｍＬ给动物灌胃。另设模型对照组和空白对照组。

１．４主要仪器和试剂

７２００型分光光度计，恒温水浴箱，微量可调加样器，高速离心机和低速离心机，漩涡混运器，ＤＹ８９－１型电动玻璃匀浆机；丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）测定试剂盒（购于南京建成生物工程研究所，４ ℃冰箱保存）；三氯甲烷、无水乙醇、冰乙酸等均为分析纯。

１．５试验方法

５０只小鼠随机分为５个组，每组１０只。茶多酚维E硒胶囊各剂量组小鼠每天灌胃给予不同剂量的茶多酚维E硒胶囊；模型对照组和空白对照组小鼠灌胃给予等体积蒸馏水，连续３０ ｄ。试验开始前、试验中期及试验结束时对各组小鼠称重。３０ ｄ后，尾部取血测超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力。同时，除空白对照组外，各组给予８Ｇｙ６０Ｃｏγ射线全身一次性照射，照射后第四天处死全部动物，取０．２～０．３ ｇ肝组织，用冷生理盐水制成１０％的肝匀浆，４ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ。直接取１０％肝匀浆上清液１００ μＬ测定ＭＤＡ含量，１０％肝匀浆上清液稀释１０倍后取１０ μＬ测定ＳＯＤ活力，１０％肝匀浆上清液稀释４０倍后取２００ μＬ测定ＧＳＨ－Ｐｘ活力。测定的具体方法按照南京建成生物工程研究所购买的ＭＤＡ、ＳＯＤ和ＧＳＨ－Ｐｘ试剂盒说明书进行。

１．６数据统计

试验数据均以平均数±标准差表示。采用ＰＥＭＳ３．０《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包（第三版）对试验数据进行处理。

２结果与分析

２．１茶多酚维Ｅ硒胶囊对小鼠体重的影响

由表１可见，在试验期间，各组小鼠体重差异不显著（Ｐ＞０．０５），表明茶多酚维Ｅ硒胶囊对小鼠体重无显著影响。

２．２茶多酚维Ｅ硒胶囊对造模前小鼠血清ＳＯＤ活力的影响

由表２可见，造模前各组小鼠血清中ＳＯＤ活力差异不显著（Ｐ＞０．０５）。表明茶多酚维Ｅ硒胶囊对小鼠血清ＳＯＤ活力无显著影响。

２．３茶多酚维Ｅ硒胶囊对小鼠肝组织ＭＤＡ含量的影响

由表３可见，模型对照组小鼠肝组织中ＭＤＡ含量显著（Ｐ＜０．０５）高于空白对照组，茶多酚维Ｅ硒胶囊３００ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ剂量组小鼠的ＭＤＡ含量与模型对照组相比显著（Ｐ＜０．０５）降低，茶多酚维Ｅ硒胶囊７５和１５０ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ剂量组与模型对照组相比差异均不显著（Ｐ＞０．０５）。

２．４茶多酚维Ｅ硒胶囊对小鼠肝组织ＳＯＤ活力的影响

由表４可见，模型对照组小鼠肝组织中ＳＯＤ活力显著（Ｐ＜０．０５）低于空白对照组，茶多酚维Ｅ硒胶囊各剂量组小鼠的ＳＯＤ活力与模型对照组相比差异均不显著（Ｐ＞０．０５）。

２．５茶多酚维Ｅ硒胶囊对小鼠肝组织ＧＳＨ－Ｐｘ活力的影响

由表５可见，模型对照组小鼠肝组织中ＧＳＨ－Ｐｘ活力显著（Ｐ＜０．０５）低于空白对照组，茶多酚维Ｅ硒胶囊３００ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ剂量组小鼠的ＧＳＨ－Ｐｘ活力与模型对照组相比显著（Ｐ＜０．０５）升高，茶多酚维Ｅ硒胶囊７５和１５０ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ剂量组与模型对照组相比差异均不显著（Ｐ＞０．０５）。

３小结与讨论

自由基是机体正常代谢过程中的产物，具有强氧化性，机体内自由基过剩可引起脂质过氧化及生物膜损坏，导致肿瘤及心血管疾病等［１３］。茶多酚具有吸收放射性物质毒素的能力，口服和外用茶多酚能抵抗辐射产生的轻度放射病及治疗血细胞减少症。王岳飞等［１４］的研究表明，茶多酚对辐照损伤引起的ＮＩＨ小白鼠及荷瘤小鼠红细胞与白细胞减少均有明显抑制作用，表明茶多酚对辐照所致的血象损伤有明显的防护作用。现有研究表明，茶多酚和维生素Ｃ、维生素Ｅ之间都存在协同抗氧化作用［１，１５］。维生素Ｅ和硒都是人和动物体内的必需营养素，除发挥重要的生理功能外，同时使用能互补、协同、增效［１６－１８］。

本试验应用茶多酚、维生素Ｅ和硒的混合物对小鼠进行抗氧化研究，而肝脏作为机体的生化代谢中心也是对脂质过氧化最敏感的器官，肝脏损伤与氧化应激有明显关系，因此本研究选择肝组织ＭＤＡ、ＳＯＤ和ＧＳＨ－Ｐｘ作为研究指标，初步探讨茶多酚维Ｅ硒胶囊的抗氧化活性。结果表明，茶多酚维Ｅ硒胶囊各剂量对试验小鼠体重和造模前血清ＳＯＤ活力均无影响，提示茶多酚维Ｅ硒胶囊在７５～３００ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ剂量范围内对小鼠无毒副作用。在本研究范围内，低、中浓度（７５、１５０ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ）茶多酚维Ｅ硒胶囊剂量组与模型对照组相比没有显著增强小鼠的自由基清除能力，而高浓度（３００ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ）可明显降低小鼠肝组织ＭＤＡ含量、升高ＧＳＨ－Ｐｘ活力。王岳飞等［１９］研究显示，茶多酚与几种天然抗氧化物质的协同抗氧化作用与抗氧化物质本身的抗氧化能力、抗氧化物的有效浓度等因素有关。抗氧化物之间的协同作用在抗氧化物本身有效浓度较低时协同作用也较低，随着有效浓度增加，协同抗氧化作用增加，达到峰值后继续增加有效浓度，协同作用减弱。协同作用的机理都是通过基于氧化还原电位差的偶联氧化。偶联作用一方面降低了直接反应的两种物质间的点位落差，使反应易于进行；另一方面，偶联的抗氧化剂油水分配系数互为补充，在某一体系中合理分布，充分发挥每一种抗氧化剂的功能，因而茶多酚与多种抗氧化剂联合应用后，其抗氧化效果大大增强［１５］，这也为茶多酚与其他抗氧化物配伍作为食品或保健品的原料或添加剂提供了理论依据。

４结论

本研究结果显示，辐照后，模型对照组小鼠的肝组织ＳＯＤ活力和ＧＳＨ－Ｐｘ活力与空白对照组相比均显著（Ｐ＜０．０５）降低、ＭＤＡ含量与空白对照组相比显著（Ｐ＜０．０５）升高，说明造模成功。茶多酚维Ｅ硒胶囊３００ ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ剂量组小鼠的肝组织ＧＳＨ－Ｐｘ活力与模型对照组相比显著（Ｐ＜０．０５）升高，ＭＤＡ含量与模型对照组相比显著（Ｐ＜０．０５）降低。综上所述，茶多酚维Ｅ硒胶囊对试验动物模型具有良好的抗氧化活性。

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