【www.zhangdahai.com--其他范文】
王丽霞，王宇栋，王鹏，刘新元，梁丙辰
（1.河北合佳医药科技集团股份有限公司，河北 石家庄 052165；
2.河北合佳医药科技集团合佳研究院，河北 石家庄 050035）
糖尿病是由于胰岛素分泌及作用缺陷引起的以血糖升高为特征的慢性代谢疾病，口服的降糖药包括胰岛素增敏剂（噻唑烷二酮类和双胍类）、胰岛素分泌促进剂（非磺酰脲类、磺酰脲类胰岛素分泌促进剂） 和α-葡萄糖苷酶抑制剂等。近年来，噻唑烷二酮类药物的几个品种包括曲格列酮、罗格列酮、吡格列酮等在临床应用过程中发现了肝损伤、心血管风险及诱发癌症风险等毒副作用，限制了这类药物的应用。新型降糖药二肽基肽酶-4 抑制剂类药物具有较好的安全性和耐用性，为糖尿病患者提供了一种新的用药选择，显示了良好的应用前景。
维格列汀是一种高效的选择性的Ⅳ型二肽基肽酶（DPP-4） 抑制剂，通过与DPP-4 结合形成DPP-4 复合物而抑制该酶的活性，在提高胰岛高血糖样多肽（GLP）-1 浓度、促使胰岛B 细胞产生胰岛素的同时，可降低胰高血糖素浓度，从而降低血糖，且对体重无明显影响。不会出现传统抗糖药的体重增加，胃肠道不适，低血糖等副作用。与传统抗糖药相比有巨大优势，故有广阔市场前景。
维格列汀（Vildagliptin），化学名（S）-1-[2-(3-羟基金刚烷-1-氨基)乙酰基]吡咯烷-2-腈，分子式为C17H25N3O2，相对分子质量为303.40。根据维格列汀原料药的合成工艺，可能存在较多杂质等，为了保证药品的安全性，现对自制的维格列汀原料药进行含量测定方法的研究，建立了高效液相色谱法（HPLC），方法简便、专属性强、重复性及耐用性良好。
本文针对自制的维格列汀原料药，对其主成分的含量进行了质量标准的建立，以控制药品质量。
1.1 仪器
e2695 高效液相色谱仪，美国Waters 公司。
ME155DU电子天平，METTLER TOLEDO公司。
Five EasyPluspH 计，METTLER TOLEDO公司。
1.2 试剂
维格列汀原料药（由河北合佳医药科技集团合佳研究院自制，批号202104001、202105002、202106001、202107003）；
维格列汀对照品（由原料药精制而得，经红外、紫外、质谱、核磁共振分析确证，批号202107001，HPLC 纯度为99.7%）；
原料、杂质1、杂质2（均由合成室自制，HPLC纯度分别为97%、95%、99%）；
乙腈为色谱纯；
其余试剂均为分析纯；
试验用水为超纯水。
2.1 色谱条件
色谱柱：伊利特Hypersil ODS2 （4.6×250 mm，5μm）；
流动相：乙腈：0.01 MKH2PO4（K2HPO4调节pH 至6.5±0.05） =30 ∶70；
稀释剂为0.2%（v/v） 盐酸溶液-乙腈（90∶10），流速为1.0 mL/min，温度为35 ℃，检测波长为210 nm，进样量为10 μL，检测时间为15 min。
2.2 溶液配制
2.2.1 对照品溶液
取维格列汀对照品（批号为202107001） 25 mg，精密称定，置于50 mL 容量瓶中，加入稀释剂溶解并稀释，制成1 mL约含维格列汀0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。维格列汀结构图如图1所示。
图1 维格列汀结构图Fig.1 Structure of vildagliptin
2.2.2 供试品溶液
取维格列汀供试品（批号为202104001） 25 mg，精密称定，置于50 mL 容量瓶中，加入稀释剂溶解并稀释，制成1 mL 约含维格列汀0.5 mg 的溶液，作为供试品溶液。
2.2.3 系统适应性溶液
取维格列汀供试品、原料、杂质1 和杂质2 各适量，置于10 mL 容量瓶中，加入稀释剂溶解并稀释，作为系统适应性溶液。
2.3 系统适用性及专属性试验
取稀释剂、对照品溶液和系统适应性溶液，分别采用高效液相色谱仪分析，记录色谱图，对照品溶液高效液相色谱图如图2所示。
图2 对照品溶液高效液相色谱图Fig.2 High High performance liquid chromatography of reference solution
系统适应性溶液高效液相色谱图如图3所示。
图3 系统适应性溶液高效液相色谱图Fig.3 High performance liquid chromatography of system adaptation solution
由图2和图3可以看出，稀释剂不干扰维格列汀主峰的测定，维格列汀主峰与原料及主要杂质也能达到基线分离。理论塔板数按维格列汀主峰计算为9 820，各相邻峰之间的分离度均＞1.5。
2.4 精密度试验
取“2.2”项下维格列汀对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续进样6 次测定，色谱峰面积的RSD 为0.47%。结果表明，方法的进样精密度良好。
2.5 检测限与定量限
取“2.2”项下维格列汀对照品溶液适量，进行逐级稀释后，精密量取10 μL 注入液相色谱仪，经分析，维格列汀的定量限为25 ng（S/N≈10）、检测限为8.3 ng（S/N≈3）。且定量限连续进样6针的峰面积的RSD 值为2.04%。
2.6 线性实验
精密称取维格列汀对照品250 mg 到50 mL 容量瓶中，得到储备液a，分别量取0.7、0.8、0.9、1.0、1.1 和1.2 mL 置于10 mL 容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，分别取10 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度（μg/mL） 对峰面积绘制标准曲线，线性回归方程和相关系数等结果见表1。
表1 线性回归方程和相关系数等结果Table 1 Summary of linear data
2.7 稳定性试验
取“2.2”项下供试品溶液于室温放置，并于0、2、4、8、12 和24 h 后测定，结果峰面积的含量在24 h 内均无明显变化（RSD 值≤2.0%），表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。
2.8 回收率试验
按“2.6”项下方法绘制工作曲线。精密量取20、25 和30 mg 各3 份分别置于50 mL 容量瓶中，配制成质量浓度分别为0.4、0.5 和0.6 mg/mL 的供试溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，以工作曲线折算实际测量值，进而计算各样品回收率。各浓度下平均回收率均在98%～102%之间，RSD 均＜2.0%。表明回收率良好。回收率数据汇总见表2。
表2 回收率数据汇总Table 2 Summary of recovery data
2.9 重复性试验
取批号为202104001 的维格列汀6 份，精密称定，加稀释剂溶解，分别取10 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图，计算样品含量的RSD=1.75%，表明方法的重复性良好。
2.10 样品测试
取维格列汀3 批原料适量，按“2.1”项下所述方法进行含量测试，样品测定结果见表3。
表3 样品测定结果Table 3 Results in detection of samples
3.1 色谱条件的优化
由于维格列汀为弱碱性物质，若流动相为酸性或中性溶液，则其在C18 色谱柱上不易洗脱或峰形严重拖尾。故采用磷酸二氢钾缓冲盐并使用磷酸氢二钾调节pH 至中性偏酸（6.5±0.05） 作为流动相，可使物质以阳离子的形式存在，同时保证主峰的保留时间、改善拖尾情况。
3.2 样品浓度的选择
通过进行不同浓度样品的高效液相色谱测试，发现样品浓度对分离及峰形影响较大。结果表明，维格列汀浓度较小时，样品分离情况较好，且半峰宽也较小。在满足检测灵敏度的前提下，选择较低的浓度对分离有利，因此确定样品质量浓度为0.5 mg/mL。
3.3 耐用性考察
根据以上色谱条件，分别考察了不同品牌色谱柱[Welch Ultimate XB-C18 (4.6 ×250，5 μm)、Waters XBridge C18(4.6×250 mm，5 μm)]、流速（0.95、1.05 mL/min）、柱温（33、37 ℃）、以及流动相比例（27∶73、33∶67）。结果表明，上述条件下各组分均能得到较好的分离，该方法耐用性较好。
通过HPLC 法测定维格列汀主成分的含量，结果显示，此高效液相色谱法采用等度洗脱的洗脱方法，主峰与主要杂质可实现完全分离、专属性强、灵敏度高、简化分析步骤、大大缩短分析时间，可作为维格列汀含量检测的方法。
猜你喜欢 维格稀释剂液相色谱仪 稀释剂的选择对环氧树脂性能的影响探究*广州化工(2022年11期)2022-06-29食品检测实验室中高效液相色谱仪的日常维护及应用食品安全导刊(2021年21期)2021-08-30稀释剂对环氧胶粘剂耐热性的影响粘接(2021年5期)2021-06-29液相色谱仪最小检测浓度测量结果不确定度评定科学与财富(2021年35期)2021-05-10分析高效液相色谱仪测定食品中苏丹红食品安全导刊(2020年14期)2020-12-04稀释剂对聚氨酯涂料性能和苯系物释放的影响森林工程(2020年5期)2020-09-17229Th的分离和测量方法核化学与放射化学(2020年4期)2020-08-21分析高效液相色谱仪测定食品中苏丹红食品安全导刊·中旬刊(2020年5期)2020-06-04寻找戴明王子儿童文学选刊(2019年7期)2019-09-10给他人一个解释的机会人生十六七(2014年12期)2014-11-27本文来源：http://www.zhangdahai.com/shiyongfanwen/qitafanwen/2023/0716/626138.html
