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【摘要】目的 研究线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道(mitoKATP)、一氧化氮合酶(NOS)在四氢生物蝶呤(BH4)减轻心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用。 方法将64只成年大白兔随机分成4组,建立Langendorff模型灌注其离体心脏,加入不同成分的K-H液灌流、停跳、复灌,观察冠脉流量(CF),测定冠脉流出液肌酸激酶(CK)的含量以及心室肌NO含量。 结果用含BH4的K-H液灌注的组Ⅱ再灌注后的CF、心肌NO含量增加,冠脉流出液中CK的含量降低。使用含NOS抑制剂L-NAME或mitoKATP抑制剂5-HD预处理,使CF降低,冠脉流出液中CK的含量升高,同时L-NAME预处理后的心肌组织NO含量较其它组下降,各差异均有统计学意义(P 1.2 主要仪器和试剂
自制Langendorff离体心脏灌注装置,全自动生化分析仪(美国Beckman公司, CX-4 型),L-NAME、5-HD、BH4购自美国Sigma公司。NO检测试剂盒购自南京建成生物有限公司。
1.3 离体心脏Langendorff灌流模型
实验动物3%戊巴比妥钠(30 mg/kg)麻醉,肝素钠(150 IU/kg)抗凝后,迅速开胸取出心脏,立即浸入4℃ K-H液中,排尽残血,连接于Langendorff模型灌注装置上,以37℃ K-H液经主动脉插管逆行灌注30 min,灌注压恒定为70 cm H2O,灌注液持续通入95%O2-5%CO2混合气(流量3 L/min)。停搏前20 min BH4+ L-NAME组(组Ⅲ)、BH4+5-HD组(组Ⅳ)分别用加入L-NAME、5-HD的K-H液进行灌注10min。停搏前10 min BH4组(组Ⅱ)、BH4+ L-NAME组、BH4+5-HD组均用加入BH4的K-H液灌10 min。经30 min灌流后,灌注40 ml 4℃ St. Thomas心脏停搏液进行停搏,时间30 s。心脏停跳期间温度保持在37℃~38℃。心脏缺血30 min后,以37℃ K-H液再灌注60 min。
BH4、5-HD、L-NAME最终浓度为10、100、100 μmol/L。
1.4 观察指标及方法
1.4.1 在灌注10min、再灌注10 min、再灌注30 min、再灌注60 min4个时点收集冠脉流出液记录冠脉流量CF。
1.4.2 全自动生化分析仪分析上述4个时点冠状动脉流出液CK含量。
1.4.3 分别取缺血30 min、再灌注60 min的心室肌,硝酸还原酶法测定心肌组织NO含量。
1.5 统计学处理
数据以均值±标注差( ±s)表示,用SPSS 13.0软件进行统计学分析。组间、组内数据比较均用方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1与对照组相比,用含BH4的K-H液灌注的组Ⅱ再灌注后的CF、心肌组织NO含量增加(P