超氧化物歧化酶活力测定 [生殖器疱疹患者超氧化物歧化酶活力及自然杀伤细胞表达的检测]

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   【摘要】 目的 研究生殖器疱疹患者氧化应激状态与细胞免疫水平。方法 收集24例生殖器疱疹患者和24例正常对照者的血清,采用透射比浊法测定超氧化物歧化酶的活力,流式细胞仪检测外周血自然杀伤细胞的表达水平。结果 生殖器疱疹患者超氧化物歧化酶活力明显低于正常对照者(t=-4.14, P=0.0001),自然杀伤细胞的表达水平明显低于正常对照组(t=-2.67, P=0.0133),患者超氧化物歧化酶活力与自然杀伤细胞的表达水平无显著相关性(r=-0.02566, P= 0.9170)。结论 生殖器疱疹患者存在氧化应激状态失衡,免疫功能低下。�
  【关键词】
  生殖器疱疹;超氧化物歧化酶; 自然杀伤细胞
  
  生殖器疱疹(genital herpes, GH)是常见的性传播疾病之一,由I型单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus type 1,HSV-1)或Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)引起的一种性传播疾病,临床主要由HSV-2感染引起[1]。GH发病率逐年增高,易反复发作,给患者和社会带来沉重的心理和经济负担[1,2]。GH的发病机制尚未完全清楚,有研究显示HSV病毒感染机体后,引发机体的细胞免疫紊乱及氧化应激状态失衡,主要是T细胞水平表达低下、Th细胞及Tc细胞分化偏态[2,3]。本研究探讨GH患者氧化应激状态与细胞免疫水平,以探讨GH的发病机制,可用于指导GH的治疗、判断预后。�
  1 资料与方法�
  1.1 临床资料 收集24例GH患者,所有患者来自我院2010年8月至2011年1月性病科门诊,诊断符合2000年我国卫生部疾病控制司和全国性病麻风病控制中心联合颁布的GH诊断标准。24例GH患者中男16例,女8例,年龄18~40岁(平均23.6岁),病程2 d~2年,平均病程10.1个月。患者就诊前3个月内均未系统性应用免疫抑制剂、免疫调节剂、皮质类固醇制剂。收集24例健康体检者作为正常对照,其中男14例,女10例,年龄18~36岁(平均22.9岁),患者与健康对照者年龄、性别差异无统计学意义。�
  1.2 实验方法�
  1.2.1 SOD的检测 早晨空腹肘静脉取血2 ml, 分离血清待测。采用透射比浊法, SOD 标准试剂合由南京建成生物研究所提供, 检测方法参照试剂说明书和文献进行[3]。�
  1.2.2 NK细胞表达的流式细胞术分析 取GH患者肝素抗凝血100 ul,加入淋巴细胞检测试剂25 ul,混匀,室温避光染色20 min;加入2 ml红细胞裂解液,室温避光放置10 min; 1500 r/min离心5 min弃上清液,加磷酸盐缓冲液(PBS)2 ml,混匀;1500 r/min离心5 min弃上清液,加2%多聚甲醛PBS 500 ml固定,放置4℃~8℃冰箱待检测。每管加细胞液100 μl,加入10 μl抗CD4 mAb-PerCP,温室避光放置15 min;红细胞溶解液0.5 μl溶解红细胞15 min; 破膜剂I、II固定和破膜;加PBS3 ml,1200 r/min离心5 min,弃上清;加细胞因子抗体,每份标本分别加同型对照IgG1-FITC;温室避光放置15 min;加PBS 4 ml,1200r/min;离心10 min,弃上清;适量PBS重悬细胞上流式细胞仪检测;每份标本检测1万个细胞结果经Cell Quest功能软件进行参数获取和数据分析。�
  1.3 统计学方法 采用SAS 8.01 统计软件进行统计学分析,组间比较方差分析后采用t检验,以P

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