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摘 要：目的：优选滇丹参提取及絮凝沉降法纯化丹酚酸B的最佳工艺。方法：以滇丹参主要成分丹酚酸B含量为评价指标，采用正交试验优选提取及纯化的最佳条件。结果：滇丹参的最佳提取条件为8倍量水，煎煮2次，每次1 h；采用ZTC11+1为絮凝沉降剂，药液浓度在1 g/5 mL，絮凝剂的用量是B∶A=4∶2，搅拌速度为100 r/min时，得到的精制液中丹酚酸B含量最高。结论：使用絮凝澄清的方法精制水提液，用量少，污染小，丹酚酸B的含量损失较少。
关键词：滇丹参；丹酚酸B；ZTC1+1型絮凝剂
中图分类号：R284.3文献标识码：A
文章编号：1007-2349（2011）05-0061-02
滇丹参为唇形科鼠尾草属植物云南鼠尾草（salvia yunnanensis C.H.Wright）的干燥根及根茎，味微苦，性微寒。具有调经、活血、散瘀、镇静止痛之功，用于月经不调、风湿痹痛、子宫出血、吐血等症［1］。现代药理作用研究表明，滇丹参具有增加冠状动脉血流量，防止血栓形成，抑制血小板聚集，降低血黏度，消除自由基，改善血管内皮功能，抑制血管损伤后的内膜增生等功能，在防治冠心病及防治血管成形术后血管再狭窄中均有重要作用［2］。滇丹参主要含有脂溶性的丹参酮及水溶性的酚酸类成分，水溶性成分中丹酚酸B的含量较高，为3分子丹酚素与1分子咖啡酸缩合而成。丹酚酸B活性强，具有强烈的清除自由基和抗氧化作用。本文以丹酚酸B的含量为评价指标，对滇丹参的提取工艺及絮凝澄清纯化工艺进行研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Waters e2695型高效液相色谱仪（美国）；FB124型电子分析天平（上海舜字恒平科学仪器有限公司）；SK250HP型超声提取器（上海科学仪器有限公司）。
1.2 试药 丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111562-200302）；滇丹参（购于云南绿生药业有限公司）；ZTC1+1天然澄清剂（购于天津正天成澄清技术有限公司）；乙腈、甲醇为色谱纯；水为去离子水；其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 丹酚酸B含量测定
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇制成每1 mL含0.192 mg的溶液，即得。色谱条件：Agilent-C�18色谱柱（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm）；甲醇-乙腈-甲酸-水体积比（26∶9∶1∶64）为流动相；柱温：35 ℃；检测波长：286 nm；流速：0.8 mL/min；理论塔板数按丹酚酸B计不低于2000。
2.1.2 线性关系的考察 分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液4、6、8、10、12、14μL，在上述色谱条件下依次进样测定。以峰面积积分值为纵坐标，对照品的进样量为横坐标进行线性回归，得到回归方程为Y=895054x-68669，相关系数r=0.9999。结果表明丹酚酸B进样量在0.768～2.688 μg范围内与峰面积呈现良好线性关系。
2.1.3 样品测定 精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μL进样，以外标法计算含量。
2.2 提取工艺研究
2.2.1 提取溶剂的选择 分别称取40 g（准确到0.01 g）药材4份，分别以水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇为溶剂，加入8倍量溶剂提取1.5 h，过滤，滤渣再用6倍量溶剂提取1 h，合并滤液，浓缩并定容到500 mL，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，精密吸取10 μL溶液，注入液相色谱仪，测定丹酚酸B的含量，结果分别为2.18%、2.45%、2.37%、2.09%。表明30%乙醇提取含量最高，但以水为溶剂时，与30%乙醇提取率相差不大，因考虑实际生产的需要，故以水为提取溶剂。
2.2.2 水提工艺正交实验设计
2.2.2.1 设计方案 以加水量、提取时间、提取次数为考察因素，以丹酚酸B含量为评价指标，每个因素选取3个水平，采用正交表L�9（3�4）安排试验，因素水平表见表1。
2.2.2.2 实验方法 称取药材9份，每份20 g，按照正交实验表进行试验，滤液浓缩并定容到500 mL，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，精密吸取溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定。
2.2.2.3 实验结果 结果见表2。根据直观分析结果表明，紫丹参的最佳水提工艺为8倍量水，提取3次，每次1 h，即A2B�1C�3 。由于提取3次和2次的结果相差不大，为了节约成本，将工艺定为8倍量水，提取2次，每次1 h，即A2B�1C2。
2.3 絮凝澄清纯化工艺研究
2.3.1 ZTC1+1澄清剂溶液的配制 ①A组分溶液的配制 称取ZTC1+1Ⅲ澄清剂A组分1 g，先用少量蒸馏水搅成糊状，然后加蒸馏水至100mL，溶胀24 h，搅匀，双层纱布滤过，即得1 %A 组分黏胶液；②B组分溶液的配制 称取ZTC1+1Ⅲ澄清剂B组分1 g，用少量1 %醋酸溶液溶解并搅成糊状，然后加1 %醋酸至100 mL，溶胀24 h，搅匀，双层纱布滤过，即得1 %B 组分黏胶液。
2.3.2 设计方案 经过预实验，发现丹酚酸B在60 ℃时絮凝效果较好，故以60 ℃为絮凝温度，采用正交试验对絮凝澄清工艺的主要工艺参数进行优化。选择药液浓度、ZTC1+1絮凝剂加入量、搅拌速度3个主要影响因素进行考察，以丹酚酸B含量作为评价指标，用L�9（3�4）正交表安排试验方案，因素水平设计见表3。
2.3.3 实验方法 按上述最佳提取工艺提取药材，按正交试验设计浓缩至不同浓度，分别量取9份浓缩药液，每份50 mL，在60℃时，加入4 mL的1%B组分溶液用相应的旋转速度搅拌15 min，保温1 h，搅拌3 min，然后每隔30 min左右搅拌3 min；1 h后，于60 ℃温度恒温搅拌下，分别加入1%A组分黏胶液搅拌3 min，保温15 min，离心过滤，精密量取1 mL定容至100 mL，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，测定丹酚酸B含量。
2.3.4 实验结果 结果见表4~表5。由直观分析可知，影响絮凝澄清的因素顺序为：药液浓缩比>絮凝剂组分比>搅拌速度，最佳工艺组合为A�1B�1C2。方差分析显示，药液浓度对精制工艺具有显著性影响。
2.3.5 验证试验 平行取相同量的药液3份，每份50 mL。按上述确定的最佳工艺条件进行验证。同时测得丹酚酸B含量分别为35.62、35.85、35.77 mg/g，验证结果与正交试验相符。
3 讨论
由于丹酚酸B在水提液中不稳定，提取时间长及温度过高均会导致丹酚酸B的含量下降，因此，在实验过程中需注意丹酚酸B的降解问题。
纯化工艺研究结果表明，药液浓缩比为1：5（g/mL）时，丹酚酸B保留率最高，且随药液越稀，丹酚酸B的含量越低。絮凝剂组分比随着A组分的增加，丹酚酸B的含量随之降低，所以较佳的絮凝剂组分比例在4/2（B/A）时，效果最好。
ZTC1+ 1Ⅲ型絮凝澄清剂选择性地与溶液中的胶质、蛋白质、鞣质络合而共沉，具有安全无毒、使用简便、不影响有效成分等特点，相对于水提醇沉工艺使用乙醇而言具有提高目标含量，减少生产周期，减少成本，且制备的干膏吸湿性低等优点。
参考文献：
［1］钱子刚.滇丹参药用植物源［J］.中药材，2002，25（9）：628.
［2］罗庆�.滇丹参对冠心病的防治作用［J］.临床误诊误治，2007，20（5）：23.
（收稿日期：2011-02-21）
