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【摘要】 目的：研究怡生汤对小鼠肠道菌群的影响方法：小鼠随机分为4组：正常组、怡生汤低、中、高剂量组，口服给予14d, 观察怡生汤对小鼠肠道内双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌和肠球菌、产气荚膜梭菌、拟杆菌等6种菌群数目的变化结果：在连续给予怡生汤14d后,与给药前相比较，怡生汤中、高剂量组小鼠肠道内双歧杆菌、乳酸杆菌和拟杆菌的数目明显增多(p＜0.05或p＜0.01)，肠球菌、肠杆菌和气荚膜梭菌的的数目明显减少 (p＜0.05) 结论：怡生汤促进小鼠肠道中益生菌的生长增殖, 同时抑制有害致病菌的生长，对肠道菌群有一定的调节作用。
【关键词】 怡生汤；肠道菌群；双歧杆菌
The study of the regulatory effect of yi sheng tang on intestinal flora in mice
Chen JianwenZhou ChanghuaLichengGuojianZengshenTiantianChen Tingting
（School ofPharmaceutical Science，Sun Yet-sen Universty, Guangdong Guangzhou,510080）
【Abstract】Purpose: This study was to investigate the effects of yi sheng tang on the intestinal micro flora in mice. Methods: Mice were randomized into 4 groups:control group, the low 、 medium and high dose group.The yi sheng tang groups were orally administered with yi sheng tang at different doses and the control group was orally administrated with distilled water instead. Then the numbers of Bifidobacterium, Lactobacillus, Enterococcus, Enterobacter, C.perfringens etc were counted respectively. Results: This study suggests that in the medium and high dose group, the administration of yi sheng tang for 14 consecutive days can greatly stimulate the proliferation of probiotic bacteria such as Bifidobacterium, Lactobacillus , Bacteroid and down-regulate pernicious bacteria such as Enterococcus, Enterobacter andC.perfringens. Conclusion:The yi sheng tang can make an improvement to the alteration of intestinal flora.
【Key words】yi sheng tang; intestinal flora; bifidobacterium
本研究拟通过比较灌胃前后正常小鼠体内肠道菌群变化，研究怡生汤对小鼠肠道菌群的影响，以期为怡生汤的应用为提供实验依据。
1材料与方法
1.1材料
怡生汤：由党参，茯苓，白术，猴头菇，低聚木糖组成 (煮成水煎液 0.5g/mL生药量)，4℃保存，给药前复温至25-30℃。实验动物:SPF级雄性BALB/c小鼠48只，20±2.0g，由广州中医药大学实验动物中心提供（合格证号：SCXK(粤)2008-0020）。培养基: PTYG、MRS、Ec、EMB、NN、GAM。仪器：双人单面超净工作台，苏州净化；YQX-II型厌氧培养箱，上海予腾；恒温水浴锅，北京优莱博；高压灭菌锅，北京安捷来。
1.2方法
1.2.1 实验动物分组与给药
健康雄性BALB/c小鼠48只随机分为4组：正常对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。按照怡生汤的成人日服剂量0.15g/ kg的10倍剂量设定中剂量组( 1.5g/ kg) , 上、下各设一个剂量组: 低剂量组( 0.75g/kg) 、高剂量组( 3.0g/kg) 。实验组以相应剂量的怡生汤灌胃，正常对照组每日灌胃给予等量蒸馏水，灌胃量0.2mL/10g体重，每日1次，连续14 d，最后一次灌胃后24h测定肠道菌群的变化。
实验过程中，每天观察和记录各组小鼠外形、活动、饮食、排便以及体重情况。
1.2.2肠道菌群检测
在灌胃前和在末次给药后24h，分别用无菌棉签挑取新鲜粪便0.1g，称重，置于干燥灭菌试管。立即加入1.0mL灭菌水，充分振荡使其分散均匀既得浓度为10~1均质化标本。逐级10倍稀释至浓度为10~10。选取2个合适梯度稀释的标本0.1ml接种于选择性培养基上，每个稀释度做3个平行对照。参照培养条件结束培养后，观察肠道菌在相应的选择培养基的形态特征，识别菌落后计数。计数方法如下：根据各菌落数，三个样本算出同一稀释度的平均菌落数，再分别计算每克粪便中的菌落形成单位（CFU/g）。每克粪便的细菌数为菌落数*10n（10n为相应的稀释倍数），最后统计结果以每克粪便中的细菌菌落总数的对数值(lgCFU/g)来表示。
1.3统计学方法
数据处理采用SPSS13.0软件进行统计分析，结果以均数±标准差（x±s）表示，运用计量资料的配对资料的t检验进行统计学处理分析，以p＜0.05为差异有统计学意义。运用graph pad prism5.0软件做统计图分析。
2结果
2.1小鼠表征观察:
各实验组小鼠饮食正常，行动活跃，皮毛整齐光滑，粪便无异常。
2.2小鼠体重的变化：
各组小鼠随时间增加体重增长明显。实验中各实验组小鼠与正常对照组相比,体重均无显著差异(p＞0.05)。实验结束后解剖小鼠,未见异常。
2.3怡生汤对小鼠肠道有益菌群的影响
由图1可知，与给药前相比，连续给予14d后，怡生汤中、高剂量组能明显增加双歧杆菌和乳杆菌数量 (p＜0.05或p＜0.01)；怡生汤高剂量组能明显增加拟杆菌数量 (p＜0.05)。提示怡生汤能促进小鼠肠道内的双歧杆菌、乳杆菌和拟杆菌繁殖的作用。
图1怡生汤对小鼠肠道有益菌群的影响（lgCFU/g， x±s，n=12）
Figure 1 Effects of yi sheng tang on probiotic bacteria in mouse intestine
与给药前相比： *p＜0.05, **p＜0.01
2.4怡生汤对小鼠肠道有害菌群的影响
由图2可知，与给药前比，连续给予怡生汤14d后，怡生汤中、高剂量组明显抑制肠球菌、肠杆菌和产气荚膜梭菌的数量 (p
