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【摘要】 目的 比较138株酵母样真菌在丹麦ROSCO公司改良SHADOMY纸片扩散法培养基与自制真菌药敏培养基中药敏结果的一致性,评价自制真菌药敏培养基在临床微生物实验室应用的可行性。方法 采用2种不同的真菌药敏培养基,检测138株酵母样真菌对氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、两性霉素B、伊曲康唑的敏感性,并以标准菌株作质量控制。结果 138株酵母样真菌在2种培养基上的药物敏感率具有一致性。经配对χ�2检验,没有显著性差异(P>0.05)。结论 自制真菌药敏培养基药物敏感结果与改良SHADOMY培养基药物敏感结果均有较高的一致性,适合做酵母样真菌药敏试验,结果可信,价格低廉,且操作简单,可代替SHADOMY培养基在临床实验室使用。
【关键词】 酵母样真菌;药敏培养基;对比研究
近年来,由于激素、免疫抑制剂及广谱抗生素的广泛应用,真菌感染日益增多。其中器官移植受者和恶性肿瘤中真菌感染患病率高达20%~40%,而且往往是致命的[1]。同时由于新的抗真菌药物不断涌现,致使近年来耐药真菌数量及种类迅速增长[2]。因此抗真菌药物体外药敏试验对真菌耐药性的研究及监测耐药菌株的出现具有重要的意义[3]。苏丹虹等同时采用E试验法、美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)认可的纸片扩散法、ROSCO公司纸片扩散法来检测52株酵母菌的药物敏感性,结果显示:ROSCO纸片扩散法与E试验法、NCCLS认可的纸片扩散法结果符合率基本一致,且操作简单,结果直观,药物选择种类多,适用于临床实验室常规抗真菌药敏试验[4]。金兰等应用ROSCO纸片扩散法和NCCLS推荐的M27-A大量肉汤稀释法测定76株酵母样真菌对氟康唑的药敏状况,结果显示:ROSCO纸片扩散法可以代替NCCLSM27-A大量肉汤稀释法在临床推广使用[5]。我室自制一种真菌药敏培养基,同样应用丹麦ROSCO药敏纸片,与改良SHADOMY药敏培养基进行比较,探讨其结果的一致性和准确性。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株 2008年1月至2009年4月期间从临床分离的138株酵母样真菌,分别来自痰、咽拭子、尿液、血液等标本。包括白色假丝酵母菌83株,热带假丝酵母菌48株,克柔氏假丝酵母菌3株,近平滑假丝酵母菌2株,光滑假丝酵母菌2株。
1.1.2 质控菌株 采用标准菌株白色假丝酵母菌(ATCC90028)和热带假丝酵母菌(ATCC750)。
1.1.3 培养基 ①改良SHADOMY培养基:丹麦ROSCO公司生产的成品培养基;②自制真菌药敏培养基:每100 ml水中,加入胰蛋白胨1.0 g,葡萄糖2.0 g,氯化钠0.5 g,磷酸二氢钾0.1 g,琼脂1.5 g,调节PH7.0,121℃,15 min高压灭菌,水浴55℃,倒4 mm厚平皿备用。
1.1.4 药敏纸片 丹麦ROSCO公司生产的抗真菌药敏纸片,氟康唑(15 μg/片)、氟胞嘧啶(1 μg/片)、酮康唑(15 μg/片)、两性霉素B(10 μg/片)、伊曲康唑(8 μg/片)。
1.2 方法
1.2.1 临床菌株分离鉴定 生物梅里埃Vitek-32全自动细菌鉴定仪及YBC卡进行鉴定。
1.2.2 药敏试验 采用琼脂扩散法。①将改良的SHADOMY培养基和自制真菌培养基两种培养基平板先置35℃培养箱内干燥20~30 min;②配制待检菌接种浓度为5×10�5cfu/ml;③用无菌棉拭子蘸取菌液均匀涂布于上述两种培养基平板上,将平板置35℃干燥10 min后贴抗真菌药敏纸片,并用质控菌株进行检测;④35℃培养18~24 h判断结果。
1.3 试验结果判读 测量抑菌环直径,按照ROSCO抗真菌药敏纸片抑菌环基本判读标准进行判读。
表1
138株酵母样真菌在改良SHADOMY培养基上的药敏结果(%)
菌种株数
氟康唑氟胞嘧啶酮康唑两性霉素B伊曲康唑
SIRSIRSIRSIRSIR
白色假丝酵母菌8378237913783276438021
94.02.43.695.21.23.694.03.62.491.64.83.696.42.41.2
热带假丝酵母菌4845034431434147014620
93.706.391.76.32.089.68.42.098.002.095.84.20
克柔氏假丝酵母菌3003201003300003
0010066.7033.3001001000000100
近平滑假丝酵母菌2200200200200200
1000010000100001000010000
光滑假丝酵母菌2002200200101200
0010010000100005005010000
注:S为敏感I为中介R为耐药
作者单位:515300普宁市人民医院检验科
1.4 统计学方法 应用配对χ�2检验进行数据处理。
2 结果
2.1 质控菌株在2种培养基上的测定结果:分别应用SHADOMY培养基和自制真菌药敏培养基对质控菌株进行重复检测,抑菌环直径均在规定范围内。
2.2 138株酵母样真菌在改良SHADOMY培养基上药物敏感结果见表1。
2.3 38株酵母样真菌在自制真菌药敏培养基上药物敏感结果见表2。
2.4 对138株酵母样真菌在改良SHADOMY培养基和自制真菌药敏培养基上的敏感菌株进行χ�2检验,P>0.05,即138株酵母样真菌在自制真菌药敏培养基与改良SHADOMY培养基上的药物敏感率具有一致性。
表2
138株酵母样真菌在自制真菌药敏培养基上药物敏感结果(%)
菌种株数
氟康唑氟胞嘧啶酮康唑两性霉素B伊曲康唑
SIRSIRSIRSIRSIR
白色假丝酵母菌8377338003792278238021
92.83.63.696.403.695.22.42.494.02.43.696.42.41.2
热带假丝酵母菌4843144521452147014620
89.62.08.493.84.22.093.84.22.098.002.095.84.20
克柔氏假丝酵母菌3003201003300003
0010066.7033.3001001000000100
近平滑假丝酵母菌2200110200200200
1000010000100001000010000
光滑假丝酵母菌2002101200101200
0010050050100005005010000
3 讨论
3.1 应用丹麦ROSCO抗真菌药敏纸片,138株酵母样真菌在改良SHADOMY培养基上的药敏结果显示:白色假丝酵母菌对氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、两性霉素B、伊曲康唑的敏感率分别为94.0%、95.2%、94%、91.6%、96.4%,热带假丝酵母菌对氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、两性霉素B、伊曲康唑的敏感率分别为93.7%、91.7%、89.0%、98.0%、95.8%。138株酵母样真菌在自制真菌药敏培养基上的药物结果显示:热带假丝酵母菌对氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、两性霉素B、伊曲康唑的敏感率分别为92.8%、91.4%、95.2%、94.0%、96.4%,热带假丝酵母菌对氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、两性霉素B、伊曲康唑的敏感率分别为89.6%、93.8%、93.8%、98.0%、95.8%。可见临床上二种常见病原性真菌在自制真菌药敏培养基与改良SHADOMY培养基上的药敏敏感率具有一致性。这与国内苏丹虹等报道的ROSCO纸片扩散法药敏试验结果也基本接近。说明ROSCO药敏纸片在两种培养基上的重复性、准确性、可靠性较好,两者具有较高的符合率。
3.2 近年来,随着医院内真菌感染的逐渐增多,抗真菌药物的大量应用,真菌的耐药情况也日趋严重[6]。体外药敏试验对抗真菌药物的合理选择及发现耐药菌株具有重要意义。因此建立简便易行及准确可靠的抗真菌药敏试验迫在眉睫。ROSCO药敏纸片和SHADOMY成品药敏琼脂,操作简单,容易使用,抑菌环结果清晰,容易读取,不受仪器设备及读取时间的限制和影响,国内一些实验室已在应用。但作为成品培养基,在一些经济落后地区,价格偏贵。而自制真菌药敏培养基成本低,材料易采购,能满足不时之需,且操作简单,结果可信。经试验显示与改良SHADOMY药敏培养基对真菌药敏结果有较高的一致性,适合做真菌药敏试验,可代替SHADOMY药敏培养基使用。在经济落后地区,研制出这样一种低成本、高品质、易操作,与相应标准培养基有较高符合率的真菌药敏培养基,适合于临床实验室常规抗真菌药敏试验,可在临床上推广应用。
参 考 文 献
[1] 李若瑜,王端礼.密切结合临床,提高真菌学检验水平.中华检验医学杂志,2003,26(9):521-523.
[2] 张晓冬,李若瑜.微量法检测念珠菌对三唑类药物敏感性与交叉耐药性.中华医学检验杂志,1998,21(2):76-78.
[3] 张青,汪定成,张惠中,张周良.两种酵母样真菌药敏培养基检测氟康唑药敏试验的比较.中国血液流学杂志,2007,17(2):293-295.
[4] 苏丹虹,邬全会,王华成.ROSCO真菌药敏试验与其他方法的比较研究.检验医学,2004,19(4):291-294.
[5] 金兰,蒋新良,张嵘.ROSCO纸片扩散法检测酵母样真菌对氟康唑药敏试验的评价.中华检验医学杂志,2004,27(1):46-48.
[6] 张建平,张春盛,辛德清,等.酵母样真菌的病原分布与耐药性监测.中国感染控制杂志,2005,4(1):61-63.
