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【摘要】目的优选红药片的最佳提取工艺。方法以提取液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量之和以及总固体得率为指标，采用正交试验法，优选提取工艺。结果处方药材的最佳提取工艺为70%乙醇6倍量，提取3次， 1 h/次。结论优选的提取工艺各活性部位提取率高。
【关键词】正交试验法；红药片；提取工艺
Study on the extraction process of hongyao tablet by orthogonal designWU Xing-mei (First Hospital Of Foshan, Foshan, Guangdong, 528000,China )
【Abstract】ObjectiveTo optimize the extraction process of hongyao tablet. MethodsOrthogonal test was employed for selecting the optimum of extraction process by the indexes of the contents of ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1, notoginsenoside R1 and total solid matters. ResultsSix volumn of 70% alcohol, extracting 3 times with an hour for each time was considered the optimum extraction process of hongyao tablet. ConclusionThe considerable extraction rate active components in the drugs are achieved by applying the selected technics.
【Key words】Orthogonal test; Hongyao tablet; Extraction process
红药片处方收载于中药成方制剂二十册中，由三七、川芎、白芷、当归、红花等组成，具有活血止痛、去淤生新的功效，临床上用于跌打损伤、淤血肿痛、风湿麻木的治疗，取得满意效果。本处方药味多，成份复杂，原制剂工艺简单，因此本实验以最大限度地提取药材中的有效成份，避免有效成份的分解流失和无效成份的溶出为原则，进行红药片提取工艺的研究，以减小剂量、创新剂型 ，提高临床疗效。有文献报道[1]：红药片具有显著的抗炎阵痛作用，三七是处方君药，有效成份是三七总皂苷。本实验根据方中药物的性质和现代药理学研究结果，以三七的有效成份人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量之和（以下简称Ⅰ）及总固体得率为指标，采用正交试验法优选提取工艺。
1材料和仪器
WATERS2695/2996型高效液相色谱仪（美国）；
所有药材均购自广州致信中药饮片有限公司。人参皂苷Rb1（批号:110704-200420)、人参皂苷Rg1（批号:110703-200420)、三七皂苷R1（批号:110745～200415)（中国药品生物制品检定所）。
乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1含量测定方法的建立
2.1.1色谱条件色谱柱Kromasil C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；以乙腈为流动相 A，以水为流动相 B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203 nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算是4 600。
2.1.2 标准曲线的绘制精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1 ml含人参皂苷Rg11.011 mg、人参皂苷Rb11.004 mg、三七皂苷R10.501 mg的混合溶液，即得对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液3 μl、5 μl、10 μl、20 μl、25 μl、30 μl，注入液相色谱仪。按上述色谱条件测定峰面积，以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，计算回归方程，人参皂苷Rg1：y=274 270.16x-81 834.17(r=0.999 9)，线性范围：3.033～30.33 μg；人参皂苷Rb1：y=216 159.23x-125 326.50(r=0.999 7)，线性范围：3.012～30.12 μg；三七皂苷R1 ：y=239 788.93x-38 809.08(r=0.999 9)，线性范围：1.503～15.03 μg。
2.1.3 供试品溶液的制备[2] 按处方量称取药材提取，精密移取提取液5 ml，（乙醇提取液则挥干乙醇后加水5 ml使溶解），以水饱和的正下醇10 ml，密塞，振摇10 min，取上清液，加3倍量以正丁醇饱和的水，摇匀，放置使分层，取正丁醇层，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至5 ml，作为供试品溶液。
2.1.4 空白溶液的制备按处方量称取除三七外的其余药材进行提取，按“2.1.3”项下制备空白供试品溶液。
2.1.5 含量测定照《中国药典》2005年版一部附录VI项高效液相色谱法测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。见图1。
2.2 醇提和水提工艺的比较
2.2.1按处方量称取各药材，加10倍70％的乙醇，提取两次，每次1.5 h，过滤，合并滤液，并定容至1 000 ml量瓶中，按“2.1.3”项下制备供试品溶液。
2.2.2按处方量称取各药材，加10倍水，提取2次，1.5 h/次，过滤，合并滤液，并定容至1 000 ml量瓶中，按“2.1.3”项下制备供试品溶液。测定上述两种药液中Ⅰ的含量。结果见表2，可见处方采用乙醇提取三七有效成份含量比水提取高30％，所以确定以乙醇提取药材。
2.3醇提工艺研究
2.3.1正交试验设计根据方中药物的性质和现代药理学研究结果，以测定人参皂苷Rg、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量和总固体得率为指标,用正交试验优选三七提取工艺条件。根据预试验结果,选取影响提取效果的因素和水平,试验方案见表3。
2.3.2样品溶液的制备：按处方量称取三七和其他药材，按L9（34）试验列号各条件分别回流提取、滤过，定容到1 000ml，放置备用。
2.3.3总固体得率的测定：精密量取样品液100ml，100～105℃干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，至干燥箱内干燥5 h，于干燥器内冷却至室温，待恒重时，精密称重，计算总固体得率。结果见表4。
2.3.4供试品溶液的制备：按“2.1.3”项下制备供试品溶液。
2.3.5含量测定：按“2.1”项测定供试品溶液中Ⅰ的含量。
2.3.6试验数据与方差分析，见表5。
2.3.7结果分析：比较各因素的极差值可以看出，影响提取效果的因素顺序为C＞D＞A＞B，提取时间、提取次数对提取效果影响显著，确定三七等药材较优的提取工艺条件为A2B1C2D3、A2B1C3D3。
2.3.8比较验证实验：分别称取药材以较优的工艺A2B1C2D3、A2B1C3D3提取，按“2.1”项下测定供试品溶液中Ⅰ的含量，测定总固体得率。经验证两工艺提取处方中Ⅰ的含量、总固体得率无统计学意义差异。确定处方的最优提取工艺为A2B1C2D3，即加6倍70％的乙醇，提取3次， 1 h/次。
2.4三七提取率的研究
2.4.1三七药材供试液的制备精密称定三七粉末（过四号筛）0.6 g，精密加入甲醇50 ml，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀、滤过、取续滤液，即得。按“2.1”项下测定供试品溶液中Ⅰ的含量，并将此含量作为三七药材有效成份含量与供试品进行对照。结果三七中Ⅰ的含量为0.095（g/g），符合中华人民共和国药典的要求。
2.4.2提取率的计算采用优选的提取工艺，测定提取液中Ⅰ的含量，结果Ⅰ的含量为0.092（g/g），提取率为0.092/0.095×100％＝96.84％，说明采用的工艺是完全可行的。
3讨论
3.1通过考察处方的水提、醇提的必要性，发现：三七中三七皂苷为三萜类化合物，可溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿，由于多糖的引入可溶于水。处方中以70％乙醇提取比水为溶剂的提取效果约高30％，所以考虑以乙醇提取处方药材。
3.2提取工艺过程中，单因素考察了三七最粗粉、粗粉、中粉、细粉对提取效率的影响，最后预试得到，粗粉的提取效率最高，中粉、细粉可能是粒径比粗粉小，药渣也有吸附，所以导致提取率不高。
3.3本实验通过系统的研究红药片的提取工艺，建立了操作简捷、合理的提取工艺，这为红药片提供一种生产周期短、生产成本较低、操作简便、且无需增加企业设备投资的工艺参考。
参考文献
1李东安，张慧颖，张艳玲，等.红药片抗炎镇痛作用研究.中药药理与临床，2003，19（4）：40-42.
2国家药典委员会．中国药典Ⅰ部.化学工业出版社，2005：10-11.
