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【摘要】 目的 探讨自体骨髓干细胞移植结合口服中药治疗慢性肝功能衰竭的疗效。方法 自体骨髓干细胞在体外分离后移植至体内在肝脏中生长分化为具有功能的肝细胞,结合口服中药治疗。结果 使损伤的肝功能恢复重构。结论 自体骨髓干细胞移植，使损伤的肝功能恢复重构，不存在免疫排斥反应，安全有效，价格低廉，具有良好前景。�
【关键词】
自体骨髓干细胞移植; 慢性肝功能衰竭; 中药
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【Abstract】 Objective To investigate the autologous bone marrow stem cell transplantation combined oral administration of traditional Chinese medicine treatment of chronic liver failure effects� Methods of autologous bone marrow stem cells in vitro after the separation from the body in the liver transplant growth and differentiation of functional liver cells，combined treatment of oral medicine� The result that functional recovery of liver injury reconstruction� Conclusion Autologous bone marrow stem cell transplantation，so that functional recovery of liver injury reconstruction，there is no immune rejection response，safe，effective，inexpensive，has good prospects��
【Key words】
Autologous bone marrow stem cell transplantation; Chronic liver failure; Chinese medicine
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研究应用患者自体骨髓干细胞作为供体，在体外分离纯化后移植至患者体内，使干细胞在肝脏中生长分化为具有功能的肝细胞��［1�5］�，使损伤的肝功能得以恢复和重构，为干细胞的进一步治疗研究打下基础。�
1 资料与方法�
1�1 病例选择 160例慢性乙型重型肝炎为我院住院患者，年龄22~68岁；诊断符合2000年病毒性肝炎防治方案诊断标准��［6］�。随机分组120例患者行自体骨髓干细胞移植治疗，40例患者作为对照，给予综合基础治疗。所有治疗患者在知情同意的情况下，签定《知情同意书》，两组基本情况均无显著性差异。�
1�2 排除病例 肝性脑病、消化道出血、重度感染或大量腹水等严重并发症,半年内未使用过其他抗病毒药和其他免疫调节剂。其他病毒感染、酒精性、药物性肝病。�
1�3 主要试剂及仪器 超净工作台(北京半导体设备一厂)：台式低温高速离心机(美国Heraeus公司)；二氧化碳孵箱(美国Heraeus公司)；倒置显微镜(日本Olympus公司)流式细胞仪(FACSCalrbur,美国BD公司)LCVPLUS血管造影仪(美国GE公司)。Percoll分离液(美国Sigma公司)；DMEM培养基(美国Hyclone公司)。�
1�4 骨髓干细胞的采集 患者行局部麻醉消毒，在无菌条件下，以18号骨髓穿刺针从髂后上棘进行穿刺，抽取骨髓50~10 ml，以4000 U肝素抗凝，避免污染。�
1�5 骨髓干细胞的分离 参照文献��［7］�的方法，患者骨髓离
��作者单位：273500山东省邹城兖矿集团总医院消化内科
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心去除脂肪层，用等量DMEM培养液稀释骨髓，制成细胞悬液。将骨髓轻轻的加到密度1�073/ml的percoll分离液上，在室温下1200r/min，离心25 min。吸取界面细胞层，用等渗盐水洗脱，1500 r/min×5 min离心3次，等渗盐水重悬细胞，镜下计数所用细胞为1�0×107个ml，制成体积为10 ml悬液，置于37℃二氧化碳孵箱待用。�
1�6 骨髓干细胞移植 患者在局部麻醉下，行肝动脉介入，在X线监视下，将分离的骨髓干细胞5×10�8~5×10�9/ml。通过导管从肝动脉缓慢给入病变部位。之后用10 ml等渗盐水冲洗管腔。�
1�7 口服中药 大黄、蛰虫、大腹皮、牛膝、莪术、三棱、槟榔、鸡内金、桃仁、醋芫花、水蛭、虎杖、黄芩、甘草、黄芪、丹参、茵陈等随证加减��［8］�。�
1�8 肝功能检查 对照组和移植组患者在移植后1、4、8、12周进行肝功能检测，�
分别检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)，总胆红素(Tbil)，白蛋白(Alb)，凝血酶原活动度(PTA)等指标。在1、4、8、12周观察腹水，食欲，体力，腹胀，睡眠等症状改善情况，及术后的不良反应情况。�
1�9 统计学分析 采用t检验。�
2 结果�
2�1 自体骨髓干细胞移植结合口服中药后患者肝功能的改变 自体骨髓干细胞移植后患者肝功能在移植1、4、8、12周后，肝功能明显改善，和对照组相比有明显差异，表明骨髓干细胞移植治疗后，患者肝功能逐步改善，见表1。�
2�2 自体骨髓干细胞移植结合口服中药后患者凝血机制的改变：移植组在干细胞移植后PTA逐渐上升，由术前平均25�9%上升至术后12周的52�6%；而对照组患者没有明显改善，表明骨髓干细胞移植治疗后，患者凝血机制有所改善。�
2�3 自体骨髓干细胞移植对患者短期生存率的改变 患者在移植后1周的生存率为100%，在4周内死亡2例，生存率为98�0%：在12周内死亡6例，生存率95�0%。为移植患者在1周后，生存率下降至86�7%；4周后降至80�0%；12周后降至60�0%�
2�4 自体骨髓干细胞移植结合口服中药后患者症状的改善 移植后大多数患者有明显的症状改善，移植后食欲改善者90例，体力好转者64例，腹胀减轻者56例，兴奋失眠18例，局部疼痛6例。�
2�5 自体骨髓干细胞移植结合口服中药后不良反应的发生情况 在120例移植患者中未发现严重并发症，术后有轻度恶心6例，发热8例。未见其他严重不良反应。�
3 讨论�
干细胞分化为具有功能的组织细胞并应用于器官损伤的治疗，是人们关注的热点及追求的目标。研究表明，在肝损伤中，干细胞起着重要的作用，骨髓干细胞是肝细胞的重要肝外来源��［9］�，在特定环境下可分化成肝干细胞和肝细胞，参与肝功能的修复和重构��［10］�从而治疗肝损伤，为探索骨髓干细胞在人类肝损伤的治疗作用，本文在大量研究的基础上，采用患者自体骨髓干细胞作为供体，在体外分离纯化后移植患者至患者肝脏，使其在自身内环境下分化为肝细胞，替代损伤的肝细胞。观察骨髓干细胞移植结合口服中药��［11］�使损伤的肝功能得以恢复和重构。又可以避免免疫排斥反应，不必考虑组织相容性抗原的配型问题，具有良好应用前景。�
研究发现患者在移植12周后，ATL逐渐降低，由平均136�5U/L降至68�5U/L；Tbil由平均121�9 μmol/L降至81�6 μmol/L；Alb逐渐升高，由平均28�1 g/L升至32�5 g/L；和对照组相比差异有统计学意义，结果表明骨髓干细胞移植治疗后，患者肝功能明显改善；移植组在干细胞移植后PTA逐渐上升，由术前平均25�9%上升术后8周的52�6%；表明骨髓干细胞移植治疗后，患者凝血机制明显改善。生存率移植组较对照组明显升高。自体骨髓干细胞移植后大多数患者有明显的症状改善，未发现严重并发症。�
本文中，初步探讨了自体骨髓干细胞移植结合口服中药治疗对肝衰竭的疗效可佳。但是,以后将对移植分化的细胞进行追踪检测，探讨移植后自体骨髓干细胞在人受体肝脏内定植、生长分化为肝细胞的过程采用自体骨髓干细胞移植结合口服中药治疗肝衰竭，疗效可佳,不存在免疫排斥反应，安全有效，价格低廉，具有良好前景。研究将为肝病治疗打开崭新途径，为干细胞的进一步治疗研究打下基础。�
参 考 文 献�
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