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【摘要】近年文献中多见RP-HPLC法测定三七中人参皂苷Rg1及Rb1含量,但对该制剂方法专属性不好,本研究选择用HPLC法,以田七氨酸为对照品,测定其组方三七中另一有效成分田七氨酸的含量。该方法精密度高,重现性好,阴性对照无干扰且简便、准确。
【关键词】愈伤灵胶囊;田七氨酸;含量测定
doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.05.255文章编号:1006-1959(2010)-05-1259-02
1.仪器与试剂
LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津),SPD-M10Avp二极管阵列检测器(日本岛津);BSZZ4S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为双蒸水。
田七氨酸对照品批号:10708-19704(供含量测定用)中国药品生物制品检定所提供。
2.方法与结果
2.1 色谱条件。色谱柱:Hypersil ODS2 C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱(大连依利特);流动相:甲醇-水溶液(50∶50);流速:1.0ml/min;检测波长:240nm;柱温:25℃。在上述色谱条件下田七氨酸峰与其他峰能达到较好的分离,对照品、样品溶液色(谱见图1～3)。
2.2 对照品溶液的制备。取田七氨酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含25μg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备。取本品内容物,混匀,取约0.3g,精密称定,置50ml具塞锥形瓶中,精密加入甲醇20ml,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4 缺三七的阴性对照品溶液的制备。依据处方中的比例,按制法制备缺三七的阴性对照样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.5 线性关系的考察。精密吸取田七氨酸对照品1μl、2μl、4μl、8μl、12μl对照品溶液,分别进样,测定峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,田七氨酸的浓度为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程Y=�10.1500200�18.1100100X,r=0.99980,表明田七氨酸在进样量0.07808-0.39040μg之间呈良好的线性关系。
图一 田七氨酸对照品HPLC色谱图
图二 样品HPLC色谱图
2.6 精密度试验。精密吸取同一对照品溶液5μl,连续进样6次,测定峰面积积分值并计算相对标准偏差RSD为1.20%,结果显示,所建立方法精密度良好。
2.7 重现性试验。取同一批号装量差异项下供试品20粒,按供试品制备方法分别处理5个供试品溶液,测定峰面积积分值并计算相对标准偏差RSD为1.01%,结果显示,所建立方法重现性良好。
2.8 稳定性试验。取同一批号装量差异项下供试品20粒,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,分别在0、2、4、6、8h测定田七氨酸峰面积,计算相对标准偏差RSD=1.24%。结果显示,制备的供试品溶液在8h内稳定。
2.9 加样回收率试验。取已知含量同一批号供试品(田七氨酸平均含量:0.9627mg/粒)0.15g,取6份,分别加入田七氨酸对照品0.5420mg,按照供试品溶液制备方法,分别制备供试品溶液,进样量5μl,测定田七氨酸含量,并计算加收率为99.68%,RSD=0.84%。结果显示,加样回收率符合要求。
加样回收率试验结果(n=6)。
样品中田七氨酸含量(mg)分别为:0.9625、0.9632、0.9629、0.9627、0.9624、0.9626,平均为0.9627;加入标准品量(mg)分别为:0.5240、0.5240、0.5240、0.5240、0.5240、0.5240,平均为0.5240;测得量(mg)分别为:1.4910、1.4880、1.4612、1.4902、1.4892、1.4892、1.4722,平均为1.4820;回收率(%)100.30、100.05、98.27、100.24、100.19、99.03平均为99.68;
RSD(%)为0.84。
2.10 样品测定。按照供试品溶液制备方法对10批供试品进行测定,测定结果如下:根据测定结果,拟定本品中三七含量每粒(以田七氨酸计)不低于0.50mg。
3.讨论
三七在整个处方中用量最大,所以对三七进行含量测定,能反应制剂的质量。其中田七氨酸为三七中的一个有效成分,故我们采用HPLC色谱法,以三七中田七氨酸的含量作为本品的质量控制指标。本实验选择甲醇-水溶液(50∶50),田七氨酸在9min左右出峰,并能与杂质峰达到基线分离。该方法简便、准确、专属性强,可作为愈伤灵胶囊的质量控制方法。
参考文献
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