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【摘要】 目的 选择一种建立长波紫外线(ultrayiolet，UVA)照射人表皮角质形成细胞损伤模型的理想载物界面。方法 选取原代培养的处于指数生长期的角质形成细胞，分别采用泡沫板、锡纸板、冰面作为载物界面，进行相同剂量的UVA照射，同时设未照射组为对照组，通过改良MTT法检测细胞损伤程度。结果 冰面作为载物界面时，细胞损伤相对较弱，损伤率仅为19.88%；锡纸面作为载物界面时，细胞照射损伤最重，损伤率高达82.76%；泡沫板作为载物界面时的细胞照射损伤率为55.58%，介于上述两种载物界面之间，各组与对照组比较均有显著性差异(P[1]等采用干冰作为载物界面，王红伟[2]等则以冰面为载物界面，还有人直接以超净工作台的金属台面为载物界面。不同的载物界面对光的吸收和反射作用不同，在UVA照射过程中会对其照射效果产生很大的影响。为使实验结果具有稳定性及可重复性，加之实验的经济性原则，本研究对几种载物界面对模型建立的影响进行比较，旨在为建立UVA照射HEKC损伤模型确定一种理想的载物界面，为后续研究奠定基础。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 载物界面 泡沫板、锡纸板、冰面。
1.1.2 主要仪器及试剂 UVA光源以及紫外辐照度计(北京师范大学光学仪器厂)、眼科剪眼科镊等手术器械、温度计、DispaseⅡ(Sigma公司)、0.05% Trypsin-EDTA(GIBCO公司)、Keratinocyte-SFM(GIBCO公司)、PBS(国产分析纯试剂配制)、MTT(Sigma公司)、十二烷基硫酸钠(广州南方化玻公司分装)、异丁醇(上海试剂一厂)、盐酸(汕头市西陇化工厂)。
1.1.3 人角质形成细胞 健康男性环切术切除的包皮组织(昆明医学院第一附属医院)原代培养获得HEKC。
1.2 方法
1.2.1 人角质形成细胞的原代培养 将取得的皮肤标本，PBS液反复冲洗后，采用陈勇等[3-5]报道的培养方法，原代培养获得HEKC。
1.2.2 实验分组 实验分为未照射组、分别以泡沫板、锡纸板及冰面作为载物界面的照射组。
1.2.3 细胞接种及处理 第3代HEKC，以细胞密度2×104个/cm2接种到12个35 mm培养皿中(每组设3个培养皿)，于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养，HEKC生长至指数生长期时进行实验。弃去Keratinocyte-SFM，PBS液洗涤2次后，每孔加入适量PBS液，用于实验操作。
1.2.4 UVA照射 照射装置由六根平行的UVA灯管组成，通过紫外辐照度计确定照射强度为6.4 W/cm2，根据照射剂量8.09 J/cm2，确定照射时间为21 min。
将照射装置置于超净工作台内，分别采用泡沫板、锡纸板及冰面为载物界面对照射组HEKC进行照射(HEKC距灯管垂直距离为1 cm)，未照射组HEKC于超净台内放置相同时间后，同照射组HEKC一起，更换上新鲜Keratinocyte-SFM后，于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中继续培养24 h。照射同时，温度计检测三种载物界面局部空间(HEKC与灯管之间的空间)温度变化。
1.2.5 改良MTT法测定细胞损伤程度 酶标仪上采用570 nm和630 nm双波长测定吸光度(OD)值。
1.3 统计学方法 统计学分析应用SPSS 11.5软件，进行方差分析及q检验。以P
