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[摘要] 目的 探讨BRMS1、HDAC1及VEGF-C 蛋白在乳腺癌、乳房纤维瘤及正常乳腺组织的表达及意义。方法 采用免疫组织化学方法随机检测60例乳腺癌组织标本BRMS1、HDAC1、VEGF-C蛋白的表达,随机收集乳房纤维瘤组织及其旁正常乳腺组织各20例作为对照组,结合临床病理资料分析其临床意义。结果 BRMS1 在乳腺癌组织中表达率为60%,在乳房纤维瘤组织中表达率为85%,在正常乳腺组织中表达率为95%,乳腺癌组织中的BRMS1的表达明显低于乳房纤维瘤和正常乳腺组织(P2cm 39例;肿瘤直径≤2cm 21例,无淋巴结转移者20例;有淋巴结转移者40例;根据TNM分期,I期9例,II期27例,III期21例,IV3例ER阳性32例,ER阴性28例,PR(+)44例,PR(-)16例,Her-2(-)～(+)41例,Her-2(2+)～(3+)19例,随机收集良性乳房组织经病理证实均为乳房纤维腺瘤20例,随机收集乳房纤维腺瘤旁0.5cm外的正常乳腺组织20例作为对照。
1.2 标本采集和石蜡切片制备
乳腺癌和乳房纤维腺瘤蜡块均来自病理科,收集我院门诊乳房纤维瘤旁正常乳腺组织(距纤维瘤0.5cm以上),以10%甲醛固定,石蜡包埋后制成蜡块,全部蜡块以4μm连续切片,行常规HE染色,选取形态典型标本行免疫组化染色。
1.3 主要实验试剂
BRMS1兔抗人单克隆抗体,工作浓度1:100。HDAC1鼠抗人多克隆抗体,即用型。即用型SABC免疫组化染色试剂盒,均购自武汉博士德公司。VEGF-C兔抗人单克隆抗体和DAB显色试剂盒,购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.4 制片检测
正常乳腺组织收集后经福尔马林液固定,24h内取材,常规脱水、透明、浸蜡、包埋,切片(厚度为4μm),制作成石蜡切片。免疫组化(SABC法)严格按试剂盒说明操作。设阳性对照和阴性对照,以已知的乳腺癌阳性片为阳性对照,以PBS代替一抗的乳腺癌组织免疫组化染色结果为阴性对照。
阳性判定:染色主要位于细胞胞浆或(和)胞核内,阳性表达标准参照Kurose K[1]和李治[2]的报道,根据阳性细胞数和着色深度(与背景着色相对比)计分。先将阳性细胞染色强度评分(a),无色或基本不着色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;再按阳性细胞所占的百分比评分(b),每例随机计数5个高倍镜(×400)视野,确定其每个视野的阳性率,取平均数,阳性细胞比例2cm 39例;无淋巴结转移20例,有淋巴结转移 40 例;乳腺癌临床分期根据国际抗癌协会制定的乳腺癌TNM分期标准,Ⅰ期9例,Ⅱ期27例,Ⅲ期21例,Ⅳ期3例;PR阳性44例,PR阴性16例;ER阳性32例,ER阴性28例;Her-2(-)～(+)41例,Her-2(2+)～(3+)19例。
60例乳腺癌组织标本及乳房纤维瘤、正常乳腺组织BRMS1、 HDAC1、VEGF-C蛋白的表达。见表1～2。
3 讨论
3.1 BRMS1在乳腺癌中的表达及临床意义
肿瘤转移是癌症患者死亡的主要原因,在肿瘤转移过程中除存在原癌基因的激活、抑癌基因的失活、细胞间的黏附异常以及金属蛋白酶及其抑制剂表达失控外,染色体发生杂和性缺失(LOH)与恶性肿瘤转移的关系十分密切,乳腺癌转移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor 1,BRMS1)是2000年宾夕法尼亚州立大学Hershey医学中心Welch DR研究组发现的一种转移抑制基因。BRMS1可通过多种途径发挥抑制肿瘤转移作用,主要集中在两方面,一方面BRMS1对胞外基质变化的影响以及癌细胞与胞外基质关系的变化,Samant RS[3]用BRMS1转染的MDA-MB-435 和 MDA-MB-231乳腺癌细胞仍能继续生长,把浸润生长的肿瘤注入无胸腺小鼠乳房组织,显著减少往肺和局部淋巴结的转移,并推测BRMS1能恢复细胞间的缝隙连接.BRMS1不上调其他肿瘤转移抑制基因如NM23,Kai1,KiSS1。另一方面是BRMS1对癌细胞的自身运动能力变化的影响,BRMS1可通过磷脂肌醇途径调节肿瘤转移[4]及下调骨桥蛋白(OPN)加强诱导凋亡,抑制乳腺癌的转移[5]。
本研究通过60例乳腺癌,20例乳房纤维瘤,20例正常乳腺组织,进行BRMS1的蛋白检测,结果表明,乳腺癌的表达率明显低于正常乳腺和乳房纤维瘤的表达(P0.05),在有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组,TNM分期Ⅲ+Ⅳ低于Ⅰ+Ⅱ组,ER(+)组表达率低于ER(-)组(P0.05)。HDAC1的表达与淋巴结转移、TNM分期、ER的表达相关(P0.05)。值得注意的是淋巴结转移和TNM分期与乳腺癌的侵袭和转移密切相关,两者均有显著差异(P0.05),VEGF-C表达在有淋巴结转移和无淋巴结转移组有显著性差异(P0.05)。提示VEGF-C可能参与乳腺癌的侵袭和转移,与乳腺癌转移和预后相关,尤其与淋巴结转移密切相关,因此VEGF-C可作为预后的指标,抑制VEGF-C在乳腺癌组织的表达是防治乳腺癌的一个有效的途径。
3.4 BRMS1、HDAC1与VEGF-C的相关性及可能存在的作用机制
Spearman等级相关分析表明,乳腺癌中BRMS1与HDAC1呈负相关(r =-0.406,P 综上所述,我们的实验结果是在乳腺癌中可能存在这样的一条通路:BRMS1可下调HDAC1的表达,使VEGF-C的表达减少,从而达到抑制肿瘤的转移,我们针对BRMS1的转移机制进行靶向治疗,可抑制乳腺癌的转移,延长生命,改善生存质量及预后,为我们防癌抗癌提供了一个新的途径。
[参考文献]
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(收稿日期:2009-11-12)
