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摘 要 目的：[HTSS]比较贵州不同产地千层塔中石杉碱甲的含量。方法 采用ZORBAX EXTEND-C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相：0．02mol・L-1磷酸二氢钾-乙腈（92∶8），检测波长：312 nm。结果 在贵州3个不同产地的千层塔中，以黔东南地区产千层塔中石杉碱甲的含量最高。结论 该方法易行、灵敏、准确。关键词 千层塔；石杉碱甲；高效液相色谱��
千层塔为石杉科石杉属植物蛇足石杉（Huperzia serrata（Thunb．）Trev．）的全草，主要分布于我国西南地区，生于杜鹃花下、苔藓丛中，为我省民间常用中草药［1］。20世纪80年代，石杉碱甲(Hup A)被我国科学工作者从该植物中分离得到，药理实验表明：它是一种可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂，对重症肌无力、记忆力减退和早老年痴呆具有较好的治疗效果［2-3］，现已广泛应用于临床。为了科学、合理地利用石杉属植物资源，本实验采用HPLC法对我省黔东南地区、遵义地区及黔西南地区等3个不同产地千层塔中石杉碱甲的含量进行测定，为寻找和筛选石杉碱甲新的植物资源提供科学依据。
1 仪器与试药�
Aigent 1100型HPLC色谱仪(带四元泵，自动进样器，紫外检测器等)；电子分析天平（日本岛津）；KQ50B超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（上海医疗器械厂）；石杉碱甲对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100243-200401）；乙腈（色谱纯）；二次重蒸水；其他试剂均为分析纯。�
实验药材于2007年5月采至贵州凯里、遵义及兴义等地区，由贵州科学院生物研究所王培善研究员鉴定为蛇足石杉（Huperzia serrata（Thunb．）Trev．）。�
2 色谱条件�
ZORBAX EXTEND-C18色谱柱（250 mm×4．6 mm，5μm），流动相0．02 mol・L-1磷酸二氢钾-乙腈溶液（92∶8），检测波长为312nm，流速1mL・min-1，柱温25℃，进样量为10μl。在此色谱条件下，样品中的石杉碱甲与其他峰能达到基线分离，其理论塔板数为5241，对称因子为0．95。石杉碱甲的保留时间为11．20 min，对照品与样品的色谱图见图1。
3 方法与结果�
3．1 样品的制备 精密称取实验药材细粉2g于500ml的圆底烧瓶中，用95%的甲醇提取5次，合并滤液并回收溶剂，加入2%的酒石酸溶解，用氨水调节萃取液PH值至9．0，再用氯仿萃取至Dragendorffor" s反应呈阴性，挥干有机溶剂，用无水乙醇溶解并定容至25ml即得。�
3．2 线性关系的考察 精密称取石杉碱甲对照品3mg用无水乙醇溶解并定容在100ml容量瓶中，再取1ml于10ml容量瓶中定容，浓度为0．003mg・ml-1，备用。在色谱条件下，分别进样1μl、2μl、4μl、8μl、16μl、32μl进行测定。以进样浓度对峰面积进行回归，得方程：Y=6597．50267X + 2．0428511，r=0．9997。可知石杉碱甲在0．015 -0．48μg之间与峰面积呈良好线性关系。�
3．3 精密度试验 取石杉碱甲对照溶液，按2项的色谱条件进行测定，结果石杉碱甲峰面积的RSD为0．63%（n=6）。�
3．4 稳定性试验 取供试品溶液，每隔2小时测定1次，考察石杉碱甲的含量变化。结果供试品在10 h内稳定，黔东南、黔北、黔西产千层塔样品中石杉碱甲峰面积的RSD分别为1．23%、0．97%、0．67%（n=6）。�
3．5 重现性试验 精密称黔东南产样品，按3．1项的要求制备供试液，按2项的色谱条件分别进行测定，结果Hup A含量的RSD为0．17%（n=6）。�
3．6 回收率试验 精密称取不同产地实验药材细粉各6份，每份1g，分别加入对照品供试液（0．003mg・ml-1）50 ml，按3．1项样品制备要求和2项的色谱条件，制备加样回收供试液进行测定，计算回收率。结果黔东南、黔北、黔西产千层塔中石杉碱甲的加样回收率分别为100．03%、98．76%、99．74%，RSD=0．65%、0．57%、0．37%（n=6）。�
3．7 样品的测定 按3．1项的要求精密称取样品6份，制备供试液，按2项的色谱条件进行测定，三个不同产地千层塔中石杉碱甲的含量见表1。
4 讨论�
4．1 本实验所用测定方法是在其它石杉中石杉碱甲含量测定［4］方法的基础上，改用ZORBAX EXTEND-C18色谱柱及以0．02 mol・L-1磷酸二氢钾-乙腈溶液（92∶8）为流动相。实验证明该方法易行、灵敏、准确、可靠。�
4．2 作为全国四大中药材产地之一，我省药用植物资源十分丰富。据文献［5］记载，千层塔植物资源在我省广泛分布，储量较大，这为我们开发利用药用植物资源奠定了基础。�
4．3 本实验测定结果显示：黔东南地区产千层塔中含0．028%的石杉碱甲，含量最高。这个实验结果给制药企业及研发机构进一步开发该植物资源提供了科学数据。�
参考文献�
［1］ 贵州省中药资源普查办公室，贵州省中药研究所．贵州中药资源［M］ ．贵州 贵阳：中国医药科技出版社，1992．�
［2］唐希灿．石杉碱甲―一种有望治疗早老年痴呆症的药物［J］．中国药理学报，1996，176（6）：481-484．
［3］Liu J S，Zhu Y L．The structure of Hup A and B，tow new alkaloids exhibiting marked anticholinesterase activity［J］．Can J Chen，1986，64：837-839．�
［4］刘建廷，黎艳，严伟．石杉碱甲提取工艺研究［J］．天然产物研究与开发，2006，18：298-301．�
［5］王培善，王筱英．贵州蕨类植物志［M］．贵州：贵州科技出版社，2001．�
（收稿日期：2007年8月11日）
