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【摘要】 目的 以有效部位为指标，研究葛根芩连片质量控制新方法。方法 采用紫外分光光度法（UV）测定总黄酮含量；采用高效液相色谱法（HPLC）测定葛根素含量，菲罗门 C��18�色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇 水（28：72），流速为1.0 ml/min，柱温30°C，检测波长为250nm。结果 总黄酮含量为12.26%～12.73%（RSD为1.21%）；葛根素含量为2.24%～2.43%（RSD为2.93%）。结论 葛根总黄酮含量间变异比葛根素小，更适合作为质量控制指标。
【关键词】葛根芩连片； 葛根总黄酮；葛根素
The study on quality control of qegen qinlian tablet
LU Lan fang.The First People’s Hospital,Guangzhou 510810,China
【Abstract】 Objective To study an new method on quality control of Qegen Qinlian tablet by effective component as an indicator. Methods The content of total flavonoids was determined by ultraviolet spectrophotometry（UV）. The content of puerarin was determined by HPLC, the analysis was performed on a Phlomen C��18� column(4.6 mm×250 mm, 5 μm)with methanol water(28:72)as mobile phase at a flow rate of 1.0 ml/min, and at a column temperature of 30°C，and the detection of wavelength was 250 nm. Results The content of total Flavonoids was 12.26%～12.73%（RSD为1.21%）. The content of Puerarin was 2.24%～2.43%（RSD为2.93%）.Conclusion The content variation of total flavonoids is smaller than puerarin，so the total flavonoids is more suitable as quality control indicators.
【Key words】Qegen Qinlian tablet;Total flavonoids;Puerarin
葛根芩连片，组方出自《伤寒论》，原为汤剂，是中药治疗急性腹泻的经典方剂，现在临床广泛应用。然而，该制剂生产厂家众多，药品质量参差不齐。但是，目前药典仅以薄层鉴别为主［1］，难以控制制剂整体质量，且中药化学成分复杂，仅用单一指标难以衡量整体疗效，故在本研究中，采用有效部位葛根总黄酮作为主要指标成分，能更好地控制药品质量［2］。
1 材料与仪器
1.1 试药 葛根素标准品110752 200511）、盐酸小檗碱对照品（批号：0713 200208）、黄芩对照药材（120955 200607）、黄芩苷（110715 200514），以上均购自中国药品生物碱制品检定所；葛根芩连片（广东益和堂制药有限公司，批号：200090313）；甲醇（色谱纯，德国Merck公司）；乙醇（分析纯，天津大茂化学试剂厂）；乙酸乙酯（分析纯，天津大茂化学试剂厂）；丁酮（分析纯，天津大茂化学试剂厂）；甲酸（分析纯，天津大茂化学试剂厂）；异丙醇（分析纯，天津大茂化学试剂厂）；甲苯（分析纯，天津大茂化学试剂厂）；水为高纯水；
1.2 仪器 P680高效液相色谱仪（戴安公司，美国）；电子天平（MP200A，天津精密科学仪器有限公司）；unic UV2100紫外分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）。
2 方法与结果
2.1 黄连的TCL鉴别
取本品2片，研细，加甲醇10 ml，超声处理15 min，滤过，取滤液1 ml，加甲醇稀释至5 ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.1 g，加甲醇10 ml，超声处理15 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各1 μl，分别点于同一硅胶′薄层板上，以甲苯�∶�乙酸乙酯�∶�异丙醇�∶�甲醇�∶�浓氨试液(12�∶�6�∶�3�∶��3�∶��1)为展开剂，置氨蒸气预饱和15 min的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点［1］。
2.2 黄芩的TCL鉴别
取本品4片，研细，加甲醇30 ml，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml使溶解，加盐酸调节pH值至3.0～3.5，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10 ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液10 μl、对照品溶液5 μl，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯�∶�丁酮�∶�甲酸�∶�水（5�∶�3�∶�1�∶�1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点［1］。
2.3 UV法测定不同产地葛根中总黄酮的含量
2.3.1 溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取80℃干燥至恒重的葛根素对照品5.0 mg，置25 ml容量瓶中，用95％乙醇溶解并稀释至刻度。
供试品溶液的制备：取葛根芩连片约1.0 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30％乙醇100 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液适量，用30％乙醇定容，即得。
图1
黄连的薄层鉴别
1,2）供试品 3）黄连对照药材4）盐酸小檗碱对照品5）缺黄连的阴性对照
图2 黄芩的薄层鉴别
1,2）供试品 3）黄连对照药材4）盐酸小檗碱对照品5）缺黄连的阴性对照
2.3.2 线性关系考察
精密量取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，分别置5 ml容量瓶中，并各加95％乙醇至1 ml，再加蒸馏水至10 ml，摇匀，以1.0 ml 95％的乙醇加蒸馏水至10 ml的溶液做空白对照，于250nm测定吸光度。以葛根素含量为横坐标（X），吸光度为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程Y=121.87X 1.06，r=0.9999。结果显示，葛根素对照品在0.08～0.4 mg内线性关系良好。
2.3.3 方法学考察
分别对精密度、重复性、稳定性、准确度进行了考察，结果RSD皆小于2％，符合规定，样品在12 h内稳定。
2.3.4 样品总黄酮含量测定
取各不同批次葛根芩连片3份，精密称定1 g，按供试品溶液制备方法制成样品，依法测定。（结果见表1）
2.4 HPLC法测定葛根芩连片中葛根素的含量
2.4.1 色谱条件
色谱柱：菲罗门C��18�色谱柱(4.6 mm 250 mm，5 μm)；柱温：30℃；检测波长：250nm；流动相：甲醇 水(28：72)；流速：1 ml/min；理论板数按葛根素计算不低于4000。（见图1、2）
图1
葛根素对照品溶液HPLC色谱图
图2 葛根芩连片溶液HPLC色谱图
表1
不同批次葛根芩连片中总黄酮和葛根素含量测定结果（n＝3）
批次123456789RSD(%)
总黄酮含量(%)12.4512.3512.6212.4812.4712.6212.2612.7312.361.21
葛根素含量(%)2.412.292.422.242.272.342.322.432.362.93
2.4.2 溶液的制备
同2.3.1项，但需过0.45 μm微孔滤膜才可进样。
2.4.3 线性关系考察
精密量取对照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，10.0 ml，置10 ml容量瓶中，加30%乙醇定容，摇匀，分别吸取上述各浓度对照品溶液20 μl，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以葛根素含量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程：Y=1351.5X 1.1573，r=0.9999。结果表明：葛根素在1~9 μg内呈良好的线性关系。
2.4.4 方法学考察
分别对精密度、重复性、稳定性、准确度进行了考察，结果RSD皆小于2％，符合规定，且样品在12 h内稳定。
2.4.5 样品含量测定
取葛根芩连片，精密称定0.8 g，按供试品溶液制备的方法处理，在上述色谱条件下测定。（结果见表1）
3 讨论
3.1 从本制剂组方来看，重用葛根为君药，配伍黄芩黄连为臣，全方表里同治，对多种泻痢取得很好的治疗效果［3］，这与该三味药的主要有效成分密切相关，故笔者在研究制剂质量标准时，重点对葛根有效成分进行考察，兼顾黄芩黄连［4］。
3.2 从实验数据可知，虽然葛根素的变化幅度较大（RSD为2.93%）,但是葛根总黄酮的含量更为稳定（RSD为1.21%），提示用后者作为指标更为合理。
3.3 本课题仅对葛根主要有效部位作为指标成分进行了初步研究，有待深入研究寻找更多，更为合理的质量控制指标。
参考文献
［1］ 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典.人民卫生出版社，2005：203.
［2］ 廖洪波，贺稚非，王光慈，等.葛根的研究进展及展望，食品工业科技，2003,24(2):81 83.
［3］ 王海燕，彭亚丽.葛根素药理研究进展.山东医药工业，2001，20(4)：36 37.
［4］ 张乐平.HPLC法测定葛根素注射液中葛根素的含量.南京中医药大学学报，2004，20(2)：122.
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
