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【摘要】目的：探讨EDTA-K2抗凝血时导致血小板计数假性减少现象及避免措施。方法：对采用全自动血球计数仪检测，血小板计数值异常偏低的160例标本，进行再次血涂片，观察血小板分布情况，对其中发现的涂片与计数明显不符的5例患者再次抽血进行手工血小板计数等方法复检。结果：上述5例在后三种方法复检时血小板计数在正常范围，与初次乙二胺四乙酸二钾(EDTA)抗凝血血细胞分析仪所测血小板计数结果明显不符。结论： EDTA抗凝剂偶尔可导致血小板发生聚集，引起血球计数仪计数血小板结果的假性减少，临床工作中应引起同行们的高度重视。
【关键词】EDTA；假性；血小板计数
在临床检验工作中，常发现有少数病人经全自动血细胞分析仪进行血细胞分析时，血小板计数值异常偏低，临床反馈与临床症状严重不符，为探讨其发生原因，本文对血常规检验中遇到的5病例进行分析报道如下。
1资料和方法
资料来源对2009年1月～2010年11月间用全自动血球计数仪进行血液分析时，血小板计数值异常偏低的160例(≤50×109/L)，取同份血进行血涂片观察血小板分布情况，对其中发现的涂片血小板分布情况与计数值明显不符的5例，初步考虑存在血细胞分析仪血小板计数结果与真值不符的现象，依此做为符合研究条件的病例进行进一步研究。
1.1仪器与试剂血细胞分析仪为日本SYSMEX 三分类血细胞分析仪和日本SYSMEX 五分类血细胞分析仪，全血校准液及质控物由四川迈克科技有限公司提供；Olmpus显微镜；草酸铵血小板稀释液(按操作规程[2]配制)；EDTA-K2真空抗凝管与枸橼酸钠真空抗凝管；瑞氏染色液。
1.2方法对2009年1月～2010年11月间用我科门诊检验室全自动血球计数仪进行血液分析时，血小板计数值低于50×109/L 的160例患者的标本，均经二种仪器同时进行初检或复检，并取同份血进行血涂片观察血小板分布情况，对其中发现的涂片血小板分布情况与计数值明显不符的5例，一方面与临床了解临床症状表现，确定5例均无皮肤粘膜出血点、紫癜等明显出血征象、肝脾淋巴结不大，再次抽血进行EDTA抗凝血血球计数仪血液分析、手工血小板计数、末梢血涂片观察血小板分布情况、抽取枸橼酸钠抗凝血进行血细胞计数等方法复检。同时进行了部分其它化验检查如凝血功能、红细胞沉降率等，结果发现EDTA抗凝血在血球计数仪分析时再次出现血小板计数值明显降低，用其它方法复检血小板却在正常范围内，其余的检验项目结果均未见明显异常。
2结果
该组病例用全自动血球计数仪分析见血小板计数明显减少，仅7×109/L～33×109/L，但临床表现均无明显出血征象，与血小板计数值明显不符，肝脾淋巴结不大，在进一步检查过程中，均进行骨髓检查显示骨髓象无明显异常表现。其他化验检查如凝血功能、红细胞沉降率等结果均属正常范围。经显微镜下手工血小板计数PLT结果均大致正常、用枸橼酸钠抗凝血做血小板计数结果也大致正常，末梢血液直接血涂片显示血小板数量不少，分布无明显异常，取EDTA抗凝血进行血涂片显示血小板明显聚集成簇(每簇中血小板数大于15个)甚至成片(血小板数约50个～100个)，极少见血小板单独存在。正是由于大量血小板聚集在一起，导致血小板计数的假性减少。经显微镜下手工血小板计数PLT结果为175×109/L～288×109/L；用枸橼酸钠抗凝血做血小板计数结果为119×10９/L～188×109/L；而直接末梢血涂片见血小板分布大致正常。
3讨论
EDTA抗凝原理是与血液中的凝血因子Ⅳ(钙离子)结合成螯合物，使其失去凝血作用，从而阻止血液凝固。
为了保证血小板计数的准确性，对结果有疑问的标本，可以采用不同的方法复检。Kunicka等提出，可增加一项血涂片间接计数血小板的方法作为补充。本组研究中主要是采用此方法来初步确定血小板计数是否有误差，是一种简单易行的方法。
我们在研究中，换用非EDTA抗凝剂（本组用枸橼酸钠）进行血小板计数复检，尽管计数结果与手工结果仍存在明显差异，不能做为最后结果向临床发放报告，但因排除了EDTA致血小板聚集的因素，对证实本症的诊断是一种非常可取的方法。实际工作中，应注意EDTA―PTCP与真性血小板减少的鉴别。“EDTA―PTCP”定义为由于EDTA抗凝剂引起体外血小板聚集而造成血细胞分析仪计数的血小板减少，而更换枸橼酸钠抗凝管重新抽取新鲜静脉血后经血细胞分析仪计数的血小板数正常。“真性血小板减少” 定义为由疾病引起的血小板减低，EDTA―K抗凝和枸橼酸盐抗凝所测得的血小板均减低”[3]。两者相比，前者无任何病理、生理意义，而后者具有病理意义，病人须做进一步的检查及治疗。
目前用于评价血小板计数准确性的“参考方法”是手工法血小板计数，虽然准确性不搞但对于异常结果的复检，仍不失为一种方便有效的方法。EDTA致血小板假性减少发生率极低，约为0.07%～1% [1]，住院患者的发生率为0.1%～2%，且在健康或患病时均可能出现[2]但一旦发生，会导致临床进行大量的进一步检查，甚至可能引起临床误诊、误治。因此，这种EDTA依赖性血小板减少症应该受到广泛重视。
参考文献
［1］叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.南京：东南大学出版社，2006：136―137．
［2］小棉，邹晓.假性血小板减少症研究进展.中华检验医学杂志，2007，30：1065―067．
［3］卫，崔巍，李薇，等.血小板聚集体计数在真性和假性血小板减少鉴别中的应用.中华检验医学杂志，2009.32：557-561．
