【www.zhangdahai.com--试用期工作总结】
摘 要：目的研究肝癌组织基质金属蛋白酶组织抑制因子－1(TIMP－1)的表达，探讨其与肝癌的关系及其临床意义，为临床上寻找肝癌表达的新的生物学标志物提供理论依据。方法取山东省昌邑市人民医院2008年6月一2010年6月肝癌手术切除标本36例，按照Edmondson―Steiner组织学分级标准进行分级。选用3例外伤性肝破裂患者手术肝切除标本作正常对照。使用鼠抗人TIMP--1多克隆抗体，进行免疫组织化学PV―9000通用型二步法染色。染色结果根据反应强度及面积判断，评分标准按Shimizu方法，根据两项打分之和判断。结果对照组中TIMP―1的表达为阴性。TIMP--1在肝癌中的表达阳性率为74.8％。TIMP--1的阳性表达与患者年龄、性别、甲胎蛋白(AFP)是否阳性、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是否阳性均无关(均P>0.05)。有癌栓组、无癌栓组和包膜不完整组、包膜完整组的TIMP--1在各组间差异均无统计学意义(均P>0.05)。高侵袭转移组与低侵袭转移组间，TIMP--1阳性率分别为89.6％和48.3％，组间差异有统计学意义(P5cm者22例。按照Ed―mortdson―steiner组织学分级标准，Ⅰ级4例，Ⅱ级17例，Ⅲ级14例，Ⅳ级2例。有完整包膜者11例，包膜浸润、不完整和无包膜者25例。有癌栓者7例。所有病人术前均未行任何治疗。3例外伤性肝破裂患者手术肝切除标本，作正常对照。
1.2 试剂 PV―9000通用型二步法检测试剂盒，浓缩型鼠抗人单克隆抗体TIMP―1，试剂均购自武汉博士德生物技术有限公司。
1.3 实验方法将制作好的标本蜡块行5μm连续切片，分别行PV―9000通用型二步法免疫组化染色。用0.01％PBs代替一抗作为阴性对照，外伤性肝破裂患者手术肝切除标本作正常对照组。常规石蜡切片脱蜡入水，3％双氧水室温孵育5～10min，以消除内源性过氧化物酶的活性。蒸馏水冲洗，PBs浸泡5min，行电煮锅煮沸抗原修复法进行抗原修复。PBS液浸泡5min，甩去PBS液，滴加适当稀释好的一抗(浓缩型MMP-9稀释比例为1:50，浓缩型TIMP-1稀释比例为1:50)。37℃孵育1～2h或4℃过夜。PBS冲洗，2min×3次。滴加试剂1(po1ymet helper)，室温或37℃孵育20min，PBS冲洗，2min×3次。滴加试剂2(poly peroxidase―anti―mouse/rabbit IgG)，室温或37℃孵育20 min，PBs冲洗，2min×3次。滴加DAB显色剂显色3～8min。自来水充分冲洗，苏木素复染，脱水，透明，封片。
1.4 免疫组化高倍镜下(40×10)取10个不同视野，每个视野计数100个细胞TIMP－1，阳性标准为细胞胞浆出现黄色、棕黄色、棕褐色颗粒，染色强度高于背景非特异性染色为准。按阳性细胞所占百分比进行分析：(一)阳性细胞2检验比较组间的差异。以P0.05)。但各项指标对比中，分化程度较差的、包膜不完整的、有癌栓的肿瘤所占阳性率较高。有癌栓组、无癌栓组和包膜不完整组、包膜完整组的TIMP1在各组问差异均无统计学意义(均P>0.05)。高侵袭转移组与低侵袭转移组间，TIMP―1阳性率分别为89.6％和48.3％，组间差异有统计学意义(P
