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【摘要】 目的 探讨生化试剂对胆汁酸(TBA)测定的交叉污染及防范措施。方法 ①采用放大的方法，将总胆汁酸作为观察项目，其他常规生化项目ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TBIL、DBIL、TG、CHOL、HDL、BUN、APOA、APOB、GLU、FRUC作为干扰项目，筛查并确认对总胆汁酸测定有明显干扰的项目；②设定特殊清洗程序来降低干扰。结果 本实验发现尿酸、三酰甘油、总胆固醇对总胆汁酸测定有明显的正干扰。设置加强水冲洗试剂针程序可有效的去除尿酸的干扰；设置在总胆汁酸项目加试剂前对仪器固定比色杯自动清洗后再进行特殊清洗,可消除因试剂携带污染对总汁酸测定的干扰。结论 全自动生化分析仪测定总胆汁酸存在项目间的交叉污染，设置特殊清洗方式可有效地消除因试剂携带污染对TBA测定的干扰。
【关键词】生化试剂；胆汁酸；总胆固醇；交叉污染
全自动生化分析仪具有微量、快速、多项、准确、重复性好等特点。随着全自动生化分析仪的广泛应用，其测定过程中存在的交叉污染问题也受到关注。在检测标本中的总胆酸的含量时，通过调整项目通道后仍发现胆汁酸单项特别高，在复查时结果又正常的现象。胆汁酸在肝胆疾病、新生儿黄疸、孕妇肝内胆汁淤积症、冠心病等方面都是及其重要的检测指标[1]。所以，笔者就胆汁酸结果的不稳定性及防范措施进行实验室观察，现报告如下。
1 材料
1．1 仪器与试剂 日立7170型全自动生化分析仪。ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TG、CHOL、GLU、FRUC由上海合富公司提供。APOA、APOB上海北加公司提供，TBIL、DBIL由上海利德曼公司提供，TBA由烟台奥斯邦公司提供。
1．2 混合血清采用Randox公司的质控血清。
1．3 清洗液 日立公司的碱性清洗液HIALKAU-D。
2 方法
2．1 胆汁酸检测原理如图1。
2．2 可疑项目的筛查 将常规生化项目ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TBIL、DBIL、TG、CHOL、HDL、BUN、 APOA、APOB、GLU、FRUC及蒸馏水作为待测样本来测定总胆汁酸，筛查出对TBA有明显干扰的项目。
2．3 可疑项目的确认 将混合血清连续测定10次TBA,计算其均值和标准差。取均值作为相应项目的靶值取均值，然后再按如下顺序测定;如先测GGT再测TP，即反映GGT试剂对TP测定的影响，如此反复10次。计算其均值和标准差，与相应的靶值比较。其他组合也同样按照上述方法进行，然后做统计学分析。
2．4 交叉污染的排除
2．4．1 设定蒸馏水加强冲洗程序 在日立生化仪上设置清除试剂间交叉干扰的程序，在试剂针从施干扰项转向TBA项目时再对试剂针用蒸馏水加强冲洗1次。重复2．3操作，观察交叉污染是否依然存在。
2．4．2 设定比色杯清洗程序 将用加强蒸馏水清洗后交叉污染依然存在的组合列出，在测定完某个对另一个项目将造成污染的项目后，在特殊清洗程序中设定试剂针1、试剂针2分别向该使用过的杯子注入清洗剂的程序。重复2．3操作，观察交叉污染是否依然存在。
2．4．3 统计分析 使用SPSSS10．0统计软件，测定值与靶值组进行配对样本t检验，P0．05)。但总胆固醇和三酰甘油对总胆汁酸的污染依然存在(见表3)。
3．4 设定固定比色杯清洗程序后。各组合的交叉污染基本排除。测定值组与靶值组比较，结果差异无统计学意义(P>0．05)(见表4)。
3 讨论
胆汁酸是由肝脏分解代谢的，能反映肝实质损伤。所以胆汁酸的结果影响到疾病的诊断治疗和预后。本实验室采用循环酶法测定胆汁酸的含量，通过不断的循环使微量的胆汁酸信号被扩增(图1)，扩增的量决定于循环次数，这种方法不但可以提高检测的灵敏度，而且也大大减少了共存物质的干扰。
多通道生化分析仪的试剂加样机构需接触各种试剂成分，因此当试剂针、搅拌针和固定比色杯清洗不完全或清洗液的效率低时，残留试剂或反应产物污染试剂针、搅拌针和固定比色杯，从而会可能导致相邻检测项目结果的不稳定性。 胆汁酸结果的不稳定性，荟萃资料表明,有3个主要原因:第一，试剂成分中含有某种被污染的项目；第二，试剂中含有下一个测试所要测定底物或含有的某种试剂成分，与下一反应所测定的底物有作用，因而直接影响下一反应测定的结果；第三，该试剂所引导的反应给下一个项目反应进程带来了间接干扰[2,3]。由上述实验数据我们发现，从筛查污染项目到干扰排除整个过程中，胆汁酸结果的异常偏高正是因为携带污染造成的，而尿酸对胆汁酸的正干扰最大，总胆固醇和三酰甘油次之。从试剂成分来看，总胆固醇和三酰甘油试剂中均含有胆酸钠、4-氯酚:尿酸、总胆固醇和三酰甘油均含有过氧化物酶、4-AAP。从反应原理看，总胆固醇和三酰甘油都是过氧化氢与4氨基安替比林及酚在过氧化物酶的催化下生成苯醌亚胺的；尿酸是过氧化氢与4氨基安替比林及DHBS也在过氧化物酶的催化下生成有色化合物的。而其他试剂在成分上和反应过程中均未出现过氧化物酶酶和胆酸钠。并且胆酸钠具有促进脂蛋白酯酶、胆固醇酯酶等与之相应的底物结合，促进酯酶水解的作用[3]，据此推测，胆酸钠可能具有胆汁酸的反应特性，高浓度的胆酸钠可能是造成试剂间交叉污染从而干扰总胆汁酸测定的成分；而过氧化物酶可能增强了总胆汁酸循环酶反应。另外，从表4推测，未清洗完全而残留在固定比色杯上的中间产物或最终产物或其他试剂成分有增强循环酶反应的可能，这有待于进一步探讨。
7170型全自动生化分析仪在检测样本的过程中，R1、R2试剂的吸取与吐出，分别只配有一个试剂针和一个搅拌针，并且每种不同的常规项目的吸取和搅拌仅有一次冲洗过程，从表2分析，常规冲洗不能完全排除交叉污染的现象，所以对于交叉污染的防范措施，我们主要采取调整项目的检测顺序和设置特殊清洗程序[4]。但是全部项目都设置特殊清洗程序会降低生化仪的工作效率。因此我们只对总胆酸影响较大的总胆固醇、尿酸和三酰甘油设置了特殊清洗程序。从表3可以看出，我们设置一次加强水冲洗程序就足够可以排除尿酸的干扰，但无法去除总固醇和三酰甘油的干扰，由此，又对总胆固醇和三酰甘油项目测定之后设置了用特殊清洗液冲洗固定比色杯的程序，设定之后，总胆固醇和三酰甘油的干扰解除。
由于试剂成分的复杂性，实时仪器检测的独特性，可能发生的试剂间的交叉污染情况不尽相同，所以，要是结果的准确度和精密度高，我们不仅要熟悉仪器的操作和认真阅读试剂使用说明书来设置恰当的参数，还要在平时对仪器进行精心地维护和保养。
参考文献
1 殷丽.血清总胆汁酸测定在临床上的应用.实用医技杂志，2007，14(12):1565-1566.
2 于雷．生化自动分析仪项目间试剂的交差污染及其避免方法．临床检验杂志，2003，21(3):168.
3 黄承荣，颜娟.三酰甘油、总胆固醇试剂对总胆汁酸测定的干扰及排除.临床检验杂志,2006,4(3):220.
4 李浩,缪应业，郭昭静．生化自动分析仪分析顺序对测定结果的影响．临床检验杂,2001，19(4):212.
