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传统的菌落总数国标检测方法已经使用多年，且广为大家接受，其准确性毋庸置疑。其主要缺点为：需要专门的实验室和专业检验人员，配制专门的培养基，消毒、清洗工作量大，出具检验结果的时间较长，很难适应现代食品行业的自检自控和和食品卫生的现场监管，世界各先进国家无不致力于发展微生物便捷检测技术。本研究是对美国3M公司生产用于检测环节标明菌落总数的测试片进行实验室效果验证。
1 材料和方法
1．1 材料
1.1．1 测试片 测试片是美国3M公司发明的一种用于细菌计数的可再生水合物的干膜，它由上下两层薄膜组成，下层的聚乙烯薄膜上印有网格并且覆盖有细菌生长所需的培养基，上层是聚丙烯薄膜。使用时只需接种1ml待测样品的稀释液在下层的培养基上，盖上上层的聚丙烯薄膜，此时聚乙烯层上的培养基由于水的作用生成水合物，适合普通细菌生长。测试片中含有的红色指示染色剂可以使菌落着色而便于判读。
1．2 标准菌株
金黄色葡萄球菌(标准菌株号：ATCCl2600)和大肠杆菌(标准菌株号：ATCC8095)，由复旦大学公共卫生学院微生物教研室提供。
1．3 人工污染标准菌株的不锈钢平板
实验室人工配置含有上述标准菌株菌壤液，按一定比例混合培养后，得到2种高低浓度不同的混合菌壤液，其菌落总数的准确浓度用GB4789．2―2003营养琼脂平板浇注法得出，分别为2 680efu／ml和740cfu／ral，每种浓度菌壤液每隔5 min吸取2份0．3ml菌壤液，依次平行涂布到2块(1对)8cmx10cm无菌不锈钢平板上，共涂抹24对(高低浓度组分别相当于1005 cfu／100cm2和278cfu／100em2)，用L型玻璃棒在其表面涂沫均匀，然后将不锈钢平板放至层流通风橱干燥10mia作为采样对象，依干燥时间顺序随机化配对编号后立即由2名实验员分别用3M测试片和国标法对同组不锈钢表面进行菌落总数检测。营养琼脂培养基和相关材料参照GIM789．2―2003执行。
1．2 方法
1．2．1 国际法 用无菌镊将不锈钢平板放平，用经灭菌生理盐水湿润的4根灭菌棉签，按照自上而下、从左到右的顺序，与不锈钢平板呈30°角度严格采样，每根均匀充分涂抹20cm2采样对象表面，每块不锈钢平板共涂抹80 cm2，剪去与手接触的棉棒部分，将棉签头置于40ml灭菌盐水试管中，充分振摇后制成原液，然后按GB4789．2―2003进行检验。
1．2．2 测片方法 用lmL无菌稀释液水化3M测试片，在使用前将纸片放置至少1h，使之胶固化。提起上层膜，使胶体部分置于目的表面5s，用手指摩擦上层膜外侧，保证膜与表面充分接触，使上层膜与目的表面分离，然后将其与培养基合上，将纸片置于(36±1)℃培养箱内培养24h。
1．2．3 质量控制 由工作经验丰富的检验技师严格按照标准化操作规程配置标准菌壤液以及人工污染不锈钢平板，测试片的采样、培养及结果判读由1名3M公司专业技术人员独立完成；国标法的采样、培养及结果判读由1名检验技师独立完成。所有试验检测均在上海市副食品质量检测站无菌室完成。每个浓度组不锈钢平板样品试验前和试验后各检测1次空气中菌落总数，以确保实验室空气环境的洁净度达到菌落计数的要求。
1．3 数据统计分析
将菌落总数计数统一转换成100cm2不锈钢平板采样面积上的结果。细菌在适合生长的培养基上一般以指数形式繁殖，为了真实反应菌落总数不同检测方法之间的差异，同时也是为了满足菌落总数检测结果符合配对t检验所需要的正态分布，一般将菌落总数结果取常用对数，并使用SPSS．11软件对结果进行统计分析。相对标准偏差(RSD)＝标准误(Sx)／均数(Sx)；采样率：均数(Sx)／人工配置不锈钢平板菌落总数浓度(C)
2 结果
2．1 两种检测方法精密度比较
结果表明，不同浓度菌落总数污染的不锈钢表面，3M测试片法检测结果的RSD均明显低于国标法，但两种方法的采样率基本一致，见表1)。
2．2 两种方法检测结果相关性
结果表明，两种检测菌落总数的方法在高浓度和低浓度时的相关性不高，差异无显著性，见表2。
2．3 两种方法检测结果一致性比较
结果表明，3M测片方法和国标法检测菌落总数结果基本一致，在高低2种菌落总数浓度时均无显著性差异(P>0．05)，见表3。
3 讨论
菌落总数常用来反映细菌污染程度，已成为食品加工环节表面卫生学评价的重要指标，也是卫生监督部门的常规监测指标。国标法作为菌落总数的常规检测方法，需要配置实验室和专业人员，操作较复杂，所需时间较长，不利于食品监管部门的日常现场检查和食品生产经营单位的自身管理，虽然用测试片法进行菌落总数计数的方法已经得到了AOAC、AFNOR等国际组织的认可，但是此方法大都用于食品方面的检测，对于检测环节表面，国内还没有得到广泛的应用和验证。本实验对测试片法与国标法对菌落总数检测结果的比较，发现测试片易于黏附环节表面，有较高的采样率，检测结果基本在一个数量级上，两种方法检测结果差异无显著性。
在不锈钢平板上实验室人工污染一定浓度的标准菌株是一项技术含量高，操作难度大的工作，存在着一定的实验误差。实验结果发现，测片方法具有较高的精密度，采样率和国标法也基本一致，但高浓度不锈钢平板组的采样率超过了100％，低浓度不锈钢平板组的采样率也高达78％-79％，和文献报道有一定偏差，这可能和环节样品稀释倍数不当，导致可观察的菌落计数值较小有关、也可能涂抹不锈钢平板时菌壤液的加样量、涂抹均匀程度、菌落计数等实验室操作误差有关。另外，该研究发现两种方法的检测结果无相关性，这可能和试验样本数量偏小有关，有关试验有待进一步的开展。由于测试片是一种可再生水合物的干膜，体积较小，携带方便，操作简单，培养时间短，结果可靠，每检测1件环节表面菌落总数的成本约8元，适合各级卫生监督部门对环节表面卫生的监督监测和食品生产加工单位的自检自控，也特别适用于实验条件简陋的实验室以及野外操作。
(收稿日期：2006―03―21)
