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[摘要] 目的 对酶联免疫法检测HBsAg和荧光定量PCR检测HBV-DNA结果行对比研究，探讨其临床意义。方法 对45例HBsAg阴性的慢性乙型肝炎HBV感染患者采用ELISA检测HBVM（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc），同时采用PCR对其血清HBV-DNA进行定量分析；对照组为同期慢性乙型肝炎患者。结果 45例HBsAg阴性慢性乙型肝炎患者中，HBV-DNA阳性率为24.44％。结论 ELISA法检测HBV是不全面的，但PCR只能检出复制状态的病毒，难以表达非复制状态的感染，因而用PCR方法检测HBV-DNA也不能完全代替血清标志物的检测。建议必要时两者结合加强对患者的检测，以避免临床不必要的漏检。
[关键词] 慢性乙型肝炎； HBsAg； HBV-DNA； 对比
[中图分类号] R512.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2009）13-26-02
Comparison Research of ELISA and PCR in Examining HBsAg and HBV-DNA
YAN Li1 QIAO Cuiling2
1.Department of Laboratory，The First People"s Hospital in Yibin；2.Health School in Yibin，Sichuan 644000
[Abstract] ObjectiveTo compare the clinical value and reliability of ELISA（enzyme linked immunosorbent assay） and PCR（polymerase chain reaction）in examining HBsAg（hepatitis B surface antigen） and HBV-DNA（hepatitis B virus- DNA）. MethodsExamining HBVM（HBsAg，Anti-HBs，HBeAg，Anti-HBe，Anti-HBc）by ELISA and HBV-DNA by PCR of 45 HBV patients. ResultsOf all the 45 HBV patients，the positive rate of HBV-DNA was 24.44%. ConclusionELISA and PCR can not correctly examine the results and in clinical we should examine blood by both.
[Key Words]HBV； HBsAg； HBV-DNA； Contrast
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种严重危害人类健康和生命的全球性传染性疾病，HBV持续感染与肝硬化和原发性肝细胞肝癌等的发生发展密切相关。我国是乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染高发区，根据2006年全国人群乙型肝炎血清流行病学调查结果显示，我国人群1～59岁人群中HBsAg携带率已从1992年的9.75％降至7.18％，按目前HBsAg携带率推算，我国仍然有HBsAg携带者约9300万人。目前医院临床上多以血清免疫学乙型肝炎病毒标志物HBVM（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc）作为诊断乙型肝炎的重要依据之一，随着PCR对血清HBV-DNA进行定量检测，HBsAg阴性不能排除HBV感染已经成为共识，尤其在HBV感染的高发地区。本文旨在通过采用酶联免疫法和荧光定量聚合酶链反应两种方法同时测定，并对HBsAg、HBV-DNA结果进行对比，现报道如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象
45例患者HBsAg阴性的慢性乙型肝炎患者均为2006年6月～2007年10月门诊及住院患者。其中男23例，女22例；年龄24～67岁，平均47岁；均无乙肝疫苗接种史。HBVM检测所有病例HBsAg均呈阴性，同时采用PCR方法对血清HBV-DNA进行定量分析。对照组45例为同期慢性乙型肝炎患者，其中男17例，女28例；年龄19～59岁，平均42岁。ELISA法检测HBsAg、HBeAg、抗-HBc均呈阳性，同时采用PCR对血清HBV-DNA进行定量分析。慢性乙型肝炎及其病理诊断依照中华肝病学会和中华传染病学会2000年西安会议标准，并排除其他肝炎病毒感染和其他原因的肝病损害。
1.2 方法
用酶联免疫检测法检测HBVM（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc），试剂盒由上海科华生物技术有限公司提供，操作严格按试剂盒说明书进行，并采用卫生部临检中心0407质控血清进行质量控制。结果判定：s/co≥1为有反应性，0.8≤s/co 既往研究发现，HBV通过在细胞内表达抗原或与细胞基因整合，诱导免疫损伤甚至细胞恶变。HBsAg是HBV感染的特异性指标，抗-HBs一般于HBsAg消失数周后（也就是急性感染约5个月后）开始在血液中出现，是HBsAg刺激机体产生的特异性保护抗体，是HBV感染终止及有免疫力的标志。但是，本文单独抗-HBs阳性的慢性肝炎组HBV-DNA阳性率为16.67％，提示抗-HBs转阳后，肝细胞的病毒复制仍可持续或者抗体未能消除变异的HBV感染。
实验结果表明：HBsAg阴性慢性乙型肝炎患者中，HBV-DNA阳性率为24.44％，提示在HBsAg阴性的慢性乙型肝炎患者，尽管体内存在病毒抗体，但隐伏的HBV仍可长期存在，甚至持续低水平复制，因此，仅根据HBsAg阴性甚至HBsAg阴性、抗-HBs阳性不能排除乙肝感染。两者检测结果之间的差异可能与以下因素有关：（1）HBsAg在血液中多为不含病毒颗粒的空壳，其无法反映病毒有无复制、复制程度、传染性强弱等情况，而HBV- DNA检测是对病毒本身的检测，是HBV复制最直接、最可靠的指标；（2）部分患者ELISA检测有反应性，但PCR检测为阴性，提示其体内仍有病毒颗粒，但可能非完整的病毒颗粒，病毒处于相对静止状态，无明显的病毒复制；（3）部分患者ELISA检测有反应性，但PCR检测为阴性，可能与HBV-DNA所用引物不匹配或HBV-DNA整合于宿主细胞基因或基因变异即HBV- DNA检测假阴性，体内病毒较低所致。后两种原因皆提示其传染性极低。
综合上述结果，提示隐匿性乙型肝炎患者仍普遍存在，相当部分HBsAg阴性的慢性肝病患者不仅是HBV感染者，而且存在病毒复制和传染性。HBsAg隐性感染是隐源性肝病的主要病因之一，也是乙肝疫苗接种无应答的原因之一。这就要求我们在临床进行检测时，要加强对患者的筛选，首先应用ELISA法检测HBsAg，去除HBsAg有反应性血液，再在其基础上对HBsAg无反应性血液加做HBV-DNA核酸检测，去除HBV-DNA有反应性血液，只有这样才能正确诊断患者的机体感染或复制状态。
[参考文献]
[1] 张永新，杜绍财，陈苹，等. 肝炎恢复期乙型肝炎表面抗体阳性者血清中的乙型肝炎病毒DNA[J]. 中华内科杂志，1992，31（10）：629-632.
[2] 郎江明. 临床免疫诊断学[M]. 广州：广东科技出版社，2003：44．
[3] 骆抗先. 乙型肝炎基础和临床[M]. 第2版.北京：人民卫生出版社，2001：56-73，530-532.
[4] 朱立平，陈血清. 免疫学常用实验方法学[M]. 北京：人民军医出版社，2000：343-363.
[5] 刑玉兰. 乙型肝炎的病原学、流行病学和预防研究[M]. 北京：北京出版社，1992：15-23.
（收稿日期：2009-01-14）
