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【摘要】 目的 建立前列舒胶囊的质量标准。 方法 采用薄层色谱法对前列舒胶囊中黄柏、蒲公英、栀子、赤芍等进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量。色谱柱：PHENOMENEX ODS C18柱(4.6×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(40∶60)(每100 ml含十二烷基磺酸钠0.1 g)；检测波长：345nm；流速：1 ml/min；柱温：30℃。 结果 盐酸小檗碱在32.6~326.0 ng范围内呈良好线性关系。平均回收率为96.84%，RSD为1.30%(n=6)。结论 该方法简便、准确、可靠，可作为前列舒胶囊的质量控制方法。
【关键词】 前列舒胶囊；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；盐酸小檗碱
Studies on the quality standard of qianlieshu capsule
ZHANG Jun-hong,LI Ci-en,HE Yan-qing.The First Affiliated Hospital of Guagnzhou University of Chinaese Medicine,Guangzhou 510450,China
【Abstract】 Objective To establish the quality standard of Qianlieshu capsule.Methods TLC were used to distinguish Huangbai,Pugongying,Zhizi and Chishao. HPLC were used for the deterimination of Berberine. The column was PHENOMENEX ODS C18 (4.6×250 mm，5 μm),the mobile phase were acetonitrile-0.1% phosphoric acid(40�60)(including 0.1 g Sodium dodecyl sulfate per 100 ml); the detection wavelength at 345nm,flow rate at 1.0 ml/min and column temperature at 30℃ respectively. Results Berberine showed a good linear relationship in the range of 32.6~326.0ng，and the average recovery was 96.84％with RSD=1.30％(n=6).Conclusion This method is simple，accurate，reliable and can be used as a quality standard for Qianlieshu capsule.
【Key words】 Qianlieshu capsule; Quality standard; TLC; HPLC; Berberine
前列舒胶囊由黄柏、蒲公英、赤芍、栀子、车前子、地黄、甘草、野菊花等组成，具有清热泻火，利湿解毒等功效，临床常用于前列腺炎、前列腺增生等。为控制前列舒胶囊的质量，采用薄层色谱法对该制剂中的黄柏、蒲公英、栀子、赤芍等药材进行了定性鉴别；并采用高效液相色谱法对制剂中的盐酸小檗碱进行了含量测定，从而有效地控制前列舒胶囊的内在质量。
1 仪器与试药
瑞士 CAMAG Automatic TLC Sampler4(薄层自动点样仪)，瑞士CAMAG Reprostar3(薄层成像系统)，硅胶G 薄层板(浙江省路桥四甲生化塑料厂)，Agilent 1100(美国)高效液相色谱仪，PHENOMENEX ODS C18 (4.6×250 mm,5 μm)色谱柱，DAD 检测器，四元梯度泵，G2170AA 数据处理软件系统。
试剂：乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。黄柏对照药材(121510-200602)、蒲公英对照药材(121195-200602)、栀子对照药材(120986-200605)、赤芍对照药材(121093-200402)、盐酸小檗碱对照品(110713-200208)均购于中国药品生物制品检定所。前列舒胶囊(自制中试产品，批号：081022，081023，081024)，前列舒胶囊阴性 (自制)。
2 定性鉴别
2.1 黄柏的TLC鉴别 取本品内容物10 g，加氨水5 ml使润湿，密闭放置30 min，加入三氯甲烷30 ml，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.5 g，加氨水2 ml润湿，同法制成对照药材溶液。再按处方比例，取缺黄柏的其他各味药，按制备工艺加工制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液10 μl、对照药材溶液1 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰(如图1)。
2.2 蒲公英的TLC鉴别 取本品内容物10 g，加入乙酸乙酯30 ml，加热回流提取30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取蒲公英对照药材粉末1 g，同法制成对照药材溶液。再按处方比例，取缺蒲公英的其他各味药，按制备工艺加工制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9∶5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，放置3 h后，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰(如图2)。
2.3 栀子的TLC鉴别 取本品内容物10 g，加水饱和正丁醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材1 g，加数滴水使润湿，加水饱和正丁醇20 ml，同法制成对照药材溶液。再按处方比例，取缺栀子的其他各味药，按制备工艺加工制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上使成条带，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性无干扰(如图3)。
2.4 赤芍的TLC鉴别 取“2.3”项下供试品溶液作为供试品溶液。另取赤芍对照药材粉末1 g，加水饱和正丁醇30 ml，同法制成对照药材溶液。再按处方比例，取缺赤芍的其他各味药，按制备工艺加工制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰(如图4)。
3 含量测定
3.1 色谱条件 色谱柱：PHENOMENEX ODS C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(40∶60) (每100 ml含十二烷基磺酸钠0.1 g)；检测波长：345nm；流速：1 ml/min；柱温：30℃。
3.2 对照品溶液的制备 精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24 h的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml含盐酸小檗碱16.3 μg的溶液，即得。
3.3 供试品溶液的制备 取本品10粒，倾出内容物，研匀，取约1 g，精密称定，置100 ml三角烧瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.4 阴性对照试验 处方中除去黄柏，按制剂工艺制备，制得供试品阴性对照样品，按供试品溶液制备的方法制备供试品阴性对照溶液。吸取上述溶液各10 μl，分别按上述色谱条件进样分析，记录色谱图，结果显示，阴性对照图谱与对照品、供试品图谱中盐酸小檗碱相应的保留时间无色谱峰，表明选择性良好，阴性无干扰。
3.5 标准曲线的制定 分别精密吸取对照品溶液(1 ml含盐酸小檗碱16.3 μg)2、5、8、12、15、20 μL，按上述色谱条件进样测定，记录色谱图，根据盐酸小檗碱峰的积分值绘制标准曲线，以进样量为横坐标(X)，以色谱峰面积为纵坐标(Y)进行回归，回归方程为Y=428.2X+8.016, r =0.9993。结果表明，盐酸小檗碱在32.6~326.0 ng范围内线性关系良好。
3.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μl，分别连续进样5次，测定盐酸小檗碱峰面积，其RSD为1.21%，表明仪器精密度良好。
3.7 重复性试验 取同一批样品(批号：081022)的内容物粉末5份，分别制备供试品溶液，注入液相色谱仪测定，结果盐酸小檗碱平均含量为0.27 mg/g，RSD为1.39％，结果表明方法的重复性较好。
3.8 稳定性试验 精密取供试品溶液(批号：081022)各10 μl，分别于0，2，4，6，8 h注入液相色谱仪测定5次，结果盐酸小檗碱色谱峰面积基本无变化，RSD为1.85％(n=5)，表明8 h内稳定。
3.9 加样回收率试验 取已知含量的样品(批号：081022)内容物约0.5 g，精密称定，按其所含盐酸小檗碱的质量分数的80%、100%、120%分别精密加入盐酸小檗碱对照品，按供试品制备与测定方法平行试验，结果盐酸小檗碱平均回收率为96.84%，RSD为1.30%(n=6)，结果见表1。
3.10 样品含量测定
精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10 μl，分别按上述色谱条件进样分析，记录色谱图，根据供试品吸收度积分值与对照品积分值，外标两点法计算，即得。结果见表2。
4 讨论
前列舒胶囊为多种中药配制而成的中药复方制剂，成分较为复杂。在制备含量测定供试品时，曾对比了超声法、回流法，以及乙醇和甲醇为提取溶媒对供试品制备的影响，结果表明，采用超声法制备供试品虽然比回流法简便快捷，但其盐酸小檗碱的提取量约为回流法的80%，故采用回流法作为本实验中供试品溶液的制备方法；而甲醇的提取率稍高于乙醇，相对提取的更完全，故选用甲醇作为提取溶剂。结果表明薄层色谱鉴别斑点清晰，阴性无干扰；含量测定方法简单、灵敏度高，重现性好，可用于前列舒胶囊的质量控制。
参 考 文 献
［1］ 都日娜,乌日娜.黄柏的研究进展.中国民族医药杂志,2008，14(3):75-76.
［2］ 中华人民共和国药典委员会.《中国药典》.第1部.北京：化学工业出版社,2005.
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
