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【摘要】 目的 建立以高效液相色谱法同时测定剌五加浸膏中紫丁香苷（苷B）、紫丁香树脂苷（苷E）含量的方法。方法 色谱柱YMC-ODS柱，流动相为甲醇-水（30∶70），检测波长苷B λs=265 nm, 苷E λs=220 nm,流速1．0 L/min,柱温30℃，进样量10 μl。结果 苷B、苷E分别在0．033 28～0．166 4 μg(r=0．999 8)，0．016 8～0．084 μg(r=0．999 3) 范围内呈良好的线性关系。平均回收率苷B、苷E分别为98．61%（RSD=1．07%）、97．43%( RSD=1．21%)。结论 本方法简便、准确、重现性好，能同时测定剌五加浸膏中两组分的含量。
【关键词】 剌五加浸膏；紫丁香苷（苷B）；紫丁香树脂（苷E）；高效液相色谱法
Determination of two constituents in extractum acanthopanacis senticosi by HPLC
CHEN Da-zhong，Yan Guang-li, Hei Longjiang University of Traditional Chinese Medicine，harbin 150040，China
【Abstract】 Objective To establish a method of HPLC determination ofSyringin and Syringaresinol in Extractum Acanthopanacis Senticosi.Methods YMC-ODS column was used with a mobile phase of methanol-water (30∶70)；detector wavelength Syringin 265nm,Syringaresinol 220nm; flow rate 1．0 ml/min;column temperature at 30℃;injecting volume 10?Results Syringin and Syringaresinol showed the good linear relationship at the range of 0．03328~0．1664 μ g（r=0．999 8），0．0168～0．084g (r=0．999 3)respectively；Their average recoveries were:98．61%（RSD=1．07%）and 97．43%(RSD=1．21%) respectively. Conclusion The methods is simple, accurate and reproducible. It may be used for the quantitative determination of Syringin and Syringaresinol at the same time.
【Key words】Extractum Acanthopanacis Senticosi；Syringin；Syringaresinol；HPLC
五加科植物刺五加其化学成分研究的比较多，有剌五加苷A、B、C、D、E。刺五加苷B（即紫丁香苷），具有抗疲劳作用；剌五加苷E（即紫丁香树脂酚的双糖苷），它的“抗警戒期”作用最强。近几年剌五加提取物成为我国主要的中药出口资源，以美国、日本、韩国等国家为主，对于出口剌五加提取物的质量评价国际上主要以苷B和苷E的总和为标准。而《中国药典》2005版一部只对剌五加浸膏中苷B（紫丁香苷）制订了含量标准，为满足剌五加出口物质量标准的可控性要求，笔者建立了以高效液相色谱法同时测定剌五加浸膏中紫丁香苷（苷B）、紫丁香树脂苷（苷E）含量的方法。
1 材料与方法
1．1 仪器与试剂
Agilent1100高效液相色谱系统（德国），Agilent二极管阵列检测器，Agilent色谱工作站。紫丁香苷、紫丁香树脂苷对照品（美国Sigma公司），剌五加浸膏（黑龙江久久药业提供，批号060317）。甲醇为色谱纯（德国MERCK公司），水为自制重蒸水，所用其他试剂均为分析纯。
1．2 色谱条件
色谱柱：YMC-ODS C�18柱(250 mm×4．6 mm, 5 μm)；流动相：甲醇-水(30∶70)；检测波长：苷B λs=265 nm, 苷E λs=220 nm；流速：1．0 ml／min；柱温：30℃。进样量10 μl。
1．3 对照品溶液的制备称取紫丁香苷（苷B）、紫丁香树脂苷（苷E）对照品各
2．0 mg，精密称定，分别置于25 ml容量瓶中，加甲醇-水(30：70)溶解并稀释至刻度，摇匀；分别吸取苷B对照品溶液10 ml、苷E对照品溶液5 ml移至50 ml容量瓶中，加甲醇-水(30∶70)稀释至刻度，摇匀，即得苷B、苷E浓度分别为0．016 64 mg/ml、0．008 4 mg/ml的混合对照品溶液。
2 结果
2．1 标准曲线绘制
精密吸取“1．3”项下混合对照品溶液2、4、6、8、10 ml分别转移至10 ml容量瓶中，加甲醇-水(30∶70)稀释至刻度，分别精密吸取上述溶液各10 μl，按“2．1”项下色谱条件进样，测定峰面积，分别以苷B、苷E峰面积积分值(A1、A 2)为纵坐标，进样浓度(C1、C 2)为横座标进行线性回归，得苷B、苷E的回归方程分别为A1 =735．576 9 C1+0．08(r=0．999 98)、A2=2536．31C2-2．89(r=0．999 3)。结果表明：苷B在0．033 28～0．1664 μg，苷E在0．016 8～0．084 μg之间呈良好的线性关系。
2．2 稳定性试验
取“1．3”项下混合对照品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h精密吸10 μl，按“1．2”项下色谱条件进样，测定两种对照品的峰面积，结果苷B、苷E的峰面积积分值的相对标准差RSD分别为1．33%(6例)、1．07%(6例)。结果表明: 紫丁香苷、紫丁香树脂苷在10 h内稳定。
2．3 精密度试验
取“1．3”项下混合对照品溶液，按“1．2”项下色谱条件连续进样6次，10 μl/次，测定两种对照品的峰面积，得苷B、苷E峰面积积分值的RSD为1．36%(6例)、1．12%(6例)。结果表明:本方法精密度良好。
2．4 重现性试验
取同批刺五加浸膏粉末 (批号：060317) 6份，每份约0．5 g，精密称定，按“2．6”项下方法操作。再精密吸取供试品溶液10 ul，按“1．2”项下色谱条件进样，测定峰面积，计算含量。结果，刺五加苷B平均含量2．73 mg（RSD=1．18%,6例）、刺五加苷E平均含量1．64 mg（RSD=1．22%,6例）。
2．5 回收率试验
取刺五加浸膏粉末(批号：060317)6份，每份约0．3 g，精密称定，分别精密加入对照品溶液2 ml，按“2．6”项下供试品溶液的制备方法操作。再精密吸取供试品溶液10 μl，按“1．2”项下色谱条件进样，测定峰面积，计算回收率。结果，苷B、苷E回收率分别为98．61%（RSD=1．07%，6例）、97．43%( RSD=1．21%,6例)。
2．6 样品含量测定
取刺五加浸膏粉末0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中加甲醇50 ml，精密称定重量，超声处理(功率250W,频率33KHZ)15 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，转移至50 ml容量瓶中，蒸干，放冷，用甲醇-水(30∶70)溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。精密吸取供试品溶液10 μl，按“1．2”项下色谱条件进样，测定，计算样品含量，结果 见表1。
3 讨论
3．1 测定波长的选择
根据对紫丁香苷（苷B）、紫丁香树脂（苷E）在200～400 nm范围进行紫外光谱扫描，两者在265 nm、220 nm处均有吸收，但紫丁香苷在265 nm处最大吸收强而在220 nm处最大吸收相对偏弱，紫丁香树脂苷（苷E）在220 nm 处最大吸收强而在265 nm处最大吸收相对偏弱，因此本实验选择265 nm、220 nm两波长分别作为苷B、苷E的检测波长。
3．2 流动相选择
参照《中国药典》2005版一部［刺五加浸膏］含量测定项下采用的流动相甲醇-水(20∶80)的配比比例，由于其流动相是针对单一的紫丁香苷（苷B）进行分离测定，而本实验的样品测定中增加了紫丁香树脂（苷E）的含量检测，经过多次试验验证，流动相甲醇-水(20∶80)的配比比例无法达到基线分离，两者分离效果不理想，且峰形难看。故将流动相调整为甲醇-水(30∶70)，苷B和苷E两者分离效果良好，峰形好且保留时间适宜。
3．3 溶剂的选择
试验最初对供试品溶液采用甲醇作为溶剂，结果反映在色谱上，甲醇的溶剂峰对紫丁香苷和紫丁香树脂干扰较大，拖尾现象明显，分离效果较差。而其调整为流动相甲醇-水(30∶70)作为供试品溶液的溶剂，可以有效消除溶剂峰干扰，达到了理想的分离效果。
参考文献
1 国家药典委会编.中华人民共和国药典(一部)2005年版.
2 封士兰，陈立荣，等.高效液相色谱法同时测定刺五加中刺五加苷B、苷E的含量.中国现代应用药学杂志，2001，18（2）.
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