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[摘要] 目的 探讨转染bcl-2基因治疗大鼠局灶性脑缺血的作用机制是否与bFGF蛋白的表达增加有关。方法 采用线栓法制作大鼠MCAO模型，取150只Wistar大鼠，随机分成三组，分别为脑室内注射生理盐水组（生理盐水组）、脑室内注射空质粒组（空质粒组）和脑室内注射质粒pLXSN介导的bcl-2基因组（Bcl-2组）。每组50只。分别在缺血再灌注后3、6、24、48、72h观察bFGF蛋白表达的变化。结果 大鼠MCAO后bFGF蛋白在生理盐水组与空质粒组之间，缺血后各个时间点的表达均无显著性差异（P＞0.05），结果显示其表达高峰在缺血后24h，而bcl-2组早期即大量表达且持续较长时间，并在同一时间段表达明显强于其他组（P＜0.05）。结论 pLXSN-bcl-2基因脑保护机制可能是通过促进bFGF的表达而实现的。
[关键词] bFGF； bcl-2基因； 脑缺血； 基因治疗
[中图分类号] R743 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2009）13-34-02
Study of the Effect of the Expression of bFGF in Tranfected bcl-2 Gene Therapy of Cerebral Ischemia in Rat
XIAO Lijun1 HE Zhiyi2
1.The Third People’s Hospital of Liaoyang，Liaoning 111000；2.The First Affiliated Hospital of China Medical University，Shenyang 110001
[Abstract] ObjectiveTo study the protective effct of bcl-2 against neuroal injury and the possible roles of alteration in the expression of bFGF following cerebral ischemia in rat. Methods150 wistar rats were randomly assingned in 3 groups（bcl-2 treated group，saline group and pLXSN group），there were 50 rats in each group. And we studied the bFGF expression in 3，6，24，48，72hours after MCAO temporary ischemia of the MCAO for 2 hours was induced. ResultsTheexpression of bFGF in the saline group and pLXSN group weren’t different in each time（P＞0.05）， bFGF expressed early in the bcl-2 group and lasted for a long time，while its expression was more than other groups at the same time. ConclusionBcl-2 can effectivly attenuate ischemic brain injury and increase the expression of bFGF in the ischemic brain，indicating that the neuroprotective of estrogen is associated with up-regulation of bFGF in cerebral ischemia.
[Key Words]bFGF； bcl-2 gene； Cerebral ischemia； Gene treatment
近年来，脑血管病已成为目前人类疾病的三大死亡原因之一，而脑梗死是脑血管病中最常见的疾病之一，故对脑梗死的研究一直是神经科的重要课题。目前认为，缺血性脑血管病实际上是一个多因素参与的复杂病理过程。缺血后神经元的死亡有两种形式，即凋亡和坏死，凋亡发生在许多细胞中，这一过程是细胞的主动性死亡，凋亡性细胞死亡是一个基因控制的过程，有RNA和蛋白质的合成[1]。在调节凋亡的基因中，bcl-2（B细胞淋巴瘤/白血病-2基因）是首先被发现有抑制凋亡作用的基因。目前许多学者将这种具有抗凋亡作用的基因用基因转染技术进行实验研究[2-5]，也得出相同的结论，近年来，碱性成纤维生长因子（bFGF）与bcl-2之间的关系日益受到人们的重视[5]，这也有利于进一步研究bcl-2抗凋亡的作用机制。现将我们的研究成果报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组
体重280～300g的Wistar大鼠150只（由中国医科大学动物部提供），随机分为脑室内注射生理盐水组（生理盐水组）、脑室内注射空质粒组（空质粒组）和脑室内注射质粒pLXSN介导的bcl-2基因组（bcl-2组）三组，每组又随机分为缺血再灌注3、6、24、48、72h组。每小组动物10只。
1.2 大脑中动脉闭塞（MCAO）模型的制作
采用改良的Longa栓线法。全部大鼠统一采用栓塞右侧大脑中动脉并于梗死后2h再灌注。
1.3 质粒pLXSN介导Bcl-2基因的制备方法
参照何志义等[6]在《质粒pLXSN介导人bcl-2 cDNA抑制局灶性脑缺血大鼠神经细胞凋亡》中描述的制备方法。
1.4 分组实验
各组动物均于缺血再灌注后存活3、6、24、48、72h处死。
1.5 bFGF免疫组化分析
免疫组化分析采用SABC法。试剂来自武汉博士得公司。
1.6 统计学方法
数据以均数±标准差（χ±s）表示，应用SPSS11.5软件处理，采用t检验，P 目前，转bcl-2基因治疗缺血性脑梗死在实验室研究阶段取得了一定进展，但其作用机制却不甚明确，有学者认为与抑制Ca2+释放有关，也有学者认为bcl-2通过阻止促凋亡信号传递，或阻止这些诱导基因产物而发挥抗细胞凋亡作用，还有人认为bcl-2可通过抑制自由基而发挥抗凋亡作用。我们的实验观察到，在生理盐水组与空质粒组，其bFGF蛋白在MCAO后3h即有表达，在24h 表达最强。而在实验组，bFGF蛋白在缺血后3h即开始显著表达，持续至72h，且各个时间点表达均比对照组明显。
本实验免疫组化的表达结果显示，bcl-2组bFGF蛋白的表达在不同时间明显强于二对照组，而且在3h明显增强，持续高表达至72h。这表明，bcl-2的脑保护机制与bFGF的表达上调有密切关系，可能通过bFGF的释放起到保护神经元、促进胶质细胞增生，改善缺血区血供以及促进新生血管形成等作用，从而影响神经功能的恢复。
综上所述，bcl-2通过促进bFGF的表达，进而保护神经元、营养胶质细胞、促进新生血管形成等，从而实现其脑保护作用，可能是其抗凋亡作用机制之一，这为临床治疗缺血性脑梗死开辟了一条新的途径，使基因治疗成为可能，但如何更好地、真正地应用于临床还需进一步的研究。
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（收稿日期：2009-03-03）
