【www.zhangdahai.com--统战民宗公文】
【摘要】 目的 旨在研究慢性房颤患者心房肌瞬时外向钾通道电流的变化，为房颤机制的阐明提供更多的实验依据。方法 心房肌标本取材于体外循环手术患者右心耳。采用全细胞膜片钳技术研究心房肌瞬时外向钾通道电流密度的变化。结果 慢性心房颤动患者心房肌瞬时外向钾通道电流密度降低，在测试电位-20 mV以上各电位水平时均有显著性差异(n=16，P[1]。心房有效不应期的缩短[2-4]和折返环的存在[5-7]在心房颤动中起重要作用。瞬时外向钾通道电流(Ito)是复极早期的主要电流，对于动作电位的形态和调节非常重要，对动作电位时程和有效不应期的改变起重要作用。�
本文旨在研究慢性房颤患者心房肌Ito的变化，为阐明心房颤动的机制提供更多的实验依据。�
1 资料与方法�
1．1 实验对象 随机分为两组:慢性心房颤动组(AF组)和窦性心律组(SR组)，AF组6例，SR组10例,患者均来自三级医院，通过χ2检验比较性别、年龄、房颤持续时间、心功能、心脏各腔室直径两组间无显著差异。�
1．2 心肌细胞的分离 心肌标本取材于体外循环手术时患者的右心耳，质量50~100 mg。标本采用无钙离子、100%氧饱和的心肌麻痹液保存送往实验室。心肌麻痹液含有(mM)：KH2PO450，MgSO48，Adenosine 5，HEPES 10，Glucose 140，Mannitol 100，Taurine 10(pH 7．4)。标本切成小块后用EGTA液清洗脱Ca2+。EGTA液含有(mM)：NaCl 137,KH2PO45，MgSO41,Glucose 10，HEPES 5，Taurine 10，EGTA 0．1(pH 7．4)。然后将标本放入含有150 U/ml胶原酶(V型,Sigma)、12．6 U/ml蛋白酶(XXIV型,Sigma)和1 mg/ml 白蛋白(Sigma)的EIM液中，维持35℃，持续冲以100%氧气，消化一段时间。EIM液含有(mM)：NaCl 137，KH2PO45,MgSO41,Glucose 10,HEPES 5，Taurine 10(pH 7．4)。之后用不含酶的EIM液洗1 min，去掉上清液，再用只含胶原酶的EIM液消化，直到镜检出现杆状的细胞为止。细胞用KB液保存备用。KB液含有(mM)：KCl 20，KH2PO410，Glucose 25，Mannitol 5，Albumin 1，L-Glutamic acid 70，β-hydroxybutyrate 10，Taurine 10，EGTA 10,(pH7．4)。�
1．3 Ito记录 选用静止、杆状、横纹清楚的细胞,采用全细胞电压钳制技术记录Ito。玻璃微电极尖端电阻2~4 MΩ。电极内液含有(mM)：KCl 20，K-aspartate 110，MgCl2 1，HEPES 10，EGTA 5，Phosphocreatine 5(pH7．2)。细胞浴液含有(mM)：NaCl 136，KCl5．4，CaCL2 2，MgCl2 1，NaH2PO40．33，HEPES 5，Glucose 10，CoCl2 3。电极连接于膜片钳放大器(Axopatch 200B，Axon Instruments)，数据通过数模转换器(Digidata 1200，Axon Instruments)连于计算机进行记录与分析。采样频率10 kHz，低通滤波频率2 kHz。形成封接以前把电极电位调至零，吸破细胞膜形成全细胞构型后，补偿串联电阻使其最小化。记录时浴液的温度为22℃~25℃，钳制方案见图1。�
1．4 统计学方法 实验结果中计量资料均以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验，以Pto电流密度在测试电位-20 mV以上各电位水平时，AF组比SR组小，差异均有统计学意义(Pto是由瞬时外向钾通道介导的，此通道是一种产生外向电流的电压依赖性钾通道。该通道无整流特性、激活迅速、失活快(时间常数10~40 ms)、但活性恢复较慢。激活阈值为-40~-20 mV，通道电流约在激活l0 ms时达到最大幅度，到达峰值的确切时间依赖于测试电位，在更大的去极化电压时到达峰值的时间缩短，Ito能被4-AP特异性阻断，本研究记录到的电流符合这些特点。�
流行病学调查指出心房颤动具有自我维持性，房颤的快速心率可以产生心房肌电生理的改变，这些改变又可促进心房颤动的维持[8]。心房颤动的持续时间越长，心房颤动自发转化为窦性心率和电复律后窦性心率的维持越困难。心房颤动的急性期和慢性期心房肌电生理的改变包括：心房动作电位时程缩短、心房有效不应期缩短和不应期离散度增加[9]。�
有文献报道房颤时L-型钙电流(Ica-L)减少，Ica-L是平台期的主要离子流，其减少可导致动作电位平台期缩短，进而缩短动作电位时程和有效不应期。Ito是复极早期的主要电流，它与0期去极化电流共同形成了动作电位的锋电位，决定动作电位平台期起始的电位高度，影响平台期其它电流的激活，Ito的减少可提高平台期起始的电位高度，延长平台期，因此Ito减少可能是对心房肌动作电位时程和有效不应期缩短的一种补偿，它降低心房肌动作电位时程和有效不应期缩短的程度。这些改变表明Ito电流密度的减少是房颤时电重构的一个因素。�
慢性房颤时Ito电流密度降低，这些改变对房颤的电重构起一定的作用。�
参考文献
［1］ Kannel WB，Wolf PA.Epidemiology of atrial fibrillation.In:Falk RH，Prodrid PJ，eds.Atrial Fibrillation:Mechanism and Management.Raven Press Publishers，1992:81-92.�
［2］ Kumagai K，Akimitsu S，Kawahira K，et al.Electrophysiological properties in chronic lone atrial fibrillation.Circulation,1991,84:1662-1668.�
［3］ Ramdat Misier AR，Opthof T，van Hemel NM，et al.Increased dispersion of‘refractoriness’in patients with idiopathic paroxysmal atrial fibrillation.J Am Coll Cardiol，1992,19:1531-1535.�
［4］ Asano Y，Saito J，Yamamoto T，et al.Electrophysiologic determinants of ventricular rate in human atrial fibrillation.J Cardiovasc Electrophysiol,1995,6:343-349.�
［5］ Botteron GW，Smith JM.Quantitative assessment of the spatial organization of atrial fibrillation in the intact human heart.Circulation，1996,93:513-518.�
［6］ Konings KTS，Kirchhof CJHJ，Smeets JRLM，et al.High-density mapping of electrically induced atrial fibrillation in humans.Circulation,1994,89:1665-1680.�
［7］ Brugada J，Gursoy P，Brugada P，et al.Cibenzoline transforms random re-entry into ordered re-entry in the atria.Eur Heart J，1993,14:267-272.�
［8］ Allessie M，Konings K，Wijffels M.Electrophysiological mechanism of atrial fibrillation.In.DiMarco JP，Prystowsky EN,eds.Atrial Arrhythmias:State of the Artst Armonk.NY:Futura Publishing Co,1995:155-161.�
［9］ Daoud EG，Bogun F，Goyal R，et al.Effect of atrial fibrillation on atrial refractoriness in humans.Circulation,1996,94:1600-1606.�
