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[摘要] 目的:研究虎射利咽方的体外抑菌作用。方法:采用管碟法和标准试管二倍稀释法测定虎射利咽方对供试 菌的抑菌活性、最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)。结果:虎射利咽方对金黄色葡萄球菌和乙型链球菌的最大抑菌圈直径分别为15、22 mm;最低抑菌浓度(MIC)分别为200、25 mg/ml;最低杀菌浓度(MBC)分别为500、50 mg/ml,对大肠埃希菌和白色念珠菌抑菌效果不明显。结论:虎射利咽方有抑菌作用。
[关键词] 虎射利咽方;体外抑菌作用;抑菌圈;最低抑菌浓度;最低杀菌浓度
[中图分类号] R285.5 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721(2010)04(b)-017-02
Experimental study in vitro bacteriostatic effects ofHushe-Liyan compound
YUAN Shumei1,YU Jiedong2,CHEN Xiaoyang3*,HUANG Hao1, DENG Fang1, LI Ming1,WU Zhilong1
(1.2006 Undergraduate Courses in Integrated Traditional and Western Medicine of Hunan University of TCM,Changsha410208, China;2.Graduate of Hunan University of TCM, Changsha410208, China;3.College of Pharmacy, Hunan University of TCM, Changsha410208, China)
[Abstract] Objective: To explore the antibacterial effect of Hushe-Liyan compound in vitro. Methods: Used the standard cylinder plate method and in vitro two-fold dilution Hushe-Liyan compound for the test firing of the inhibitory activity of bacteria、MIC、MBC. Results: Hushe-Liyan compound for staphylococcus aureus and streptococcus B the largest inhibition zone diameters of 15, 22 mm; minimum inhibitory concentration(MIC) respectively 200, 25 mg/ml; minimum bactericidal concentration(MBC) respectively 500, 50 mg/ml, on escherichia coli and candida albicans was not obvious bacteriostatic effect. Conclusion: Hushe-Liyan compound have antibacterial.
[Key words] Hushe-Liyan compound;In vitrobacteriostasis; Inhibition zone; MIC; MBC
虎射利咽方由虎杖、射干、藿香、甘草等药物组成,方中虎杖能清热解毒,利湿退黄,散瘀止痛,化痰止咳;射干清热解毒,消痰利咽;藿香利湿,止呕,解暑;甘草补脾益气,祛痰止咳,缓急止痛,清热解毒,调和诸药。该方具有清咽利喉、消肿止痛之功,用于治疗湿热引起的咽喉肿痛,临床上起到很好的治疗效果。本文就虎射利咽方对4种供试菌的抑菌效果进行研究。
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1药品虎射利咽方(虎杖12 g、射干10 g、藿香8 g、甘草6 g等)购于长沙老百姓大药房,并经过湖南中医药大学临床中药学教研室陈晓阳教授鉴定。银黄含片,成都地奥制药集团有限公司生产,批号:Z10940042。
1.1.2培养基肉汤培养基、营养琼脂培养基、血琼脂培养基、沙氏培养基由湖南中医药大学微生物教研室提供。血琼脂培养基供乙型溶血性链球菌的培养,沙氏培养基供白色念珠菌的培养。
1.1.3菌种金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌均由湖南中医药大学微生物教研室提供。
1.1.4实验仪器SW-CJ-IBU洁净工作台(苏州安泰空气技术有限公司),ZSD-1270生化培养箱(上海智城分析仪器制造有限公司)。
1.2实验方法
1.2.1药品的制备称取虎射利咽方药材100 g,加1 000 ml水提取2次,最后浓缩成1 g/ml的药液,灭菌,备用。银黄含片也配制成1 g/ml的药液,灭菌,备用。
1.2.2 菌种活化及培养将3种斜面保存的菌种划线接种至营养琼脂培养基上[1](乙型溶血性链球菌用血琼脂培养基[2]),37℃恒温培养24 h后挑取单菌落接种于营养肉汤中(乙型溶血性链球菌营养肉汤中加入10%的羊血),至37℃恒温培养16～18 h后用于抑菌性能测定。
1.2.3 抑菌圈直径的测定在无菌工作台上,用无菌滴管吸取适量各菌悬液分别滴加于4个对应的固体培养基上,用涂布棒涂布均匀。再通过无菌操作将牛津杯放在固体培养基上,并使牛津杯与平板培养基接触无缝隙。每板放6个,其中3个加入虎射利咽方,另外3个加入对照药银黄含片,分别加满。于37℃恒温培养箱中培养24 h(白色念珠菌放入28℃恒温培养箱中培养48 h),取出,测量抑菌圈直径,结果取平均值[3]。
1.2.4 最低抑菌浓度(MIC)的测定采用标准试管2倍稀释法。取8支试管,第1只试管中加入1.6 ml营养肉汤,其余每只加入1 ml营养肉汤(乙型溶血性链球菌营养肉汤中加入10%羊血),并在每只试管中加入0.1 ml菌悬液。在第1只试管中加入0.4 ml虎射利咽方药液,混匀,然后从第1只试管中吸取1 ml液体加入第2只试管中,混匀,依次稀释至第7管,第8只试管不做处理作为空白菌株对照[4-5]。至此试管内药液浓度分别为200.000、100.000、50.000、25.000、12.500、6.250、3.125 mg/ml(金黄色葡萄球菌多做一支药液浓度为500 mg/ml供试试管)。于37℃恒温培养箱中培养24 h,取出用肉眼观察培养液浑浊度,确定细菌生长情况。阳性对照药银黄含片药液的MIC的测定同虎射利咽方。
1.2.5 最低杀菌浓度(MBC)测定采用肉汤对倍稀释平板活菌计数法,即在测定MIC的基础上,再依次将未见细菌生长的各管内容物用0.01 ml定量接种环接种于各菌种的琼脂平板上,37℃下培养24 h,未见细菌生长的最低药液浓度即为MBC[6]。
2结果
2.1抑菌圈的测定结果
虎射利咽方对乙型溶血性链球菌和金黄色葡萄球菌有较好的抑菌效果,对大肠埃希菌和白色念珠菌抑菌效果不明显。结果见表1。
2.2 最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)
虎射利咽方对金黄色葡萄球菌的MIC为200 mg/ml,MBC为500 mg/ml;对乙型链球菌的MIC为25 mg/ml,MBC为50 mg/ml。试管法表明,虎射利咽方对金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌都有很好的抑菌效果。结果见表2。
3讨论
多年临床经验表明,虎射利咽方对治疗上呼吸道感染、扁桃体炎、咽喉炎均有较好的治疗效果。本文就其对4种供试菌的抑菌效果进行了研究。结果对致病菌金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌的抑菌圈平均直径分别为15、20 mm,MIC和MBC分别为200、500 mg/ml和25、50 mg/ml。对大肠埃希菌和真菌白色念珠菌的抑菌效果不明显。本实验结果表明,虎射利咽方具有很好的抑菌效果,从而为其开发利用提供了理论依据。
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(收稿日期:2010-03-12)
