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摘要：目的：研究智生胶囊Ⅰ号方(ZSJN)对老年痴呆模型大鼠智力、单胺氧化酶(MAO)、β－淀粉样蛋白(β－AP)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的影响，探讨其防治老年痴呆的作用及机理。方法：应用腹腔注射D－半乳糖制成老年痴呆大鼠，应用Morris水迷宫法判断大鼠的学习记忆能力，采用生化及其放免法测定其脑内MAO活性、β－AP及GSH-Px含量。结果：与正常组大鼠相比，模型组学习记忆能力明显降低。应用“智生胶囊Ⅰ号方”预防和治疗后，模型鼠学习记忆能力得到保护和改善，脑组织MAO活性降低、β－AP含量减少、GSH-Px酶升高。结论；智生胶囊I号方能明显增强模型大鼠学习记忆能力，通过降低单胺氧化酶活性，降低β－AP，升高GSH-Px酶活性来实现对老年痴呆模型鼠预防和治疗作用。
关键词：老年痴呆；单胺氧化酶；β－淀粉样蛋白；谷胱甘肽过氧化物酶；实验研究
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1007－2349(2008)03－0036－03
老年痴呆即“阿尔茨海默病”(Alzheimer Disease；AD)，是发生于老年前期或老年期，以进行性痴呆，认知障碍为主要症状，同时伴有精神行为异常的精神退行性疾病。其特征性临床表现为严重的学习记忆功能下降，分析判断能力衰退，情绪改变，行为失常，甚至意识模糊。由于AD的病因病机尚未明确，所以对该病还无特效药。现代医学所使用的药物大多处在临床实验中，而且毒副作用大。中医学具有悠久的历史，其丰富的药物种类为其提供了庞大的资源库。“智生胶囊Ⅰ号方”是导师王景洪教授根据多年来的研究心得。结合中医理论和现代药理研究创制而成，方以人参、熟地、菟丝子、川芎、菖蒲、远志、银杏叶组成。具有益气补血填精、化痰祛瘀开窍、健脑益智强记之功，在临床应用中有较好疗效。现就以该药对模型大鼠脑组织的MAO活性、β－AP及GSH-Px含量的影响方面进一步探讨其作用机制。
1 实验材料
1.1 实验动物 SD大鼠60只，雄性，6月龄，体重(300±50)g。由西安交通大学医学院验动物中心提供(医动字第08－005号)
1.2 实验用药及试剂 智生胶囊Ⅰ号方由陕西中医学院药物研究所提供，制成混悬液含生药1.2g／mL；健脑胶囊由江西广信药业有限公司，批准文号Z36020840，加入蒸馏水配制成浓度16.2mg／mL的混悬液；D－半乳糖注射液，西安阿尔宝生物技术有限责任公司，批号－0637；生理盐水、蒸馏水，由陕西中医学院生理教研室提供。单胺氧化酶试剂盒，批号20070911；β－淀粉样蛋白试剂盒，批号20070809；谷胱甘肽过氧化酶试剂盒，批号20070906；均由南京建成生物工程研究所提供。
1.3 主要实验仪器 Morris水迷宫(陕西中医学院药理实验中心按李仪奎方法制作)、电子天平BSl24S(北京赛多利斯仪器系统有限公司生产)、数显恒温水槽DK－8AD型(上海一恒科技有限公司生产)、723型可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司生产)、KDC－40低速离心机(北京科大创新股份有限公司生产)、超声波细胞粉碎机JY92－Ⅱ(宁波新芝生物科技股份有限公司生产)、玻璃匀浆器(陕西中医学院免疫教研室提供)。
2 实验方法
2.1 动物分组 60只SD大鼠给予标准饲料，自由饮水，适应性喂养7d后，随机分为6组：A－正常对照组、B－模型组、C－健脑胶囊组、D－ZSJN小剂量组、E－ZSJN中剂量组、F－ZSJN大剂量组，每组各10只，分笼饲养。
2.2 造模方法 除正常对照组外，其余各组按文献，采用腹腔注射0.5％D－半乳糖50mg／kg・d，连续6周。
2.3 给药方法 造模20d后开始给药(大鼠用量按文献法折算)，小、中、大剂量组分别相当于成人用量的10倍、20倍、40倍。灌胃体积匀为每天3mL／只，中、小剂量组加蒸馏水稀释，大剂量组水浴中加热浓缩，3种剂量配置为等体积液体。A、B组每日给予等体积生理盐水灌胃；C组给予健脑胶囊0.162g／kg(相当于临床用量10倍)加蒸馏水配置为混悬液灌胃；D组每日给予ZSJN4g／kg(10倍于临床用量)灌胃，E组每日给予ZSJN8g／kg(20倍于临床用量)灌胃；F组每日给予ZSJNl6g／kg(40倍于临床用量)灌胃；各给药组连续给药28d。
3 指标观察
3.1 行为学指标Morris水迷宫法将该装置由一不锈钢制成的圆柱形水池和一可移动位置的圆柱形透明有机玻璃站台组成。水池直径120cm，高50cm，站台直径12cm，高24cm。水池水深25cm(高出站台lcm)，水温控制在(23±0.5)℃，在水池边缘上等距离设有东南西北4个标记，将水池均等的分为4个象限。圆形水池中加入脱脂奶粉，使水浑不见低于水面1em的隐藏平台，每天将大鼠面向池壁分别从东南西北4个不同象限固定入水池中各1次，直至找到并站在平台上为止，游泳超过60S后，人为将大鼠放至平台上10S进行训练。每天的四周实物等固定，6天后正式实验，将隐藏平台的位置转移到对面象限中，记录爬上平台潜伏期的时间。
3.2 试剂盒的测定 于记忆功能测定结束后第2d，用脱臼法处死动物，在冰台上快速取出大鼠脑组织并置于冰生理盐水中漂洗，除去血迹，滤纸拭干、称重后，再将脑迅速浸入冷生理盐水中(生理盐水重量为脑组织重量的9倍)，用玻璃匀浆器在冰浴中制成10％的组织匀浆，以3000r／min离心10min，取匀浆上清液待用。对脑组织中的MA()、β－AP、GSH-Px的测定严格按照试剂盒说明书进行。同时快速送一部分脑匀浆至附院同位素室检测β－AP含量。
4 统计方法
数据均采用均数加减标准差表示，采用SPSS10.0统计软件进行处理(2组间以t检验比较差异的显著性；多组间以单因素方差分析进行假设检验，多重比较采用Dunnett t检验、q检验。)
5 实验结果
5.1 各组大鼠在Moriss水迷宫实验中的检测结果见表1。
从表1中可以看出：与正常组相比，模型组所用时间明显增多(P＜0.01)，造模成功；与模型组相比，各治疗组所用时间减少(##P＜0.01，#P＜0.05)，治疗有效；各治疗组相比，中剂量组效果最佳(△P＜0.01)。
5.2 智生胶囊Ⅰ号方对AD模型大鼠脑组织MA()、β－AP、GSH-Px酶含量的影响 结果见表2。
从表2可以看出：对于MAO活性，与正常组相比，模型大鼠脑组织MAO的含量明显升高(P＜0.01)，说明造模成功；与模型组相比，各治疗组MA()的含量不同程度降低(##P＜0.01，#P＜0.05)，治疗有效；各治疗组间相比，中剂 量组效果最佳(△△P＜0.01)，且健脑胶囊与大剂量组无差异。对于p―AP含量，与正常组相比，模型组大鼠脑组织β－AP含量明显升高(*P＜0.01)，说明造模成功；与模型组相比，各治疗组β－AP含量不同程度降低(##P＜0.01，#P＜0.05)，治疗有效；各治疗组间相比，中剂量组效果最佳(△△P＜0.01)。且健脑胶囊与大剂量组无差异性。对于GSH-Px活性，与正常组相比，造模组大鼠脑组织GSH-Px含量明显降低(*P＜0.01)，造模成功；与模型组相比，各治疗组GSH-Px含量不同程度的升高(##P＜0.01，#P＜0.05)，治疗有效；各治疗组间相比，中剂量组效果最佳(△△P＜0.01)，且健脑胶囊与大剂量组无差异性。提示健脑胶囊及智生胶囊Ⅰ号方对AD的治疗作用是通过降低MA()、β－AP活性。提高GSH-Px活性来实现的。
6 讨论
现代医学表明单胺氧化酶是体内参与胺类物质代谢的主要酶类，其代谢底物主要为单胺类和儿茶酚胺类物质。MA()活性随年龄增高而加强，与年龄程正相关，被认为是老化的标志，可间接反映人体的老化程度，又称为老化相关酶。单胺类递质如去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(Adr)、多巴胺(DA)、5－羟色胺(5－HT)等，与学习和记忆的关系极为密切嘲。MA()单胺类神经递质的降解酶，AD患者组织中MA()活性升高，氧化分解单胺类神经递质，促进神经系统老化。Hei－nonen报道使用单胺氧化酶抑制剂(MAOI)Selegiline治疗老年性痴呆有效。同时有关学习记忆障碍研究显示Ahhcim－crs病(AD)在病理学上的特征性改变是发生神经炎斑(老年斑SP)形式的淀粉样沉淀以及神经纤维缠(NFT)。近年来大量研究表明，β－AP是构成SP的核心物质。现有的大量实验结果和临床资料表明，β－AP是各种原因诱发AD的共同通路，是AD形成和发展的关键因素。以往大量体内外研究均证实β－AP，尤其是聚合成纤维形的β－AP对神经元有毒性作用，表现在破坏细胞膜的完整性，扰乱细胞内环境的稳定诱导细胞发生凋亡等方面。GSH-Px是机体抗氧化防御体系中重要的酶之一，能清除H2O2防止细胞脂质过氧化，延缓生命衰老。GSH-Px在细胞内主要位于线粒体和胞浆，据研究大鼠的大脑皮质，海马和小脑的神经元中GSH-Px的含量较高、活性也较强。胶质细胞的GSH-Px比在神经元的活性强10倍。GSH-Px的主要作用机制是清除氧代谢产物和维持谷胱甘肽活性。谷胱甘肽(GSH)系统是细胞内重要的抗氧化系统，尤其对细胞抵抗自由基的侵害起重要作用。因此测定GSH-Px的活性对于了解体内抗氧化状态，研究抗AD药物有着重要的意义。
中医学认为老年痴呆的发生主要是虚、痰、瘀三个方面，本虚为肾精亏虚、心脾不足、气血虚损；标实为痰浊上扰、瘀血阻窍。病位在心脑，与肝脾肾关系密切，痰浊瘀血为基本病理因素。智生胶囊Ⅰ号方以补肾填精、益气活血、化痰祛瘀开窍为立法组方。方中君药为人参、熟地、菟丝子等，气血双补，阴阳兼顾，动静结合；臣药为菖蒲、远志宁心安神，祛痰开窍，两药和用，相辅相助，使气血不复上苑，痰浊消散不蒙清窍，神志自可清明，川芎有活血行气开郁，祛风止痛之功，为血中气药，且能上行头目。银杏叶为佐使药，功能敛肺止咳，活血止痛，健脑益智。全方邪正兼顾，标本同治，共奏健脑益智强记之功。
智生胶囊Ⅰ号方可明显降低D-半乳糖模型大鼠脑组织MAO活性和β-AP含量、提高脑组织GSH-Px含量，使脑内去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)水平升高，增强了递质的传递，清除过多的氧自由基，拈抗了记忆障碍，改善记忆功能，是该药发挥益智作用的重要途径和主要机理之一，同时此作用的发挥可能是以益气补血填精功用为基础。药理实验中大剂量组综合评价效果不如中剂量组，可能是因为大剂量组浓度较大，灌胃后吸收差的原因造成的，需要更为详尽的药理实验进一步探索其量效关系。
