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[摘要]利用紫外分光光度法对不同月份的水杉叶总黄酮进行含量测定。结果表明,贵州产水杉叶中总黄酮含量在3月份和6月份含量最高,达到了2%左右,高于有文献报道其它地区产水杉叶中总黄酮的含量。
[关键词]水杉;总黄酮;紫外分光光度法
[中图分类号]R927.1
[文献标识码]A
[文章编号]1006-1959(2009)07-0136-01
水杉为裸子植物门杉科植物水杉属单一种水杉(Metasequoiaglyptostro-boidesHuet)。水杉为世界珍稀孑遗物种,被世界生物界誉为活化石,产于重庆万县、湖北利川、湖南龙山、桑植一带,树史可追溯至上白垩纪,冰川期时几乎灭绝,仅有极少残存我国。现代药理实验表明水杉黄酮具有抗心律失常和抗心肌肥厚的作用,在开发心脑血管疾病药物上有很好的前景。本试验采用紫外分光光度法,以芦丁为标准品,对不同生长时期贵州产水杉叶中总黄酮含量进行了含量测定,初步揭示黔产水杉叶中总黄酮含量变化的规律。
1材料与方法
1.1样品:供试样品采自贵州大学校园内,贵州大学林学院树木挂牌活动时鉴定为裸子植物门杉科植物水杉属水杉。供试样品采集水杉植株的叶子部分。一共采集5棵,3月到10月每月采集一次,共8次,采集后50℃干燥24h、粉碎、过60目筛、备用。
1.2仪器:紫外分光光度仪TU-1901(北京普析通用),电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂),1004电子天平(上海天平仪器厂)。
1.3试剂:芦丁对照品购于北京药品生物制品检定所;AlCl�395%乙醇均为国产分析纯。
1.4检测波长的选择:通过用紫外分光光度仪TU-1901对水杉提取液和芦丁标准品加入显色剂后,在200～700nm进行扫描,发现两者在400nm左右都有一个强烈的吸收,故选用400nm为检测波长。
1.5对照样品的制备:精密称取芦丁对照品10mg,加入70%乙醇溶解,并定容于100ml容量瓶中,制成0.1mg/mL对照品溶液。
1.6水杉样品的处理及黄酮含量测定:①提取:称取经干燥、粉碎后的水杉粉末2.000g置于100ml锥形瓶中。分两次提取,第一次以80%的乙醇溶液50ml,70℃水浴加热提取2h;第二次以80%的乙醇溶液25ml,70℃水浴加热提取2h,合并两次提取液,用70%的乙醇定容到100ml容量瓶中,即得水杉黄酮提取液。②样品测定:分别精密吸取水杉黄酮提取液0.5ml两份,一份加1ml5%的AlCl�3乙醇溶液显色,另一份不加显色剂,均用70%乙醇定容于10ml容量瓶中,显色10min显色剂的提取液为参比,加入显色剂的提取液为样液,在400nm处测定吸收度。
1.7总黄酮回归方程的制作:精密量取芦丁对照品0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml,分别置于10ml容量瓶中,加1ml5%的AlCl�3乙醇溶液显色,并用70%乙醇定容,显色10min后,在400nm处测定吸收度。参比选用1ml5%的AlCl�3乙醇溶液用70%的乙醇定容到10ml容量瓶中所得的溶液,并利用紫外分光光度仪TU-1901自带的分析软件UVWin5,自动生成回归方程。回归方程为:Y=0.02248X+0.00208,R=0.9999。
2结果与分析
按照1.6项的方法对所采集的样品进行总黄酮含量分析测定,结果见表1。从本年度所采集的样品的测定结果可以看出,黔产水杉叶中总黄酮的含量随月份变化基本呈一定的规律。初春3月刚出芽的时候,总黄酮含量最高;4月时的总黄酮含量骤然下降;5月开始上升,6月时达到一个高峰;7、8、9、10月总黄酮含量逐月下降,直至落叶。
3结论与讨论
3.1本年度采集的样品中,3月和6月的样品总黄酮含量最高,都在2%左右。3月采集的叶子虽然总黄酮含量高,但此时由于水杉刚发出新芽,叶子还未充分长开,采结量较少,不适宜采摘。到6月份的时候,经过几个月黄酮类物质在植物体内的累积,总黄酮含量达到一个高峰,此时的叶子早已完全长开,最适宜采摘。
3.2本次实验中,各个月份的黔产水杉总黄酮含量都高于在武汉产水杉总黄酮含量,武汉4月、6月、8月、10月分别为:1.322%、1.556%、1.232%、0.970%。
3.3本实验中水杉叶的黄酮类物质的含量达到了2.05%,远高于全国各地银杏叶中总黄酮的含量,河南驻马店为0.977%,湖南张家界为0.83%,广东南雄为0.56%,因此在开发黄酮资源上,水杉也可能具有良好的前景。
