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摘 要：目的：观察复合刺激对亚健康大鼠模型耐疲劳能力及其血清SOD、MDA的影响。方法：采用游泳运动、睡眠剥夺和夹尾刺激等复合因素制造亚健康大鼠模型，检测动物体重、进食量、耐疲劳能力及血清SOD、MDA等指标的变化。结果：模型组动物体重低于正常组，饮水量、进食量均明显少于正常组，5 min内不动时间明显多于正常组，血清SOD活性明显低于正常组，MDA明显高于正常组。结论：复合因素造模法兼顾了亚健康的成因和表现，模型动物的宏观表现和微观指标均具备亚健康的基本特征，该造模方式具有一定的科学性和合理性。
关键词：复合刺激；亚健康；耐疲耐；SOD；MDA
中图分类号：R965.1 文献标识码：A
文章编号：1007-2349（2011）08-0054-02
亚健康的防治是目前中西医共同关注的问题。缺乏公认的动物模型是制约亚健康研究深入开展的关键问题之一。过劳、睡眠障碍、精神压力过大既是亚健康的诱发因素，又是亚健康的主要表现。因此，课题组采用游泳运动、睡眠剥夺和夹尾刺激等复合因素作用于Wistar大鼠，以模仿亚健康的成因和症状。为了明确其微观机制，正确评价该造模方式的科学性与合理性，课题组又开展了进一步研究。
1 材料与方法
1.1 实验动物 清洁级健康雄性Wistar大鼠，3月龄，雌雄各半，体重（200±20）g，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，合格证号：1016152。适应性饲养1周后，进行游泳运动初筛，剔除不擅游泳者，完全随机法分为正常组（10只）、模型组（10只）。
1.2 主要仪器及试剂 SOD试剂盒，批号20101113，南京建成生物试剂公司；MDA试剂盒，批号20071017，南京建成生物试剂公司；80-2型离心机，上海手术器械厂；752型紫外光栅分光光度计，山东高密分析仪器厂；YC-300L型医用冷藏箱，中科美菱；FM50型制冰机，北京长流科学仪器公司。
1.3 动物模型的建立 采用应激和运动致疲劳相结合制造动物模型。①运动造模 参考文献［1］稍加改变。制作160 cm×80 cm×60 cm的注水鼠箱，水深30 cm，水温25 ℃左右。第1周每天8点将大鼠放入水中，强迫游泳20 min。第2、3、4周分别增加游泳时间为30、40、50 min。游泳过程中动物如体力不支沉入水中，及时捞出，防止溺亡；②睡眠剥夺造模 参考文献［2］稍作改变。每天游泳运动结束后，在造模箱中放置10个直径为6.3 cm、高31 cm的平台（平台面距水面约1.0 cm）。动物可以上台休息，箱顶盖金属网，动物可自由摄食饮水，但不能睡眠。若其睡眠，则由于肌肉张力松弛而落人水中。造模一直持续到20：00点；③应激造模 参考文献［3］稍加改进。20：00点将动物从平台上取下，放入饲养笼。用尖端缠有纱布的止血钳夹其中一只大鼠尾部，令其与其他大鼠撕打，模仿人类生存环境不佳，竞争激烈，精神压力大的情况。夹尾以不破皮、不流血为度。每次刺激2 h。定期更换夹尾大鼠，使造模结束时每只大鼠夹尾次数基本相同。22∶00点去除止血钳，全天造模结束。连续造模4周，共28 d。
1.4 指标检测 记录造模最后1周，每笼大鼠每天的进食和饮水量，造模结束后测量各组动物体重变化，采用鼠尾悬挂试验测试动物抗疲劳能力，测试结束后禁食12 h，断头取血，测血清超氧化物质化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。
1.5 统计学处理 各组数据均以（Ax-G±s ）表示，运用SPSS10.0数据包进行统计学处理。以α=0.05为标准，采用单因素方差分析，用LSD法两两比较组间数据的差异。
2 结果
2.1 一般情况 模型组动物表现为皮毛干枯、脱落，精神萎靡、活动量减少，易激惹等情况。正常组则皮毛光亮润泽，活泼多动，发育正常，体重增长正常。
2.2 2组动物体重变化比较 造模结束后测量各组动物体重变化，结果见表1。
2.3 2组动物饮水量、进食量变化比较 记录造模第4周每笼大鼠每天的进食和饮水量，7 d数据平均结果见表2。
2.4 2组动物鼠尾悬挂试验测试结果 造模结束后，将各组大鼠尾端1 cm的部位穿过中央钻有直径1cm的孔的水平有机玻璃板，板离地面1m左右，使动物呈倒挂状。动物为克服不正常的体位而挣扎活动，但活动一定时间后，出现间断性“不动”显示“失望”状态。计算5min内的不动时间，并同时观察大鼠挣扎幅度及疲劳状态［4］。结果模型组动物的挣扎幅度明显小于正常组动物，呈现间断性挣扎，挣扎时间明显少于正常组，间歇次数明显多于正常组。正常组则挣扎幅度较大，挣扎时间长，挣扎过程中虽也有间歇，但间歇次数少，间歇时间短。2组动物5 min内不动时间的测试结果见表3。
2.5 2组血清SOD活性、MDA含量检测结果 造模结束后禁食12 h，断头取血，3000 r/min离心10 min，取血清，按试剂盒说明书中方法，测定SOD活力和MDA含量。检测结果见表4。
3 讨论
动物模型的评价：①应激造模：亚健康疲劳动物模型的制造目前尚无公认的办法，本课题采用复合因素造模，即：将心理应激与过度运动致疲劳相结合。其理论依据是亚健康状态的产生与环境、心理等因素有关，本研究采用的心理应激造模法目前多用于制造抑郁症模型，但课题组认为该方法也符合亚健康的致病原因，似可作为亚健康状态的造模法；②过度运动造模：过度疲劳既是亚健康的成因，又是亚健康的重要症状之一，因此，以游泳运动导致动物疲劳，兼顾了亚健康的成因和症状；③睡眠剥夺造模：亚健康的形成与睡眠不足互为因果，采用睡眠剥夺法造模，也符合亚健康的成因和表现。实验结果证实，该模型较好地反映了亚健康状态的疲劳、失眠、抑郁、食少，体重减轻和体能下降等现象。表1结果显示，模型组动物体重低于正常组，显示复合因素造模，可以影响动物的生长发育和新陈代谢，与亚健康者体重减少表现相似，说明本模型符合亚健康的特点。从表2可以看出，模型组动物饮水量、进食量均明显少于正常组，说明该造模方法能够较好的复制亚健康食欲差，食量少的特点。表3结果显示，模型组动物5 min内不动时间明显多于正常组，说明模型组动物疲劳程度较为严重，本模型能够模仿亚健康的过度疲劳感。自由基在疲劳过程中起着重要的作用，机体代谢过程中，自由基不断生成，但又迅速清除，两者处于平衡状态。若此动态平衡受到破坏，自由基在体内生成过多或清除过慢，则过剩的自由基可对机体的生物大分子进行破坏，导致组织器官功能紊乱。体内自由基清除有赖于灭活自由基有关的酶类，SOD是超氧化物自由基强有力的清除剂，为体内唯一能直接淬灭自由基的酶，在抗自由基损伤中起着重要作用。从表4可以看出，模型组动物SOD活性明显低于正常组，说明亚健康动物体内存在着清除自由基能力降低的现象。自由基的毒性可表现为脂质过氧化，即发生在不饱和脂肪酸共价键上的一系列自由基反应，MDA是不饱和脂肪酸过氧化作用终产物，它在血清中的含量，间接反映了自由基反应对组织的破坏程度。表4结果显示，模型组MDA明显高于正常组，说明模型组动物体内组织、器官遭受自由基损害非常突出。
综上所述，该造模办法将亚健康的成因和症状放在一起综合考虑，具有一定的科学性和合理性。既充分考虑了亚健康的3个主要成因：过度疲劳、精神压力大和睡眠障碍；又考虑了亚健康的3大主症：疲劳、睡眠障碍和情绪异常。这种运用复合因素制造的亚健康模型国内未见报道，拟在今后开展更为深入的研究。
参考文献：
［1］Padovan C M.Antidepressant-like effects of NMDA-receptor antagonist injected into the dorsal hippocampusof rats［J］.Pharmacol Biochem Behav.2004，77（1）：15~19.
［2］王秀云，李积胜，刘公望，等.睡眠剥夺对亚健康形成的影响及相关机制［J］.天津中医药，2006，23（2）：108~111.
［3］聂丹丽，陈嘉屿，崔大汇，等.胃动灵对肝郁、脾虚大鼠模型胃肠运动影响的实验研究［J］.陕西中医，2000，21（6）：283.
［4］武淑娟，张青川，何采辉，等.电针对复合应激致慢性疲劳大鼠下丘脑组织中单胺类神经递质含量的影响［J］.针刺研究，2006，31（2）：96~99.
（收稿日期：2011-05-03）
