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【摘要】 目的 比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异，探讨其对HE染色的影响。方法 选取50例手术切除的新鲜骨标本，运用4种常用的脱钙液(14%硝酸、10%盐酸、20%甲盐酸和EDTA脱钙液)进行脱钙，比较其脱钙效果和对HE染色的影响。结果 不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别。结论 14%硝酸脱钙能力最强，用时间最短，染色的效果最差；10%盐酸对骨组织的损伤小，HE染色的效果最好，但用时较长；20%甲盐酸脱钙能力和HE染色效果都介于10%盐酸和EDTA脱钙液之间；EDTA脱钙液脱钙用时最长, 对骨组织的损伤最小。
【关键词】 脱钙液;HE染色;骨组织
Comparison of the application of the different decalcifying solution in the bone tissue
LUO Can-qiao, MO Mu-qiong, ZHONG Jue-min. Department of Pathology, The First Hospital Affiliated to Sun Yat-Seen University, Guangdong 510085, China
【Abstract】 Objective To investigate the different ability of four different decalcifying solutions to decalcify and their influence of HE stain and immunohistochemistry. Methods 50 cases of fresh human bone example are selected. The bones had been decalcified with four kinds of decalcifying solution (including 14% nitric acid, 10% hydrochloric acid, 20% a hydrochloric acid and EDTA). Results Different decalcifying solutions had the different decalcified ability and the influence of HE stain and immunohistochemistry. Conclusion 14% nitric acid can decalcify strongly and rapidly. But its deficiency is the infection of HE coloration and immunohistochemistry. 10% hydrochloric acid doesn"t destroy the tissue and has the best influence for HE stain. The effect of 20% a hydrochloric acid and HE stain between 10% hydrochloric acid and EDTA decalcifying acid. EDTA can decalcify for a long , have the minimum damage for bone tissue.
【Key words】 Decalcifying solution; HE stain; Bone tissue
骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成，骨基质内含大量无机盐，主要是羟磷灰石-磷酸钙和碳酸钙。由于磷酸钙和碳酸钙的存在造成骨组织的硬度较大，不易切片且极易脱片，因此在病理制片过程中，必须要进行脱钙处理，但如果骨组织脱钙过度又会严重影响组织细胞染色效果，或使组织抗原丢失，从而影响对病变组织的病理诊断或科学实验工作。因此，必须寻找一种合适的脱钙液进行骨组织脱钙。现时的脱钙液有无机酸(硝酸、盐酸、硫酸)和有机酸(蚁酸、醋酸、甲酸等)，也可以利用电解、微波等进行物理脱钙，或混和使用［1］。本研究希望通过对比各种脱钙液的脱钙效果及其后HE染色和免疫组化效果，探讨既方便临床应用，又适合科学研究的脱钙方法。
1 资料与方法
1.1 标本
选取2008年1月至2008年8月我院手术室送检的手术标本50例，其中有长骨、短骨、不规矩骨，包含骨干和骨端的骨皮质、骨髓质。
1.2 材料与设备
所有化学试剂均由广州化学试剂一厂生产；切片机、染色机和切片刀片均由英国shandan公司生产。
1.3 脱钙液的配制
14份浓硝酸加86份自来水配制成14%硝酸；10份浓盐酸加90份自来水配制成10%盐酸；盐酸20 ml,甲酸20 ml,自来水100 ml,配制成20%甲盐酸；EDTA二钠盐10 g，PBS溶液100 ml(滴加NAOH溶液至溶解，然后用HCL中和至pH 7.0)配制成EDTA脱钙液。
1.4 步骤
每例标本平均分成4份，确保所有骨组织的性质都一样。新鲜骨组织及时用10%中性福尔马林水溶液固定。充分固定后，用锋利的钢锯将骨组织切成小块，大小约1.5 cm×1.5 cm×0.3~0.5 cm,厚0.3 cm~0.5 cm，然后充分浸泡在不同脱钙液中，间隔一定时间后更换脱钙液，当用缝衣针顺利穿过无阻力感、手术刀可顺利切开即为脱钙成功。继而进行常规脱水、石蜡包埋、HE染色。
2 结果
2.1 脱钙效果 14%硝酸最好。14%硝酸>10%盐酸>20%甲盐酸>EDTA脱钙液(见表1)。
2.2 脱钙时间 14%硝酸时间最短。14%硝酸>10%盐酸>20%甲盐酸>EDTA脱钙液(见表1)。
2.3 对组织损伤 EDTA脱钙液对骨组织的损伤最小，对组织损伤：EDTA脱钙液
