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胡定辉 刘志勇 王洪斌 宋晓春 [摘要]目的研究ATP敏感的钾离子通道开放剂(PCOs)吡那地尔(pinacidil)在离体兔肺保护中的作用。方法将18只杂种灰色家兔随机分成3组，建立离体肺缺血再灌注模型。对照组(n=6)以自体温血直接再灌注2h；缺血组(n=6)用低钾右旋糖酐保存液(LPD)+二甲基亚砜(DMSO)灌洗，4度保存8h后自体温血再灌注2h；实验组(n：6)用LPD+100trmol・L-1吡那地尔(溶于DMSO中)灌洗，4度保存8h后自体温血再灌注2h。每隔30min分别经肺动脉和左房插管取血行血气分析，评估离体肺功能；测量湿／干重比，估计肺水含量；光镜下行肺组织形态学检查；制作肺组织匀浆测定超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-a)和白细胞介素-8(IL-8)含量。结果实验组氧分压差(APO2)和SOD与缺血组比较明显升高(P20.3mmol・L-1、MgSO40.8mmol・L-1、Nail-Co31.0mmol・L-1、NaCl 135.4 mmol・L-1、KCl6.0mmol・L-1、NazHPO40.8mmol・L-1、葡萄糖0.9g・L-1、右旋糖酐4050g・L-1。
1.2 方法
1.2.1 实验分组家兔随机分成3组。对照组(n=6)用自体温血直接灌注2h；缺血组(n=6)用LPD+二甲基亚砜(DMSO)灌洗，在4度保存8h后用自体温血再灌注2h；实验组(n=6)用LPD液+100μmo1・L-1吡那地尔(溶于DMSO)灌洗，在4度保存8h后用自体温血再灌注2h。
1.2.2 离体兔肺的获取家兔耳缘静脉注射3％戊巴比妥钠(30mg・kg-1)麻醉，气管切开插管机械通气，FO221％、吸呼比1：2、频率24次・min-1、潮气量12m1-kg-1。取正中切口开胸，打开心包，游离上、下腔静脉和主、肺动脉根部并套带。耳缘静脉注射肝素钠(1000u・kg-1)，左、右室壁做荷包。切开右室行肺动脉插管，收紧荷包及套带。以相似方法切开左室，向左房逆行插管，收紧荷包，结扎主动脉。右房插管收集自体血，4度保存以备再灌注用。经肺动脉插管以30cmH2O(1cmH2O=0.098kPa)灌注压灌人冷肺保护液(50ml・kg-1)。灌注完毕，夹闭肺动脉及左房插管，游离并切取心肺组织，在吸气末夹闭气管插管，将膨胀的肺浸入4度保护液中保存8h。
1.2.3 建立离体肺再灌注模型在37.8度超级恒温器中松开肺动脉和左房阻断钳，恢复机械通气，21％、频率24次・min-1、潮气量12mlkg-1。150ml自体温血预充循环管道，滚压泵以60mlmin-1速度，经肺动脉输入和左房输出完成肺循环再灌注。经肺循环后的氧合血在模式氧合器中与CO2／N2的气体混合完成去氧合。通过改变CO2／N2值调节pH值。再灌注时各组每隔30min同时获取1对血样(分别取自肺动脉插管和左房插管)行血气分析。
1.2.4 肺组织形态学检查再灌注后取右肺上叶组织，10％甲醛固定24h，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察各组肺组织形态变化。
1.2.5 肺湿／干重比(W／D) 其余右肺组织吸干、称重，置50度烘箱中48h，再称重，计算W／D，估计肺含水量。
1.2.6 测定肺组织中SOD、TNF-a和IL-8含量左肺组织称重，按1：4加入生理盐水，制得20％匀浆，8000rmin-1离心10min，取上清液，再按1：9加入生理盐水稀释到2％，测定SOD、TNF-a和IL-8含量。
1.3 统计学处理
实验数据结果表示。血气指标采用简单方差分析，其余指标采用单因素方差分析，组间比较采用方差分析S-N-K法。运用SPSS11.5统计分析软件，P0.05)，而缺血组肺组织W／D(7.43±0.49)与其余两组比较差异有统计学意义(P2)为统计变量，经统 计，实验组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)，而缺血组与其余两组间差异有统计学意义(P0.05)，但明显低于缺血组(P2+通道和Na+／Ca2+转运蛋白等的作用减少Ca2+内流，从而减轻了Ca2+超载所引起的细胞膜、线粒体膜等生物膜的损伤。本实验结果显示，实验组肺组织W／D值明显低于缺血组，光镜观察显示肺包境界比缺血组清晰，肺胞的肿胀程度也较缺血组减轻，证实PCOs的诱导超级化和抑制钙超载作用是肺保护的可能的作用机制。
肺缺血再灌注后氧自由基(ROS)生成增多，消耗大量的SOD，并形成脂质过氧化物酶(LPO)，引起细胞脂质过氧化，破坏膜的正常结构和功能。本实验结果显示，实验组中的SOD活性明显高于缺血组(P
