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【摘要】 目的 更好显示免疫复合物在肾小球肾炎和肾小球病中的形态和定位。方法 采用六胺银套染马松三色染色。结果 能更精确显示肾小球肾炎和肾小球病中各种免疫复合物的形态与定位,并可对肾小球内增生胶原成分区分为Ⅲ型和Ⅳ型。结论 有利于病理医师观察, 对提高肾小球病理诊断及科研工作具一定实用价值。
【关键词】 套染;六胺银染色;马松三色染色;免疫复合物; 肾小球肾炎;肾小球病
Applying double stain of PASM and Masson trichrom to pathological diagnosis of glomerulonephritis and glomerulopathy
DONG Yu,YANG Shi-cong,CHEN Wen-fang,et al.Pathology department of the Frist Hospital Afficiated to Sun Yatsen University Guangdong,Guangzhou,51800,China
【Abstract】 Objective To improve the observation of morphology and location of immune complex in glomerulonephritis and glomerulopathy. Methods Double stain of PASM and Masson trichrom. Results Better morphology and location of immune complex were shown in glomerulonephritis and glomerulopathy. And the more, proliferative collegen in the glomeruli can be divided into III and IV types. Conclusion It is a useful method for improving diagnosis and research of glomerulonephritis and glomerulopathy.
【Key words】 Double stain;PASM stain; Masson trichrome stain; Immune complex;Glomerulonephritis; Glomerulopathy
作者单位:510080 广州市中山大学附属第一医院病理科
免疫复合物在肾小球基底膜中沉积的形态和定位在各种肾小球肾炎和肾小球病的鉴别诊断中很重要,传统的六胺银染色是用HE染色复染的,不利于观察肾小球中的免疫复合物的形态和定位,我们使用六胺银套染马松三色染色,结果较为满意,现将方法介绍如下。
1 材料与方法
1.1 本院送检肾穿或移植肾组织。所有肾组织均用10%缓冲中性甲醛固定,Bousin氏液、常规脱水、透明、浸蜡和包埋,切片均厚约2u。
1.2 染色方法
1.2.1 切片脱蜡至水,蒸馏水洗。
1.2.2 1%高碘酸氧化15 min,水洗,蒸馏水洗。
1.2.3 8%铬酸加强氧化30 min,水洗,蒸馏水洗。
1.2.4 1%偏重亚硫酸钠1 min,水洗,蒸馏水洗。
1.2.5 新鲜配制六胺银溶液(六胺银贮备液10 ml、四硼酸钠2 ml、蒸馏水20 ml),预热至60℃,切片放入六胺银溶液中15~20 min。
1.2.6 取出切片,蒸馏水洗,0.1%氯化金调色2 min,显微镜下控制,蒸馏水洗。
1.2.7 3%硫代硫酸钠处理2 min,水洗。
1.2.8 天青石兰媒染5 min,水洗。
1.2.9 May’s苏木素5 min,水洗。
1.2.10 促蓝液返蓝1 min,水洗。
1.2.11 蒸馏水洗,丽春红约30 s,蒸馏水洗。
1.2.12 1%磷钼酸处理5 min。
1.2.13 各级酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
2 结果
肾小球基底膜呈黑色细丝状,免疫复合物呈红色,胞核紫蓝色,胞质和红细胞呈红色(如下图)。
3 讨论
病理诊断是疾病和病变的最后诊断,诊断的准确性有赖于制作良好的组织切片,包括常规的HE染色、特殊染色和免疫组化。通过光镜检查可以显示肾组织的各种细胞基底膜间质、血管、特殊蛋白的沉积和各种病变。在肾脏病理诊断中,特殊染色是必不可缺少的辅助诊断方涉。
免疫复合物是肾炎抗原刺激身体产生抗体,抗原和抗体在血循环中形成循环免疫复合物,在短时间内形成大量小分子量免疫复合物。在六胺银和马松三色混合染色里免疫复合物又称嗜复红蛋白,可呈现团块状、条带状、颗粒状,可沉积于肾小球的系膜区、基底膜的内皮上和上皮下。免疫复合物的形态和沉积部位对区分各种肾小球肾炎和肾小球病有重要考价值。
①膜性肾小球肾炎:可见上皮下多数嗜复红蛋白沉积;②系膜增生性肾小球肾炎:可见增宽的系膜区有嗜复红蛋白沉积;
③毛细血管内增生性肾小球肾炎:可见基底膜外侧或上皮细胞下有稀疏的团块状嗜复红蛋白沉积;④膜增生性肾小球肾炎:可见系膜区和基底膜的内皮细胞下嗜复红蛋白沉积(Ⅰ型),有时系膜区、内皮下和上皮下均可见嗜复红蛋白沉积,导致基底膜呈钉突状改变(Ⅲ型);⑤狼疮性肾炎:可见大量嗜复红蛋白在毛细血管内皮下的条带状沉积,导致基底膜严重增厚和僵直,有如铁丝环或白金耳样改变;⑥IgA肾病:在系膜区出现大块状、凸向肾小囊腔的嗜复红蛋白沉积。
传统的六胺银染色是用HE染色复染的。不利于观察肾小球中的免疫复合物,而改良的六胺银和马松三色混合染色,由于基底膜的钉突形成、睫毛状改变、双轨和多轨改变可精确显现,所以有否免疫复合物的沉积以及免疫复合物的定位更为精确,而且对肾小球内增生胶原成分可区分Ⅲ型和Ⅳ型。病变部位亦易于被识别。故在肾脏病理诊断以及科研工作上具有一定的实用价值。
参 考 文 献
[1] 邹万忠.肾活检病理学.北京大学医学出版社,2006:249-253.
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