【www.zhangdahai.com--师德师风建设】
摘 要 目的：同时测定27批栀子药材中栀子苷和西红花苷－1的含量。方法采用RP－HPLC法，Shimpack VP－ODS柱，水－甲醇梯度洗脱，检测波长440 nm。结果和结论 该方法简便、准确、重复性好，可同时测定栀子中西红花苷－1和西红花总苷含量。�
关键词 RP－HPLC 栀子 西红花苷－1 西红花总苷��
中国药典2005版规定栀子入药主要是茜草科植物栀子（Gardenia jasmjnoides Ellis.）的果实，除此之外，各地均以栀子的变种小果栀子（ G. jasminoides Eills. var. radicans Makino.）大花栀子(G．jasminoides Ellis. Var. grandiflora Nakai.)的果实入药。栀子主要有效成分为多种环烯醚萜苷类化合物和西红花苷类化合物，西红花苷类化合物，即西红花酸与不同糖基结合的一系列酯苷，西红花苷－1是主要成分。西红花苷类化合物是公认的对心血管系统有明显作用的化合物，然而，目前的栀子药材和栀子制剂对西红花苷类成分未进行控制［1］。由于药材栀子来源于多种植物，其品种不同，质量优劣差异很大，各种文献对其各个变种品质评价不一致，笔者选择了二十七批栀子，用反相高效液相色谱法（PR－HPLC），以西红花苷－1对照品为标准对样品中西红花苷－1、西红花总苷含量进行测定，为栀子的优选提供科学依据。�
1 仪器与试剂�
1．1 仪器与试剂�
Shimadzu LC－10ATvp高效液相色谱仪(LC－10ATvp泵、SPD－lOAvp紫外检测器、CTO－10Asvp柱温箱、SCL－10Avp系统控制器、Class－vp色谱工作站)，Shimpack VP－ODS柱(150mm×4．6mm,5μm，日本岛津)；BIY21lD电子天平(Sartorius，十万分之一)；KQ32OO超声波清洗器(昆山超声仪器厂)；TU－1810型紫外分光光度计(普析通用)。西红花苷－l对照品(自制)，经过UV、IR、．1HNMR、13CN．MR、MS鉴定，HPLC测得含量为97％ ；西红花苷类化合物A、B、C、D自制，TLC为一个斑点。甲醇为HPLC级（浙江黄岩三力化工厂）；其余试剂为分析纯；水为双重蒸馏水(自制)。栀子药材来源见表l，经张浩教授鉴定。�
1．2 溶液的制备�
栀子药材5O℃减压干燥24h，粉碎，过2O目筛，精密称取0．1g，置具塞锥形瓶中，精密加入水：甲醇(48：52)30ml，密塞。超声处理20min，放冷，滤过，精密量取续滤液5ml，置l0ml量瓶中，加水：甲醇(48：52)定容，摇匀，即得供试品溶液。离心，冰箱冷藏备用。�
精密称取西红花苷－1对照品3．9mg，加流动相（水：甲醇＝48：52）溶解定容至10ml，摇匀，配成390μg/ml标准品储备液。取2．5ml加流动相（水：甲醇＝48：52）稀释至98μg/ml, 作为西红花苷－1对照品溶液。所有对照品溶液冰箱中冷藏。�
1．3 色谱条件�
本实验对流动相的组成、流动相的酸度、柱温、检测波长等进行了考察。确定色谱条件如下：色谱柱：Shimpack VP－ODS柱(150mm×4．[KG-20x]6mm,5μm，日本岛津)；流动相：水―甲醇梯度洗脱(48：52至20：80)；洗脱时间50min；检测波长为440nm［2］；流速为1ml/min；柱温为35℃；进样量10μl。以西红花苷－1为对照品，采用外标法峰面积定量。在此条件下，样品中的被测组分与其他峰均能达到基线分离，西红花苷－1的保留时间为8min左右，化合物A、B、C、D（西红花苷类）的保留时间分别为15min、28min、33min、38min左右（图1）。�
1．4方法学考察�
1．4．1 标准曲线的制备 取西红花苷－1对照品溶液，按上述色谱条件，分别进样1、2、4、8、12、16μl，测定西红花苷－1峰面积，记录峰面积，测定三次，取平均值，结果以进样量(μl)为横坐标，以峰面积为纵坐标，得线性回归方程为：y=636692．88x-35921．094，R．2=0．99998，结果表明：西红花苷－1的进样量在范围0．098－0．1568μg时与峰面积呈良好线性关系，可用外标法峰面积定量计算含量。�
1．4．2 精密度试验
精密吸取同西红花苷－1对照品溶液，连续测定6次，每次进样10μl，测得西红花苷－1峰面积的RSD=1．005%，结果表明仪器精密度良好。�
1．4．3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，连续三天进样，每天进样两针，按上述色谱条件测得西红花苷－1峰面积的RSD=1．4238%；结果表明溶液稳定性良好。�
1．4．4 重复性试验 平行制备5份同批供试品溶液，按上述色谱条件测得西红花苷－1峰面积的RSD=0．4636%。�
1．4．5 加样回收试验 精密称取已知含量的供试品定量，西红花苷－l对照品配置成供试品溶液进行测定，汁算回收率。西红花苷－l的平均回收率为100．6%（n=5），RSD=2．05% �
1．5供试品的测定�
按“1．2”项制备供试品溶液，对不同产地、品种共二十七批栀子药材进行测定，以西红花苷－1为对照品，计算西红花苷－1和西红花总苷的含量。结果见表1。
2 讨论�
1.实验建立的测定西红花苷－1、西红花总苷的反相高效液相色谱法精密度高、准确性好。不仅可作为栀子的含量测定的常规检验方法，也可作为栀子制剂中西红花苷－1、西红花总苷含量测定方法，以全面控制栀子制剂的质量。�
2.流动相的选择：本实验对甲醇、水、pH值进行了反复的比较，最终确定水－甲醇梯度洗脱为最佳洗脱系统。�
3.测定结果表明，栀子及其变种小果栀子、大花栀子的西红花苷－1、西红花总苷平均含量有差异，以大花栀子含量最高。但每个品种均有远远高于平均值的样品，因此，品种不是影响含量的唯一因素。�
参考文献
1 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：化学工业出版社，2005.173 �
2 曹敏，陈玉英.栀子药材西红花苷类HPLC指纹的研究［J］.中国新药杂志，2003.12(7)：553�
(收稿日期：2007年10月10日)
“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文”
