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摘 要：目的：评价没药微米粉末、血竭微米粉末对肛肠病术后疼痛模型的镇痛效果及安全性，并对其镇痛作用机理进行初探。方法：分别采用小鼠热板法和小鼠扭体法，与空白组、阿司匹林组、盐酸曲马多组对照，观察实验药物的躯体镇痛效果；建立小鼠肛肠病术后疼痛模型，采取酶联免疫吸附试验（ELISA）对该模型小鼠血清中前列腺素E2（PGE2）和β-内啡肽（β-EP）测定，研究其镇痛作用及镇痛机制；以急性皮肤粘膜刺激性实验观察药物局部外用的毒性与不良反应。结果与结论：没药、血竭微米粉末均具有明确的躯体镇痛作用；没药微米粉末喷洒对肛肠病术后疼痛模型具有明确的镇痛作用，其作用与盐酸曲马多原料药外用相当；血竭微米粉末也具有镇痛作用，与阿司匹林原料药外用的效果相当；本实验未发现没药、血竭微米粉末对小鼠皮肤粘膜有急性刺激作用。没药微米粉末的镇痛机理可能与提高神经激素β-EP的含量，发挥中枢镇痛作用有关；血竭微米粉末的镇痛机理可能与抑制PGE2合成有关。
关键词：原创性；单味镇痛中药；微米粉末；喷洒；肛肠病术后；疼痛；实验研究
中图分类号：R283文献标识码：A文章编号：1673-2197（2008）09-0024-03
宋金元时期（公元960~1368年），《开宝本草》首次明确提出没药“主破血止痛”，血竭“主心腹猝痛……止痛生肉”，指明了宋金元原创性单味镇痛中药即：没药、血竭。
1 材料与方法
1.1 实验动物
清洁级昆明种小白鼠，体重为18～22g(由湖南中医药大学动物实验中心提供)，动物合格证：scxk（湘）2004-0005。
1.2 实验试剂与器材
PGE2ELISA试剂盒（上海森雄科技实业有限公司进口分装，批号：0711111）；β-EP ELISA试剂盒（BPB Biomedicals，Inc.USA，湖南晶科生物试剂有限公司原装进口，批号：70621S）；三用恒温水箱（浙江省余姚市检测仪表厂生产，浙制02810175）；Thermo multiskanink3酶标仪（美国热电-芬兰雷勃酶标仪MK3）。
1.3 实验药物
没药微米粉末（D50=11.68μm，D90=56.40μm），血竭微米粉末（D50=6.92μm，D90=32.52μm），均由湖南中医药大学教育部工程技术研究中心提供；阿司匹林原料药，山东新华制药股份有限公司生产，国药准字号：H37020354，批号：07200；盐酸曲马多原料药，中国科学院分装，标准：EP 5.0，批号：070227；参照《中华人民共和国药典》（2005版），没药用量为3～10g，临床常用量为10g；血竭用量为1～2g，临床常用量为2g。实验药物剂量均根据其临床常用量为基准计算（剂量换算参考人和动物按体表面积折算的等效剂量比率表［1］）。
1.4 实验方法及分组
参照文献［1］分别进行小鼠热板法与小鼠扭体法，前者选取雌性小鼠180只，后者选取雌雄各81只，均随机分成9组：空白组（1mL生理盐水）、没药低剂量组（0.03g/只）、没药中剂量组（0.06g/只）、没药高剂量组（0.12g/只）、血竭低剂量组（0.005g/只）、血竭中剂量组（0.01g/只）、血竭高剂量组（0.02g/只）、阿司匹林组（0.0016g/只）、盐酸曲马多组（0.0002g/只）。
肛肠病术后疼痛模型参考Milligan-Morgan痔手术的操作方法［2］造模，肛周创面约0.5cm×0.5cm大小。造模成功小鼠，随机选取80只分为5组，每组16只，分别为模型对照组（适量面粉）、没药高剂量组（0.12g/只）、血竭高剂量组（0.02g/只）、阿司匹林组（0.0016g/只）、盐酸曲马多组（0.0002g/只）。与随机选取的16只正常小鼠（正常对照组，适量面粉），均以无菌棉签粘取各药粉末均匀洒于创面，每天给药2次，3天后分别采集各组小鼠眼眶静脉血，分离血清，测定PGE2和β-EP（ELISA法）。
参照文献［3］进行急性皮肤粘膜刺激性实验，小鼠64只，雌雄各半，随机分为两组：没药高剂量组（0.12g/只）、血竭高剂量组（0.02g/只）。按皮肤粘膜刺激性反应评分标准进行评分［3］。
1.5 统计方法
计量资料以±s表示，采用SPSS15.0统计软件进行统计分析。
2 结果
2.1 小鼠热板法
如表1，高剂量没药、血竭微米粉末对小鼠痛阈提高率均有不同程度的影响（P0.05）。
2.2 小鼠扭体法
注：与空白组比较，*P0.05），后者与阿司匹林原料药作用相当（P>0.05）。
2.3 肛肠病术后疼痛模型实验
注：与模型对照组比较，*P0.05）。高剂量血竭微米粉末仅能影响PGE2的含量，与阿司匹林原料药作用相当（P>0.05）。
2.4 急性皮肤粘膜刺激性实验
如表4、表5，用药前后小鼠体重相当，差异无统计学意义（P>0.05），肉眼观察未见皮肤粘膜出现红斑、水肿、渗出等异常，观察小鼠全身情况未见中毒表现，病检亦未见异常，表明两种实验药物局部外用对皮肤粘膜无急性刺激作用。
3 讨论
没药是吗啡发现之前常用的镇痛药，意大利科学家从没药中提取三种倍半萜烯成分，经实验证明至少有两种成分具有强烈镇痛作用［4］。其中呋喃桉叶烷-1，3-二烯和莪术烯通过作用于中枢神经系统的阿片受体，起到强烈镇痛作用，可被纳洛酮阻断［5］；热敏呋喃二烯重排后是呋喃榄香烯，该化合物和其它相关的呋喃倍半萜与没药的镇痛作用也有一定关系［5］。本次实验证实了没药微米粉末的强烈镇痛作用，灌胃给药既可抑制热刺激引起的疼痛，也可抑制化学刺激性疼痛；喷洒用药可降低PGE2的含量，提高β-EP的含量，从而对肛肠病术后创面疼痛起到较强的镇痛作用。β-EP是目前公认的疼痛抑制性神经递质［6］，主要作用于阿片受体，本次实验结果提示没药微米粉末的镇痛机制可能与提高β-EP含量，使其作用于阿片受体而产生强烈的中枢镇痛作用有关。PGE2的含量降低可能是由于没药微米粉末的强烈镇痛作用使小鼠疼痛减轻，PGE2代谢后未继续产生所致，并非药物外周镇痛机制的体现。
龙血竭主要含有黄酮类、皂苷类、芪类、酚类、有机酸、酯类和挥发油等成分［7］，血竭皂甙是合成肾上腺皮质激素的原料，有较强的抗炎镇痛作用，能明显减轻创面疼痛［8］。林启云［9］、曾雪瑜［10］等的实验均表明，国产血竭具有抗炎镇痛作用。另有研究表明国产血竭的抗炎镇痛药理作用与其改善局部微循环、抑制血小板聚集和降低血液粘度等药理机制有关［11］；谢文等［12］研究也表明，国产血竭有明显的镇痛和抗炎作用，且对二甲苯部位PGE2和腹腔注射醋酸后腹腔液PGE2的释放有明显的抑制作用。本次实验也证实了血竭微米粉末的抗炎镇痛作用，喷洒用药能降低血清中PGE2的含量，从而对肛肠病术后创面疼痛产生抑制作用。PGE2是重要的致痛炎症介质，疼痛时中枢及外周含量上升，术前或术后的有效镇痛可使其降低。本次实验结果中血竭微米粉末对血清中PGE2的降低，提示血竭微米粉末的镇痛的机制可能和抑制PGE2合成有关。然而越来越多学者认为血竭的镇痛作用不仅与抗炎有关，马全顺［13、14］等的实验证明了血竭总黄酮是血竭发挥镇痛作用的有效部位，刘向明［15］等则认为龙血素B可能是其发挥镇痛作用的主要成分，通过直接干预初级感觉传入神经元的痛觉信息传入而产生镇痛作用。本次实验尚未涉及到此方面，今后可做进一步深入研究。
没药、血竭微米粉末喷洒对肛肠病术后创面的镇痛作用，分别与盐酸曲马多、阿司匹林原料药外用相当，证实了没药、血竭微米粉末具有较强的镇痛作用，且没药较血竭镇痛作用更强。而没药微米粉末能在本实验中显示出与盐酸曲马多外用相当的强烈镇痛作用，与其本身的镇痛机制有关，也可能与创面直接给药有关。盐酸曲马多为中枢性镇痛药，中枢给药或肌注效果较好，创面给药吸收利用相对较差；而没药、血竭等中药含有挥发油，具有良好的透皮吸收作用［16、17］，加上中药微米粉末粒径微小，创面直接给药的吸收利用更好，故能显示出较强的镇痛作用。
综上所述，实验表明宋金元原创性单味中药微米粉末―没药微米粉末及血竭微米粉末喷洒对肛肠病术后创面镇痛是安全有效的，且没药微米粉末的镇痛作用强于血竭微米粉末。
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（责任编辑：陈涌涛）
