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摘 要:目的:改进和优化动物细胞染色体的临时制片技术｡方法:临时制片法｡结果:实验效果较佳,制片成片率较高,染色体分散得较好,结果稳定｡
关键词:染色体 改进 优化
为了能获得更好的小白鼠骨髓细胞及睾丸细胞染色体标本，本实验对小白鼠骨髓细胞及睾丸细胞染色体标本的制备方法进行了研究，经改进和优化后的实验步骤试进行操作,均可以获得较佳实验结果,改变了以往一只小白鼠只取一种器官(睾丸或骨髓)制作染色体标本的方法,使实验动物得到了最大限度的应用｡扩大了学生知识面,丰富提高了学生动手能力｡
1 材料与方法
1.1 材料 取健康昆明雄性小鼠一只,体重18～20g,取材前3-4h腹腔注射秋水仙素(4ug/g体重),颈椎脱臼处死小鼠,取其股骨､睾丸[1]｡
1.2 小白鼠睾丸染色体制备方法 取小鼠睾丸剥去外膜,放入试管,加5ml 0.4%KCl 低渗处理20min,取出,加新配制固定液(甲醇3:冰醋酸1)3ml,反复挤压､吹打曲精小管,预固定10min取上清夜,同法再固定一次,取上清液,1000r/min离心7min，去上清液｡加1ml 固定液制成细胞悬液,冰片滴干,文火微烤3～5秒,Giemsa染液染色10min,镜检｡
1.3 小白鼠骨髓染色体制备方法 取小白鼠骨髓放入试管,加5ml 0.4%KCl于37℃水浴低渗处理20min,1000r/min离心5min，取出加新配制固定液(甲醇3:冰醋酸1)2ml､预固定10min,1000r/min离心10min，去上清液｡同法再固定一次,去上清液,加1ml固定液制成细胞悬液,冰片滴干,文火微烤3-5秒,Giemsa染液染色10min,镜检｡
2 结果
2.1 小白鼠睾丸染色体在高倍镜下,前期分裂相多,线条清楚,细胞膨胀均衡,中期相相对少,但形态清楚,易于记数(图1)｡
2.2 小白鼠骨髓染色体 在高倍镜下,前期分裂相少,前期细胞小,中期分裂相多,染色体易于观察记数｡这与项维等[1]报道相似(图2)｡
2.3 小鼠睾丸及骨髓染色体标本制备实验结果比较见表1､表2,经比较知改进后的实验方法的制片成片率比传统实验方法制片成片率明显提高｡
2.4 实验方法改进及优化前后的比较见表3､表4｡
3 讨论
小鼠的重量､低渗液KCl的浓度､低渗时间､染色时间都影响实验的结果｡以同一雄性小白鼠为获得目标对象,以其睾丸及骨髓分别取材制备染色体标本,经优化后的实验步骤进行操作,均可获取较佳实验结果｡本教学研究改变了以往一只小白鼠只取一种器官(睾丸或骨髓)制作染色体标本的方法,使实验动物得到了最大限度的应用,节约了实验动物数量｡经改进和优化的实验可以使学生利用动物不同的器官制备染色体标本,扩大了学生的知识面,提高了学生的动手能力,提高了实验教学质量｡
参考文献
1项维,吕群,江绍慧,等.增加动物骨髓细胞有丝分裂相的新方法[J].细胞生物学杂志,1980,2(4):25
(收稿日期:2007.12.3)
